本發(fā)明專利技術(shù)公開(kāi)了一種新的多肽－鈷胺素結(jié)合蛋白１０，編碼此多肽的多核苷酸和經(jīng)ＤＮＡ重組技術(shù)產(chǎn)生這種多肽的方法。本發(fā)明專利技術(shù)還公開(kāi)了此多肽用于治療多種疾病的方法，如惡性腫瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各類炎癥等。本發(fā)明專利技術(shù)還公開(kāi)了抗此多肽的拮抗劑及其治療作用。本發(fā)明專利技術(shù)還公開(kāi)了編碼這種新的鈷胺素結(jié)合蛋白１０的多核苷酸的用途。（*該技術(shù)在2019年保護(hù)過(guò)期，可自由使用*）
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于生物
，具體地說(shuō)，本專利技術(shù)描述了一種新的多肽——鈷胺素結(jié)合蛋白10，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本專利技術(shù)還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。在真核細(xì)胞中，許多蛋白與結(jié)合并轉(zhuǎn)運(yùn)鈷胺素(Cb1，維生素B12)有關(guān)，已知其中有四種鈷胺素結(jié)合蛋白在高等動(dòng)物包括人類中表達(dá)(1)內(nèi)在因子(IF)，一個(gè)分子量為48KDa的糖蛋白，在多數(shù)動(dòng)物的胃和胰腺中存在。IF能通過(guò)特定的受體介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)吞作用形成IF-Cb1復(fù)合物，從而促進(jìn)Cb1在回腸中的吸收。(2)鈷胺傳遞蛋白Ⅰ(TCⅠ)，也叫R-結(jié)合蛋白，TCⅠ把Cb1從血液運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞。(3)鈷胺傳遞蛋白Ⅱ(TCⅡ)，一個(gè)由人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVE)分泌的分子量為38-43 Kda的血漿蛋白，TCⅡ易化運(yùn)輸Cb1的細(xì)胞攝入，另外，TCⅡ也介導(dǎo)Cb1在回腸中的運(yùn)輸。(4)結(jié)合鈷啉蛋白(HC)，一個(gè)分子量為66 Kda的糖蛋白，存在于大部分分泌液中。HC一般和鈷胺素或鈷胺素衍生物如鈷啉醇酰胺結(jié)合，它的確切功能目前還不十分清楚，可能是阻止一些由細(xì)菌產(chǎn)生的鈷胺素類似物的吸收。雖然上述四種蛋白都與鈷胺素結(jié)合，但Cb1的細(xì)胞攝入?yún)s由不同的受體介導(dǎo)。這些蛋白，尤其是IF和TCⅡ的重要生理功能體現(xiàn)在，當(dāng)這兩種蛋白分泌減少時(shí)，將導(dǎo)致Cb1的缺乏，最后引起巨成紅細(xì)胞貧血和神經(jīng)系統(tǒng)紊亂。這些蛋白是由400個(gè)氨基酸組成的多肽，它們有許多區(qū)域極為相似，這個(gè)保守區(qū)域的特征模式為-V-D-T--A--A-X-L-A--T-C，這些保守區(qū)域?qū)b1的結(jié)合可能是必不可少的，但是，TCⅠ、TCⅡ和IF對(duì)Cb1和Cb1類似物的親和力差異顯示，這些蛋白在配體結(jié)合點(diǎn)的結(jié)構(gòu)不同極可能導(dǎo)致一個(gè)共同遠(yuǎn)祖基因的分歧。由于如上所述鈷胺素結(jié)合蛋白10蛋白在機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過(guò)程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過(guò)程的鈷胺素結(jié)合蛋白10蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新鈷胺素結(jié)合蛋白10蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開(kāi)發(fā)疾病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。本專利技術(shù)的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽——鈷胺素結(jié)合蛋白10以及其片段、類似物和衍生物。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是提供含有編碼鈷胺素結(jié)合蛋白10的多核苷酸的重組載體。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是提供含有編碼鈷胺素結(jié)合蛋白10的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)鈷胺素結(jié)合蛋白10的方法。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是提供針對(duì)本專利技術(shù)的多肽——鈷胺素結(jié)合蛋白10的抗體。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是提供了針對(duì)本專利技術(shù)多肽——鈷胺素結(jié)合蛋白10的模擬化合物、拮抗劑、激動(dòng)劑、抑制劑。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是提供診斷治療與鈷胺素結(jié)合蛋白10異常相關(guān)的疾病的方法。本專利技術(shù)涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本專利技術(shù)還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體(a)編碼具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸；(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種(a)具有SEQ ID NO:1中470-748位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1264位的序列。