一種新的多肽——外動力蛋白臂Dhclalpha47和編碼這種多肽的多核苷酸制造技術

本發(fā)明專利技術公開了一種新的多肽－外動力蛋白臂Ｄｈｃｌａｌｐｈａ４７，編碼此多肽的多核苷酸和經ＤＮＡ重組技術產生這種多肽的方法。本發(fā)明專利技術還公開了此多肽用于治療多種疾病的方法，如纖毛、絨毛運動障礙性疾病，惡性腫瘤，血液病，發(fā)育紊亂癥，ＨＩＶ感染，免疫性疾病和各類炎癥等。本發(fā)明專利技術還公開了抗此多肽的拮抗劑及其治療作用。本發(fā)明專利技術還公開了編碼這種新的外動力蛋白臂Ｄｈｃｌａｌｐｈａ４７的多核苷酸的用途。（*該技術在2020年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于生物
，具體地說，本專利技術描述了一種新的多肽--外動力蛋白臂Dhclalpha47，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本專利技術還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。纖毛和鞭毛的運動來源于軸線動力蛋白，一個將ATP水解能量轉移至外部相鄰雙微管并使之產生滑動的一個機械化學酶蛋白家族。軸線動力蛋白可分為兩類，外動力蛋白臂和內動力蛋白臂。它們在產生個傳播鞭毛波浪運動方面有不同的功能。外動力蛋白臂為鞭毛敲打提供能量，而內動力蛋白臂則是鞭毛和纖毛正常運動所必須的。Chlamydomonas外動力蛋白臂是目前為止研究得最透徹的動力蛋白復合體。它由3條動力蛋白重鏈(Dhc)(α,β,γ)，兩個中等鏈(IC)，和幾條輕鏈(LCs)(＜20kD)以及一些24納米長的軸線。外動力蛋白臂Dhcs在中心區(qū)域和C末端區(qū)域有最大的同源性。Dhc的這些區(qū)域形成一個球狀頭部結構域能與雙微管瞬間反應與過橋循環(huán)。多變N末端形成一個可彎曲性干結構域，該結構域延伸至動力蛋白臂的基底和同型特異性IC和LC亞基。IC參與外臂復合體的集合和以ATP不敏感性外部雙微管結合。LC亞基則被認為是參與運動調節(jié)。內動力蛋白臂在總體結構上與外動力蛋白臂相似，但成分和功能方面都要復雜得多。內動力蛋白臂大約有8條不同的Dhcs，按照組成IC的特異性可分為7種一條有兩個頭的isoform(I1)和6條一個頭的isoform(I2和I3)。關于在軸線中哪一條Dhc與特異性定位有關這個問題還不知道。我們著眼于Dhc1α在內動力蛋白臂I1 isoform的集合和靶作用。Dhc1αN末端能夠集合I1復合體的其它成分并將其結合至適當的軸線位置。這表明位于Dhc1αN末端約143kD區(qū)域內的結構域參與特異性亞基內部反應，而這些反應是內動力蛋白臂I1復合體的集合以及靶作用所需要的。電鏡分析表明Dhc1α單體結構域位于I1復合體內部結構。并作用于鞭毛的運動和趨光性行為。這些發(fā)現對于了解控制I1動力蛋白活性的調節(jié)機制是非常重要的。Dhc1α與外動力蛋白臂的β,γ亞基有很大的相似性，并且在N末端也有相似性。Dhc1α的N末端參與特異性IC和LC亞基聯(lián)系。研究發(fā)現表明，I1復合體和外動力蛋白臂都包含相似的IC和LC元件，例如8-kD的LC,Tctex1,Tctex1LCs元件，WD重復包含IC。現在新發(fā)現的Dhc1α特征序列是位于960-967氨基酸殘基P環(huán)基元GXXXXGKS/T。Dhc1α序列最保守的還是中心區(qū)域和C末端區(qū)域，尤其是P1(第一個ATP水解位點)和P4周圍的氨基酸序列更是保守，P2和P3周圍的氨基酸序列保守性要小一些。盡管Dhc1α的N末端是Dhc1α變化最多的區(qū)域，但還是有一個位于P1前面的二重螺旋結構域。該結構域可能參與Dhc和IC和LC的調節(jié)反應。本專利技術人的多肽與外動力蛋白臂Dhc1α在蛋白水平上有34％的相同性和59％的相似性，并含有外動力蛋白臂Dhc1α相似的特征性序列。基于以上各點，故認為本專利技術的新基因為外動力蛋白臂相似的基因，命名為外動力蛋白臂Dhc1α47，并以此推斷其有相似的生物學功能。由于如上所述外動力蛋白臂Dhclalpha47蛋白在調節(jié)細胞分裂和胚胎發(fā)育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的外動力蛋白臂Dhclalpha47蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新外動力蛋白臂Dhclalpha47蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發(fā)疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。