使血漿中逃逸免疫檢測病毒失活之組合物及其方法技術

本發明專利技術公開了使血漿中逃逸免疫檢測病毒失活之組合物，包括低分子醇和ＴＮＢＰ，其中所述的低分子醇可以是乙醇、丙醇或丁醇，其中低分子醇和ＴＮＢＰ的配比是１－３∶１００。本發明專利技術提供的使血漿中逃逸免疫檢測病毒失活的組合物，可以快速完全地使被膜病毒失活，提供了一種新的使病毒失活的方法，同時擴展了有機溶劑的新用途。（*該技術在2015年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及一種新的使存在于已被感染了的、但通過常規免疫方法對此病毒不發生抗體的輸血者的血漿中的被膜病毒，如存在于供血血漿中的HIV(人體免疫缺乏性病毒)和HCV(肝C病毒)失活之組合物，特別地，本專利技術提供了在天然或合成的去污劑存在的條件下有機溶劑破壞這些病毒的保護性膜的新的用途和方法。Horowitz公開了一種用溶劑和去污劑相結合使病毒失活的方法Mrogenthaler J-J(ed)Virus Inactivation in Plasma Products，CurrStud Hematol Blood Transfus Basel Karger，1989，NO.56，PP83-96.此文揭示了在37℃以下僅用磷酸三正丁酯(TNBP)，殺病毒的能力會被減弱，在此條件下沒有任何一種去污劑(膽酸鈉或Tween-80)是殺病毒的。然而，在37℃時，當TNBP和去污劑共存時卻能獲得優異的殺病毒能力。本專利技術公開了一種新的組合物，即對Horowitz的溶劑和去污劑混合物有引進能力的某些添加劑，這些添加劑的加入會導致在28℃以下更快或更完全地殺死病毒。本專利技術所公開的組合物其配比為組分配比(體積比)低分子醇1-3TNBP100去污劑 適量其中所述的低分子醇可以是乙醇、丙醇或丁醇。另外，所述的去污劑可以是膽酸鈉、Tween-80或Triton-X。去污劑的量與Horowitz溶液所使用的去污劑的量相同。根據本專利技術，已發現在TNBP和去污劑的混合物中加入1至3％的乙醇、丙醇或丁醇，可以在10分鐘內有效地殺病毒，并且溫度可以降至不超過28℃，這對于蛋白質很有利，因為很多蛋白質對熱度性很敏感，因此在前面技術的描述中均要求失活的處理應在30℃以下進行。根據本專利技術，已發現將此組合物接種兔子，會導致形成抗此病毒的抗體。優選實施方案的詳細述為雖然下面描述的實施方案使用乙醇和丁醇，但預期任何數量的部分增水小分子都是有效的，并且這些實施例應被認為僅是用于說明的。化學試劑可從商業供應商處買到，盡可能使用不需要進一步純化的最高級別的化學試劑。這里使用的標記病毒，Sindbis病毒的滴定度，是通過使用原發性雞胚胎細胞的終點滴定和細胞學測定。新鮮冷凍的血漿(FFP)和低溫沉淀物(CYO)由無既往或最近病毒感染的健康個人提供。實施例1在TNBP中加入低分子量醇對病毒失活的效率。將FFP或CYO樣品用Sindbis病毒人為污染，然后將TNBP本身或將加有第一種添加劑(按每100體積份TNBP計的0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0份乙醇)的TNBP(每100份的血漿蛋白溶液中加入一份此TNBP)，在28℃時，加入到蛋白質組分中。一次一次地(在每10分鐘間隔內)等份數地移取溶液使反應通過用5％的小牛血清稀釋至100倍過量的很小Essential Medium Eagle并冷凍而終止，直至量后測定病毒滴定度，發現通過加入乙醇(在TNBP中加入2-3％)，在第一個10分鐘內，病毒失活的程度比僅用TNBP大10倍，其在低溫沉淀中的效果比FFP溶液更為顯著。用第二種添加劑(丁醇、將0.5、1.0、1.5和2.0體積份的丁醇加入到100體積份的TNBP中)。已發現最有效的濃度為1.0至1.5％的丁醇。同樣使用添加劑的TNBP在28℃時的靈活的效果比不使用醇的TNBP增加約10倍。實施例2在溶劑和去污劑的混合物中通過加入醇對殺病毒影響。