本專利技術(shù)另外涉及一種含有本專利技術(shù)多核苷酸的載體，特別是表達(dá)載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細(xì)胞，包括轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞；一種包括培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞和回收表達(dá)產(chǎn)物的制備本專利技術(shù)多肽的方法。本專利技術(shù)還涉及一種能與本專利技術(shù)多肽特異性結(jié)合的抗體。本專利技術(shù)還涉及一種篩選的模擬、激活、拮抗或抑制鈷胺素結(jié)合蛋白10蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本專利技術(shù)的多肽。本專利技術(shù)還涉及用該方法獲得的化合物。本專利技術(shù)還涉及一種體外檢測(cè)與鈷胺素結(jié)合蛋白10蛋白異常表達(dá)相關(guān)的疾病或疾病易感性的方法，包括檢測(cè)生物樣品中所述多肽或其編碼多核苷酸序列中的突變，或者檢測(cè)生物樣品中本專利技術(shù)多肽的量或生物活性。本專利技術(shù)也涉及一種藥物組合物，它含有本專利技術(shù)多肽或其模擬物、激活劑、拮抗劑或抑制劑以及藥學(xué)上可接受的載體。本專利技術(shù)還涉及本專利技術(shù)的多肽和/或多核苷酸在制備用于治療癌癥、發(fā)育性疾病或免疫性疾病或其它由于鈷胺素結(jié)合蛋白10表達(dá)異常所引起疾病的藥物的用途。本專利技術(shù)的其它方面由于本文的技術(shù)的公開(kāi)，對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。本說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中使用的下列術(shù)語(yǔ)除非特別說(shuō)明具有如下的含義“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因組或合成的DNA或RNA，它們可以是單鏈或雙鏈的，代表有義鏈或反義鏈。類似地，術(shù)語(yǔ)“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白質(zhì)序列及其片段或部分。當(dāng)本專利技術(shù)中的“氨基酸序列”涉及一種天然存在的蛋白質(zhì)分子的氨基酸序列時(shí)，這種“多肽”或“蛋白質(zhì)”不意味著將氨基酸序列限制為與所述蛋白質(zhì)分子相關(guān)的完整的天然氨基酸。蛋白質(zhì)或多核苷酸“變體”是指一種具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸或核苷酸改變的氨基酸序列或編碼它的多核苷酸序列。所述改變可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替換。變體可具有“保守性”改變，其中替換的氨基酸具有與原氨基酸相類似的結(jié)構(gòu)或化學(xué)性質(zhì)，如用亮氨酸替換異亮氨酸。變體也可具有非保守性改變，如用色氨酸替換甘氨酸?！叭笔А笔侵冈诎被嵝蛄谢蚝塑账嵝蛄兄幸粋€(gè)或多個(gè)氨基酸或核苷酸的缺失?！安迦搿被颉疤砑印笔侵冈诎被嵝蛄谢蚝塑账嵝蛄兄械母淖儗?dǎo)致與天然存在的分子相比，一個(gè)或多個(gè)氨基酸或核苷酸的增加?！疤鎿Q”是指由不同的氨基酸或核苷酸替換一個(gè)或多個(gè)氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的結(jié)構(gòu)、調(diào)控或生物化學(xué)功能的蛋白質(zhì)。類似地，術(shù)語(yǔ)“免疫學(xué)活性”是指天然的、重組的或合成蛋白質(zhì)及其片段在合適的動(dòng)物或細(xì)胞中誘導(dǎo)特定免疫反應(yīng)以及與特異性抗體結(jié)合的能力?！凹?dòng)劑”是指當(dāng)與鈷胺素結(jié)合蛋白10結(jié)合時(shí)，一種可引起該蛋白質(zhì)改變從而調(diào)節(jié)該蛋白質(zhì)活性的分子。激動(dòng)劑可以包括蛋白質(zhì)、核酸、碳水化合物或任何其它可結(jié)合鈷胺素結(jié)合蛋白10的分子。“拮抗劑”或“抑制物”是指當(dāng)與鈷胺素結(jié)合蛋白10結(jié)合時(shí)，一種可封閉或調(diào)節(jié)鈷胺素結(jié)合蛋白10的生物學(xué)活性或免疫學(xué)活性的分子。拮抗劑和抑制物可以包括蛋白質(zhì)、核酸、碳水化合物或任何其它可結(jié)合鈷胺素結(jié)合蛋白10的分子?！罢{(diào)節(jié)”是指鈷胺素結(jié)合蛋白10的功能發(fā)生改變，包括蛋白質(zhì)活性的升高或降低、結(jié)合特性的改變及鈷胺素結(jié)合蛋白10的任何其它生物學(xué)性質(zhì)、功能或免疫性質(zhì)的改變?！盎旧霞儭笔侵富旧喜缓烊慌c其相關(guān)的其它蛋白、脂類、糖類或其它物質(zhì)。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能用標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)純化技術(shù)純化鈷胺素結(jié)合蛋白10?；旧霞兊拟挵匪亟Y(jié)合蛋白10在非還原性聚丙烯酰胺凝膠上能產(chǎn)生單一的主帶。鈷胺素結(jié)合蛋白10多肽的純度可用氨基酸序列分析?！盎パa(bǔ)的”或“互補(bǔ)”是指在允許的鹽濃度和溫度條件下通過(guò)堿基配對(duì)的多核苷酸天然結(jié)合。例如，序列“C-T-G-A”可與互補(bǔ)的序列“G-A-C-T本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種分離的多肽－鈷胺素結(jié)合蛋白１０，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、類似物或衍生物。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：毛裕民，謝毅，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：上海博德基因開(kāi)發(fā)有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：31[中國(guó)|上海]
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