診斷用標記物制造技術

包括（ａ）檢測系統，及（ｂ）與該檢測系統結合的下式表示的熒光性官能基的診斷用標記物， ＊＊＊ （式中，Ｒ↑［１］及Ｒ↑［２］分別獨立地表示氫原子、烷基、芳基、烷氧基或磺酸基；Ｒ↑［３］表示烷基、磺酸烷基或氨基取代烷基；根據需要，Ｘ↑［－］表示陰離子種；Ｙ表示碳數１～１０的亞烷基、或含有從氧原子、氮原子及硫原子組成群選出的，１個以上原子的碳數１～１０的亞烷基）。（*該技術在2016年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及診斷用標記物。進一步詳細地說，本專利技術涉及使特異識別癌細胞的抗體等與用對組織障礙性小的經近紅外線或遠紅外線照射激發后發出熒光的特定標記用化合物結合的，可適用于生物體的診斷用標記物。
技術介紹
近年，由于電子內窺鏡的普及，使內窺鏡診斷變得容易，在癌癥早期，可確切地發現胃癌和大腸癌等。進而，對于微小癌的診斷，電子內窺鏡和使用通常的內窺鏡時的診斷能力幾乎相同，這就意味著還未確立活用電子內窺鏡功能的新的診斷方法。對于用通常的內窺鏡不能識別的微小病變，只要用在電子內窺鏡下可檢測的標記抗體，標記微小病變，就可用計算機處理，進行圖像解析，可容易地進行檢測，但這種方法還未實用化。為了確立使用電子內窺鏡的上述診斷方法，需要用免疫組織化學的染色法直接對生物體組織染色。固定化標本的染色法是已經確立的技術。可是，非固定化標本的染色法對于本專業人員還不是可利用的技術。例如，對于非固定化標本的免疫染色法雖然有報告(四國醫學雜志，29，180，1987)但對于使用近紅外線的本領域的切除新鮮標本和生物體組織本身的免疫染色法，還沒有報告。另一方面，對于上述的診斷方法，也需要在電子內窺鏡下可檢測的診斷用標記物(標記化的抗體等)。已知將用紫外線激發，發出紫外·可見光的熒光的標記用化合物與抗體結合的診斷用標記物，廣泛用于檢測存在于摘出生物體外的組織的癌細胞和癌組織?？墒?，使用由紫外線激發的熒光性診斷用標記物的方法，由于紫外線能損傷生物體組織和DNA，所以不適用于生物體。目前，還沒有可直接適用于生物體的診斷用標記物。已知吲哚花青綠(ICG)，在紅外線內窺鏡下，顯示特異的吸收，發出熒光。已知用紅外線內窺鏡，使用吲哚花青綠的例子(Gastroenterological Endoscopy，34，pp.2287-2296，1992；及Gastrointestmal Endoscopy，40，pp 62-2；628，1994)，但任何一個例子都是在血管內投入ICG。另外，一般由于以吲哚花青綠為主的熒光性色素疏水性高，以單體給于腸道內時可快速吸收，所以試圖通過在母環或側鏈部分導入親水性的磺?；龋岣咚苄裕岣邷y定效率，避免吸收后的毒性問題?？墒牵€未發現與吲哚花青綠發出相同熒光的水溶性標記用化合物。本專利技術的目的在于提供對于通過免疫組織化學的染色法直接使生物體組織染色的有用的診斷用標記物。本專利技術另一目的在于提供通過對組織障礙性小的近紅外線乃至遠紅外線照射，發生熒光，可直接用于生物體的診斷用標記物。即，本專利技術的課題在于提供不必擔心由于紫外線激發所引起生物體組織和DNA損傷的、也適用于生物體的診斷用標記物。提供具有這樣特征的，且水溶性優良的診斷用標記物也是本專利技術的目的之一。另外，本專利技術的目的在于提供對于使用紅外線內窺鏡等的準體內的食道癌、胃癌、大腸癌等上皮性組織的惡性新生物及感染癥等早期診斷和外科手術時病灶的確定或診斷上有用的，適用于生物體的診斷標記物。另外，本專利技術另一目的在于提供使用這種診斷用標記物，通過免疫組織化學的染色法，將生物體組織直接染色的方法。專利技術的公開本專利技術者們，通過潛心研究上述課題，合成各種吲哚花青綠的衍生物，成功地制造了通過近紅外線乃至遠紅外線激發，發出熒光的吲哚花青綠衍生物。另外，本專利技術者們發現使用上述的吲哚花青綠衍生物作為標記用化合物，與抗癌抗原體等反應，可制造對生物體直接適用的診斷用標記物，以及這種診斷用標記物，對于通過免疫組織化學的染色法直接染色生物體組織是有用的。