同樣，使用實施例1中公開的相同實驗條件，不同的是還加入了去污劑。去污劑選自Twwen80(1％)、或Triton X100(1％)或膽酸鈉(0.2％)(所有為按每100份FFP或CYO計的體積份)，將加有去污劑的TNBP的具有的病毒失活性與加有醇的并含有相同的去污劑的TNBP的具有的病毒失活性進行比較。所有失活活實驗條件都在28℃下進行。得到的結果再一次表明，病毒在CYO中的失活效果比用FFP的同樣處理的要差。然而，在測定的最早期(加入處理試劑后10分鐘)，在加有去污劑的TNBP中存在1-3％的乙醇(或者為丙醇或者為丁醇)，其效果為加有同樣去污劑的TNBP本身大12倍。用TNBP加丁醇(每100份體積的TNBP中為1％(體積)，加膽酸鈉(0.2％)在32℃至26℃之間重復失活動力學研究。使用的TNBP的濃度為0.3％或1.5％。已經專利技術當溫度升至32℃時做活性實驗，存在丁醇(加上TNBP加上膽酸鹽)對結果無實質性(與無丁醇的加有膽鹽酸的TNBP比較)，然而，在26℃時，無論是TNBP0.3或為1.5％(體積/血漿蛋白溶液的體積)?；旌衔镏卸〈嫉拇嬖谑沟谝粋€10分鐘內殺病毒的有效性增加了6倍。將一部分具有失活病毒的FFP通過皮下、靜脈和肌肉注射，使兔子免疫，經過給藥三周后，在處理的兔子的血清中，檢測到抗病毒的抗體。本專利技術提供的使血漿中逃逸免疫檢測病毒失活之組合物，可以快速完全地使被膜病毒失活，提供了一種新的使病毒失活的方法，同時擴展了有機溶劑的新用途。權利要求1.一種使血漿中逃逸免疫檢測病毒失活之組合物，其中，其組成為組成 配比(體積比)低分子醇 1-3TNBP 100去污劑適量2.權利要求1所述的組合物，其中，所述的低分子醇是乙醇、丙醇或丁醇。3.權利要求1所述的組合物，其中，所述的去污劑是膽酸鈉、Tween-80或Triton-X。4.一種使血漿中逃逸免疫檢測病毒失活的方法，其中，在血漿蛋白溶液中加入低分子醇和有機溶劑以及去污劑能夠使一萬只病毒在十分鐘內失活。5.權利要求4所述的方法，其中，所述的低分子醇是乙醇、丙醇或丁醇。6.權利要求4所述的方法，其中，所述的去污劑是膽酸鈉、Tween-80或Triton-X。7.權利要求4所述的方法，其中，所述的有機溶劑是磷酸三正丁酯。8.權利要求4所述的方法，其中，所述的低分子醇的濃度為1-3體積低分子醇100體積有機溶劑。9.權利要求4所述的方法，其中，所述的有機溶劑的濃度為0.3-1.5體積有機溶劑100體積血漿蛋白溶液。10.權利要求4所述的方法，其中，所述的失活步驟的溫度為1-28度。11.一種人體血漿蛋白組合物，含有通過溶劑殺死的失活病毒顆粒，此溶劑為磷酸三正丁酯、低分子醇和去污劑。12.權利要求11所述的人體血漿蛋白組合物，其中，所述的低分子醇是乙醇、丙醇或丁醇。13.權利要求11所述的人體血漿蛋白組合物，其中，所述的去污劑是膽酸鈉、Tween-80或Triton-X。全文摘要本專利技術公開了使血漿中逃逸免疫檢測病毒失活之組合物，包括低分子醇和TNBP，其中所述的低分子醇可以是乙醇、丙醇或丁醇，其中低分子醇和TNBP的配比是1-3∶100。本專利技術提供的使血漿中逃逸免疫檢測病毒失活的組合物，可以快速完全地使被膜病毒失活，提供了一種新的使病毒失活的方法，同時擴展了有機溶劑的新用途。文檔編號A61L2/16GK1151524SQ9511839公開日1997年6月11日 申請日期1995年11月30日 優先權日1995年11月30日專利技術者徐家祥 申請人:徐家祥本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種使血漿中逃逸免疫檢測病毒失活之組合物，其中，其組成為：組成 配比（體積比）低分子醇 １－３ＴＮＢＰ １００去污劑 適量。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】

【專利技術屬性】
技術研發人員：徐家祥，
申請(專利權)人：徐家祥，
類型：發明
國別省市：71[中國|臺灣]