本專利技術的一個目的是提供分離的新的多肽--外動力蛋白臂Dhclalpha47以及其片段、類似物和衍生物。本專利技術的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。本專利技術的另一個目的是提供含有編碼外動力蛋白臂Dhclalpha47的多核苷酸的重組載體。本專利技術的另一個目的是提供含有編碼外動力蛋白臂Dhclalpha47的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。本專利技術的另一個目的是提供生產外動力蛋白臂Dhclalpha47的方法。本專利技術的另一個目的是提供針對本專利技術的多肽--外動力蛋白臂Dhclalpha47的抗體。本專利技術的另一個目的是提供了針對本專利技術多肽--外動力蛋白臂Dhclalpha47的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。本專利技術的另一個目的是提供診斷治療與外動力蛋白臂Dhclalpha47異常相關的疾病的方法。本專利技術涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本專利技術還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體(a)編碼具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種(a)具有SEQ ID NO:1中488-1774位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-2092位的序列。本專利技術另外涉及一種含有本專利技術多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉化、轉導或轉染的宿主細胞；一種包括培養(yǎng)所述宿主細胞和回收表達產物的制備本專利技術多肽的方法。本專利技術還涉及一種能與本專利技術多肽特異性結合的抗體。本專利技術還涉及一種篩選的模擬、激活、拮抗或抑制外動力蛋白臂Dhclalpha47蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本專利技術的多肽。本專利技術還涉及用該方法獲得的化合物。本專利技術還涉及一種體外檢測與外動力蛋白臂Dhclalpha47蛋白異常表達相關的疾病或疾病易感性的方法，包括檢測生物樣品中所述多肽或其編碼多核苷酸序列中的突變，或者檢測生物樣品中本專利技術多肽的量或生物活性。本專利技術也涉及一種藥物組合物，它含有本專利技術多肽或其模擬物、激活劑、拮抗劑或抑制劑以及藥學上可接受的載體。本專利技術還涉及本專利技術的多肽和/或多核苷酸在制備用于治療癌癥、發(fā)育性疾病或免疫性疾病或其它由于外動力蛋白臂Dhclalpha47表達異常所引起疾病的藥物的用途。本專利技術的其它方面由于本文的技術的公開，對本領域的技術人員而言是顯而易見的。本說明書和權利要求書中使用的下列術語除非特別說明具有如下的含義“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因組或合成的DNA或RNA，它們可以是單鏈或雙鏈的，代表有義鏈或反義鏈。類似地，術語“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白質序列及其片段或部分。當本專利技術中的“氨基酸序列”涉及一種天然存在的蛋白質分子的氨基酸序列時，這種“多肽”或“蛋白質”不意味著將氨基酸序列限制為與所述蛋白質分子相關的完整的天然氨基酸。蛋白質或多核苷酸“變體”是指一種具有一個或多個氨基酸或核苷酸改變的氨基酸序列或編碼它的多核苷酸序列。所述改變可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替換。變體可具有“保守性”改變，其中替換的氨基酸具有與原氨基酸相類似的結構或化學性質，如用亮氨酸替換異亮氨酸。變體也可具有非保守性改變，如用本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種分離的多肽－外動力蛋白臂Ｄｈｃｌａｌｐｈａ４７，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、類似物或衍生物。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：毛裕民，謝毅，
申請(專利權)人：上海博德基因開發(fā)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：31[中國|上海]