進而，本專利技術者們對于提供水溶性優良的診斷用標記物進行潛心研究結果發現，在上述的吲哚花青綠衍生物中，對于可形成分子內抗衡離子(兩性離子)的化合物，由于形成抗衡離子，分子的離子性降低，有損壞水溶性的場合，但是若碘化鈉等與該衍生物作用，在分子內不形成抗衡離子，保持了整個分子的離子性，顯著地增大了水溶性。本專利技術就是基于這些見解而完成的。即，本專利技術提供了包括(a)檢測系統，及(b)結合在該檢測系統上的用下述式(I)表示的熒光性官能基的診斷用標記物， (式中，R1及R2分別獨立地表示氫原子、烷基、芳基、烷氧基或磺酸基；R3表示烷基、磺酸烷基或氨基取代烷基；X-，根據需要，表示陰離子種；Y表示碳數1～10的亞烷基、或含有從氧原子、氮原子及硫原子組成群選出的1個以上原子的碳數1～10的亞烷基)。另外，按照本專利技術的另一個方案，提供包括(a)檢測系統，及(b)結合在該檢測系統上的用下式(II)表示的熒光性官能基的診斷用標記物， (式中，R4及R5分別獨立地表示氫原子、烷基、烷氧基、或磺酸鹽基；R6表示亞烷基；M+表示堿金屬離子；Q-表示鹵離子、高氯酸根離子、或硫氰酸根離子；Y表示碳數1～10的亞烷基、或含有從氧原子、氮原子及硫原子組成群選出的1個以上原子的碳數1～10的亞烷基)。進而，按照本專利技術的另一方案，提供制造上述診斷用標記物有用的化合物，用下述式(III)和用下述式(V)表示的化合物。 (式中，R1及R2分別獨立地表示氫原子、烷基、芳基、烷氧基或磺酸基；R3表示烷基、磺酸烷基或氨基取代烷基；X-，根據需要，表示陰離子種；Z表示由下述式組成群選出的基； W及Y分別獨立地表示碳數1～10的亞烷基、或含有氧原子、氮原子及硫原子組成群選出的1以上原子的碳數1～10的亞烷基)。 (式中，R4及R5分別獨立地表示氫原子、烷基、烷氧基、或磺酸鹽基；R6表示亞烷基；M+表示堿金屬離子；Q-表示鹵離子、高氯酸根離子、或硫氰酸根離子；Z表示由下式組成群選出的基， W及Y分別獨立地表示碳數1～10的亞烷基、或含有從氧原子、氮原子及硫原子組成群選出的1個以上原子的碳數1～10的亞烷基的化合物)。本專利技術也提供了包括使這些化合物和檢測系統結合的工序的上述診斷用標記物的制造方法。另外，提供了包括(a)檢測系統，及(b)結合在該檢測系統上的熒光官能基的診斷用標記物，當用波長600～800nm的激發光照射時，所述官能基發出780nm以上波長的熒光。此外，按照上述各診斷用標記物優選的方案，可提供熒光性官能基與檢測系統直接結合的上述各診斷用標記物；熒光性官能基，通過接頭或者蛋白，與檢測系統結合的上述各診斷用標記物；檢測系統從抗體、核酸及擴增系物質組成群中選出的上述各診斷用標記物；作為抗體，使用抗癌抗原體的上述各診斷用標記物；用于紅外線內窺鏡檢查或外科手術時，確定病灶的上述各診斷用標記物；及通過免疫組織化學的染色法、直接用于染色生物體組織上述各診斷用標記物。另外，提供了含有上述各診斷用標記物作為有效成分的診斷藥。圖的簡單說明附圖說明圖1是表示標記用化合物(化合物18)的紅外線吸收光譜的圖。(A)是通過添加碘化鈉，形成鹽的化合物18的紅外線吸收光譜，(B)是作為原料使用的吲哚花青綠-N-己酸磺基琥珀酰亞胺酯(化合物17)的紅外線吸收光譜。圖2是表示用標記用化合物6和抗EMA抗體結合，得到的本專利技術診斷用標記物(74μg/ml)的紫外·可見光吸收光譜。圖3是表示使標記用化合物18和人體IgG結合的本專利技術診斷用標記物的熒光光譜。圖中，實線表示發光光譜、虛線表示激發光譜。實施專利技術的最佳方案上述用通式(I)及(II)表示的熒光性官能基，通過本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：伊東進，野沢正之，志賀匡宣，佐佐本一美，竹迫和浩，竹內博，
申請(專利權)人：第一化學藥品株式會社，
類型：發明
國別省市：