進行血細胞記數(shù)的方法技術

提供了一種評定基本上未稀釋的抗凝全血樣品的組分的方法，該方法包括如下步驟：ａ）提供一個樣品室（１０）；ｂ）將一種敏感著色劑與全血樣品摻和；ｃ）將所述摻和后的樣品放入該樣品室；ｄ）將所述摻和后的樣品靜態(tài)保持一段時間直至在所述樣品內形成紅細胞錢串（３０）和陷窩（３２）；以及ｅ）評定所述陷窩（３２）中存在的靶組分。（*該技術在2019年保護過期，可自由使用*）

【技術實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術涉及分析全血樣品的方法和裝置，并且涉及評定全血樣品中的組分(例如白細胞、血小板等)的方法和裝置。分析血液學中的最近進展已增大了可從患者血樣獲得的信息的數(shù)量和質量。結果，醫(yī)療界在應用患者血樣作為診斷工具方面的興趣也增大了。然而，分析血樣的方法并非在各方面都能跟上可獲得的信息。歷史上，血樣是這樣評定的將少量未稀釋的血液涂抹在載玻片上，干燥，固定和染色，再在顯微鏡下檢測該涂抹物。從這種涂抹物可獲得合理的結果，但數(shù)據(jù)的準確性和可靠性則主要取決于技術員的經(jīng)驗和技術。此外，血液涂抹物既耗人力又使成本過高，所以，一般不利于商用。評定全血樣品的另一已知方法包括稀釋一定體積的全血，將它放入樣品室，然后，人工評定稀釋后樣品中的組成細胞。有必要進行稀釋，因為全血中紅細胞(RBC’s)的數(shù)量和濃度都大大超過其它組成細胞。在來自典型個體的全血樣品中，例如，有大約4．5×106個RBC’s／微升(μl)血樣，但每μl血樣只有大約0．25×106個血小板和0．007×106個白細胞(WBC’s)。要測定WBC數(shù)，必須在大約一份血液比二十份稀釋劑(1∶20)至大約1∶256稀釋度的范圍內稀釋全血樣品，這取決于應用的確切技術，并且，一般還有必要用一種或多種試劑選擇性地溶解RBC’s。溶解RBC’s有效地從視野除去它們，這樣就能看見WBC’s。要測定血小板數(shù)，必須在大約1∶100至大約1∶50，000的范圍內稀釋血樣。不過，血小板計數(shù)不需要溶解樣品中的RBC’s。這種評定全血樣品的方法一個缺點是稀釋過程既費時又昂貴。此外，往全血樣品中添加稀釋劑會增大樣品數(shù)據(jù)的錯誤可能性。一種評定血樣的現(xiàn)代方法是阻抗或光學流式細胞儀。流式細胞儀涉及使稀釋的血樣通過一個或多個小直徑孔循環(huán)，每個孔鄰接一個阻抗型或光學型傳感器，隨著組成細胞通過單行孔，所述傳感器就評定組成細胞。此處又一次必須稀釋血樣以便調節(jié)相對于WBC’s和血小板來說多得多的RBC’s數(shù)。盡管比前述方法更方便且更穩(wěn)定，但流式細胞儀也具有數(shù)個缺點。這些缺點的一些來自需要將樣品帶到傳感器裝置的管道，以及需要控制流過傳感器裝置的流體流速的流體控制器。準確控制樣品流動對操作流式細胞儀來說極為重要。流式細胞儀中的管道可能而且常常會滲漏，很可能危及儀器的準確性和安全性。另一方面，流體流動控制器和稀釋器件需要定期再校準。對再校準的需要說明，就目前很多可獲得的應用流式細胞儀的血液學分析儀來說，存在可能的不準確結果和不希望的操作費用。另一個缺點是需要的試劑量。由于應用大稀釋比率，所以需要相應大量的液體試劑。大試劑量增大了測試費用并引起廢物處理問題。細胞分析的另一種方法是容量毛細管掃描法(volumetric capillaryscanning)，如美國專利Nos．5，547，849和5，585，246中概述的那樣，例如，其中，將相關未稀釋的全血樣品置于已知容積和厚度的毛細管中，當血液呈靜止狀態(tài)時檢測。該方法通過限定掃描波長(在那些波長時RBC’s顯得較透明)處理存在的RBC’s，而且，它需要處理樣品以致RBC’s在檢測過程中不凝聚。所以，該方法限于更長波長熒光的應用，并且，對于RBC’s和血小板的檢測或任何細胞形態(tài)學的檢測沒有保證。需要評定基本上未稀釋的抗凝全血樣品的方法和裝置，所述方法和裝置1)能提供準確的結果；2)在分析前不需要除去RBC’s；3)能應用寬范圍的樣品檢測的光激發(fā)源；4)不應用大量試劑；5)在分析過程中不需要樣品流體流動；6)能分析樣品中的全部或幾乎全部細胞和粒子；以及7)是成本低的。因此，本專利技術的一個目的是提供一種準確評定基本上未稀釋的抗凝全血樣品組分的方法。另一個目的是提供評定全血樣品的方法和裝置，所述方法和裝置不需要很多稀釋。又一個目的是提供評定全血樣品的方法和裝置，所述方法和裝置不需要應用大量液體試劑。又一個目的是提供評定全血樣品的方法和裝置，所述方法和裝置不要求樣品流體在評定過程中流動。又一個目的是提供評定全血樣品的方法和裝置，所述方法和裝置不需要在分析前除去大部分RBC’s。