一種新的多肽——人組織陰離子轉運多肽10和編碼這種多肽的多核苷酸制造技術

本發明專利技術公開了一種新的多肽－人組織陰離子轉運多肽１０，編碼此多肽的多核苷酸和經ＤＮＡ重組技術產生這種多肽的方法。本發明專利技術還公開了此多肽用于治療多種疾病的方法，如惡性腫瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各類炎癥等。本發明專利技術還公開了抗此多肽的拮抗劑及其治療作用。本發明專利技術還公開了編碼這種新的人組織陰離子轉運多肽１０的多核苷酸的用途。（*該技術在2020年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于生物
，具體地說，本專利技術描述了一種新的多肽--人組織陰離子轉運多肽10，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本專利技術還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。肝細胞能夠通過肝基底外側細胞從肝竇狀血小管攝取大量不同的親脂性組織陰離子如多種膽汁陰離子與甾族復合物，鈉離子依賴性與非鈉離子依賴性的轉運系統位于肝基底外側細胞質膜區域上，與牛磺酸(或甘氨酸)結合的膽酸通過鈉離子-牛磺膽酸協同轉運多肽(NTCP)優先地被肝細胞攝取，這在鼠與人肝細胞中均發現(Hagenbuch B et al.,1991)。另一方面，肝細胞對非膽酸結合狀態的組織陰離子的攝取是通過非鈉離子依賴性的載體獨特性地進行，這些載體可能包括膽汁轉運激酶(37KD)、四溴酚酞磺酸鈉和膽紅素結合蛋白(55KD)、一種特殊的組織陰離子結合蛋白(55KD)(Tiribelli C.,1990；Berk PD etal.,1987；Wolkoff AW et al.,1993)，此外已被克隆的鼠與人肝組織陰離子轉運多肽74亦進行非鈉離子依賴性的組織陰離子如四溴酚酞磺酸鹽、膽酸鹽、牛磺膽酸鹽、甘氨膽酸鹽、脫氧牛磺膽酸鹽等的轉運(Jacquemin Eet al.,1994)。人肝組織陰離子轉運多肽(OATP)74基因由2792個核苷酸組成，含16個堿基對的聚腺苷酸尾，它的起始位點在第54個核苷酸處，其開放讀框序列延伸超過2010個核苷酸，編碼一個含670個氨基酸分子量為74KD的含8個潛在N-糖基化位點的蛋白。人肝組織陰離子轉運多肽74的序列提示蛋白含有10-12個跨膜區域、8個N-糖基化位點，其中的4個N-糖基化位點位于跨膜結構域9-12的大的親水嚕噗上(Kullak-Ublick et al.1995)。人肝組織陰離子轉運多肽74與鼠組織陰離子轉運多肽74非常密切，兩者有67％的同源性、82％的相似性，鼠組織陰離子轉運多肽74可能含有10個跨膜結構域、4個N-糖基化位點(JacqueminEet al.,1994)，兩者很可能均屬組織陰離子轉運多肽基因家族(Kullak-Ublicket al.1995)。以人肝OATP互補RNA為探針，Northern雜交分析顯示來自人肝臟、腦、肺、腎、睪丸的mRNA的交叉激活。進一步的研究顯示高強度的雜交信號在人腦全mRNA、肝臟mRNA、腎mRNA中出現，并且一些數據提示人OATP在許多組織中以多種形式出現，主要表現為分子量的大小。人OATP在人體總的組織陰離子轉運上起著重要作用。人肝OATP在肝外多種組織的存在暗示了總體上它在人體組織的陰離子跨上皮運輸中的重要作用(Kullak-Ublick et al.,1995)。本專利技術的人的組織陰離子轉運多肽10基因，其結構域相似于組織陰離子轉運多肽基因家族的特征性結構域---10-12個跨膜結構域、4-8個N-糖基化位點，其中的數個N-糖基化位點位于跨膜結構域的大的親水嚕噗上。基于以上各點，故認為本專利技術的新基因為一編碼人組織陰離子轉運多肽基因家族的基因，命名為人組織陰離子轉運多肽10。并以此推斷其結構域與組織陰離子轉運多肽基因家族結構域相似，具有相似的生物學功能。通過基因芯片的分析發現，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細胞株、LPS+的Ecv304細胞株胸腺、正常成纖維細胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本專利技術的多肽的表達譜與人組織陰離子轉運多肽的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本專利技術被命名為人組織陰離子轉運多肽10。由于如上所述人組織陰離子轉運多肽10蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人組織陰離子轉運多肽10蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人組織陰離子轉運多肽10蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。本專利技術的一個目的是提供分離的新的多肽--人組織陰離子轉運多肽10以及其片段、類似物和衍生物。本專利技術的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。本專利技術的另一個目的是提供含有編碼人組織陰離子轉運多肽10的多核苷酸的重組載體。本專利技術的另一個目的是提供含有編碼人組織陰離子轉運多肽10的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。本專利技術的另一個目的是提供生產人組織陰離子轉運多肽10的方法。本專利技術的另一個目的是提供針對本專利技術的多肽--人組織陰離子轉運多肽10的抗體。本專利技術的另一個目的是提供了針對本專利技術多肽--人組織陰離子轉運多肽10的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。本專利技術的另一個目的是提供診斷治療與人組織陰離子轉運多肽10異常相關的疾病的方法。本專利技術涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本專利技術還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體(a)編碼具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種(a)具有SEQ ID NO:1中734-1012位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-2056位的序列。本專利技術另外涉及一種含有本專利技術多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉化、轉導或轉染的宿主細胞；一種包括培養所述宿主細胞和回收表達產物的制備本專利技術多肽的方法。本專利技術還涉及一種能與本專利技術多肽特異性結合的抗體。本專利技術還涉及一種篩選的模擬、激活、拮抗或抑制人組織陰離子轉運多肽10蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本專利技術的多肽。本專利技術還涉及用該方法獲得的化合物。本專利技術還涉及一種體外檢測與人組織陰離子轉運多肽10蛋白異常表達相關的疾病或疾病易感性的方法，包括檢測生物樣品中所述多肽或其編碼多核苷酸序列中的突變，或者檢測生物樣品中本專利技術多肽的量或生物活性。本專利技術也涉及一種藥物組合物，它含有本專利技術多肽或其模擬物、激活劑、拮抗劑或抑制劑以及藥學上可接受的載體。本專利技術還涉及本專利技術的多肽和/或多核苷酸在制備用于治療癌癥、發育性疾病或免疫性疾病或其它由于人組織陰離子轉運多肽10表達異常所引起疾病的藥物的用途。本專利技術的其它方面由于本文的技術的公開，對本領域的技術人員而言是顯而易見的。本說明書和權利要求書中使用的下列術語除非特別說明具有如下的含義“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因組或合成的DNA或RNA，它們可以是單鏈或雙鏈的，代表有義鏈或反義鏈。類似地，術語“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白質序列及其片段或部分。當本專利技術中的“氨基酸序列”涉及一種天然存在的蛋白質分子的氨本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種分離的多肽－人組織陰離子轉運多肽１０，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、類似物或衍生物。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：毛裕民，謝毅，
申請(專利權)人：上海博德基因開發有限公司，
類型：發明
國別省市：31[中國|上海]