又一個目的是提供評定樣品的方法和裝置，所述方法和裝置能評定樣品中的全部或幾乎全部組分。又一個目的是提供使用簡便的評定全血樣品的方法和裝置。本專利技術涉及用于檢測盛于室內的靜止的、基本上未稀釋的抗凝全血樣品并從該樣品獲取信息的方法和裝置。本專利技術應用的術語“基本上未稀釋的”描述了被不高于約1∶1稀釋(優(yōu)選小得多的稀釋度)的血樣。通常，實施本專利技術方法中將應用的僅有試劑是染料、染色劑和抗凝劑，這些試劑不是為了稀釋樣品而添加的，而是為了產(chǎn)生便利手頭試驗的反應、效果等而添加的。按本專利技術，提供了一種評定基本上未稀釋的抗凝全血樣品的組分的方法，該方法包括如下步驟a)提供一個樣品室；b)將敏感著色劑與全血樣品摻和；c)將摻和的樣品放入樣品室；d)將摻和的樣品在室內保持靜態(tài)直至樣品中形成紅細胞錢串和陷窩；以及e)評定陷窩中分布的靶組分。本說明書中應用的術語“著色劑”被定義為這樣的任意試劑它通過熒光發(fā)射或者通過吸收特定波長的光產(chǎn)生可通過所述裝置定量分析的敏感信號。本專利技術方法的一個優(yōu)點在于，提供了一種評定基本上未稀釋的抗凝全血樣品組分的方法，該方法提供準確信息。具體地說，該方法不需流體流動控制器和樣品稀釋，所以避免了與它們相關的錯誤可能性。本方法的另一個優(yōu)點在于，可以評定抗凝全血樣品中的組分但基本上不需稀釋該樣品。本方法需要往全血樣品中添加較少量的敏感著色劑，于是能使樣品保持基本上未稀釋。從而避免了與稀釋相關的費用和問題。例如，借助本專利技術的方法，可應用與大約10μl用鹽水稀釋的著色劑或小于1μl干試劑摻和的、100μl以內的血樣而獲得有用的信息。又一個優(yōu)點在于，當評定基本上未稀釋的抗凝全血樣品的組分時，本專利技術的方法不需要大量試劑。本領域技術人員將認識到，試劑量的減少有助于減少分析的原料費用和分析后用過的試劑的處理費用。本方法的又一個優(yōu)點在于，不需要樣品流體流動。本方法能使血樣在靜止(或“基本上未運動的”)狀態(tài)下被評定。血樣中僅有的運動將是樣品內構成組分的布朗運動，該運動不妨礙本專利技術裝置的應用。結果，避免了管道滲漏和與這種滲漏相關的任何環(huán)境問題和／或安全問題。此外，在靜止狀態(tài)評定樣品還避免了流體流動控制器的應用，從而免除購買和維護這類控制器的費用。本領域技術人員應認識到，與很多流式細胞儀相關的維護費用是可觀的，所以，免除那些費用是一個明顯的優(yōu)點。根據(jù)如附圖所闡釋的本專利技術最佳實施方案的詳細描述，將使本專利技術的這些和其它目的、特征與優(yōu)點變得明顯。附圖說明圖1是一種樣品室的透視圖。圖2是一種樣品室的剖視圖，它包括傾斜的第二塊平壁。在第一塊壁和第二塊壁之間形成了直通平面(through-plane)厚度梯度。圖3是一種樣品室的剖視圖，它包括位于具有多級梯階的第一塊壁上面的第二塊平壁。所述多級梯階在不同的直通平面厚度提供多個室區(qū)。圖4是一種樣品室的剖視圖，它具有位于第一塊壁上面的第二塊平壁，第一塊壁展示的一個表面與第二塊平壁成一定角度。在第一塊壁和第二塊壁之間形成了直通平面厚度梯度。圖5是一種樣品室的示意圖，它闡釋了在形成紅細胞錢串和陷窩之前的基本上未稀釋的抗凝全血樣品形象化不透明外觀。圖6是一種樣品室的示意圖，它闡釋了在本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術保護點】
一種評定基本上未稀釋的抗凝全血樣品的組分的方法，所述方法包括如下步驟： 提供一個在第一塊壁（１６）和透明的第二塊壁（１８）之間形成的樣品室（１０），所述兩塊壁在所述室的第一區(qū)內隔離第一個直通平面厚度（２０）； 將一種敏感著色劑與樣品摻和，其中，所述著色劑區(qū)分樣品中的一種或多種組分； 將所述摻和后的樣品放入所述室，使所述摻和后的樣品與所述室的所述第一區(qū)內所述第一塊壁和第二塊壁接觸； 將所述摻和后的樣品在所述室內靜態(tài)保持一段時間； 其中，在所述期間，在所述靜態(tài)保存的樣品內形成一個或多個與陷窩（３２）鄰接的紅細胞錢串（３０），并且所述著色劑區(qū)分的組分存在于所述陷窩中；以及 評定所述陷窩中一個或多個視區(qū)（３８）內的所述區(qū)分的組分。

【技術特征摘要】
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【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：斯蒂芬C沃德羅，
申請(專利權)人：斯蒂芬C沃德羅，沃德羅合伙有限公司，羅伯特A利費恩，
類型：發(fā)明
國別省市：US[美國]