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    用一種試劑的生物素藥盒及快速測試技術制造技術

    技術編號:2603919 閱讀:203 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
    本發明專利技術屬于用一種試劑的生物素藥盒及簡便快速的測試技術。本發明專利技術采用N-溴化琥珀酰亞胺為活化劑生產的生物素藥盒它具有活潑易標記,使用方便,應用范圍廣,檢測靈敏度高,速度快,穩定性能好。藥盒容易貯存,保管,成本低,效益高,它簡化了操作程序和縮短了操作時間,不受環境條件限制,特別適應廣大基層防治單位的病疫普查和其它生物技術領域應用。(*該技術在2010年保護過期,可自由使用*)

    【技術實現步驟摘要】

    本專利技術涉及一種生物素快速反應藥盒及簡便測試技術。生物素藥盒及相應的檢測技術是八十年代問世的一種新的微量敏感,先進的測試技術,目前國內外廠家采用羧基琥珀酰亞胺為活化劑來生產藥盒是通過胺基與羧基的反應來進行標記,但這種生物素試劑藥盒操作程序復雜,操作時間長,它分別用四種獨立試劑組成,即(1)生物素標記的抗人IgG或SPA,(2)親和素(Avidin),(3)生物素標記的酶(B-RRP),(4)稀釋劑分次按序使用。其操作程序需要十個步驟4~6小時才能完成,這由于該項技術反應層次多,操作顯得非常煩鎖,使用時也顯得不方便,這樣生產工序多,用量大,成本高,因而不少防治單位都希望盡快地研究簡便快速的生物素藥盒和檢測技術。本專利技術目的是根據上述存在的問題和克服上述不足之處,而研制一種新型的溴化琥珀酰亞胺為活化劑,它根據生物素與親和素反應的機制,采用正交優選法生產一種用單一試劑的生物素藥盒及簡便、快速測試技術,它比目前采用的羥基琥珀酰亞胺要活潑,易標記,使用范圍廣,具有效強反應能力,并具有靈敏度高,速度快、穩定性能好特點。本專利技術的生物素測試藥盒,主要由(1)生物素標記的金黃色葡萄球菌蛋白A(B~SPA),(2)親和素(Avidin),(3)生物素標記的辣根過氧化物酶三種組合成一種快速反應試劑。它根據Biotin與Avidin結合牢固的特點。其親和常數比抗原抗體復合物,酶和底物,受體與配體等生物活性物質的結合要小幾個數量級以及Avidin參予的反應有4個活性部位,能同時與B-HRP和SPA-B發生反應,加之形成的復合物分子量為70000左右,均明顯小于抗原抗體復合物等生物大分子(>20萬)的機理,設計了這種藥盒和一次加入的方法,通過等量混合后室溫15分鐘形成的復合物,具有較好的參予反應的活性,并十分穩定,置4℃冰箱內放置1年以上仍可使用,室溫(20°~39°)可保存半年以上,這樣就比過去的ABC一類的生物素(藥盒)使用貯藏都方便得多,因為只需要一次加入,用量只有原來的三分之一,減少了包裝,減輕了重量,方便運輸,大大降低成本,在診斷血吸蟲病方面使用這種試劑時不需要用牛血清白蛋白之類的非反應系統的蛋白質進行保護。本專利技術用一種試劑的生物素藥盒的測試技術,它簡化了操作程序,由原來10個程序減少為7個程序;縮短了反應時間由原需要4~6小時完成,縮短為0.5~1小時內完成,其新的溴化琥珀酰亞胺生物素為活化劑新藥盒的操作程序和反應方法如下Ag包被(室溫2小時→NS洗滌一次→加待測血清(室溫15分鐘)→NS洗滌三次→加生物素快速反應試劑(室溫15分鐘)→NS洗滌三次→加低物顯色共7次完成。其原來的ABC測試技術程序如下Ag包被過夜→PBS緩沖液洗滌3次→加待測血清(37℃,60分鐘)→洗滌3次→加B-SPA(37℃,60分鐘)→洗滌3次→加ABC(37℃30分鐘)→洗滌3次→加底物顯色共10次完成。本專利技術以溴代琥珀酰亞胺活化劑生產的藥盒及專利技術的測試技術它明顯的簡化了操作程序和縮短了操作時間,基本上不受環境條件的限制,它不僅用于準確的診斷還特別適合廣大基層防治單位流行病普查和疫情的監測。如沒有電和儀器,通過觀察也可到現場直接測試,用這種試劑和簡便快速的檢測技術診斷血吸蟲等病取得了滿意診斷效果。并能廣范用于人、畜疾病的診斷調查和基因探測等生物
    權利要求1.用一種試劑的生物素藥盒及簡便,快速的測試技術,廣泛用于人、畜疾病的診斷、調查和基因探測等生物
    ,其特征(1)生物素藥盒用N-溴化琥珀酰亞胺活化生物素來標記抗人IgG,SPA,NRP凝集素(2)本專利技術的生物素快速反應試劑藥盒,由(a)生物素標記的金黃色葡萄球菌蛋A(B-SPA),(b)親和素(Avidin),(c)生物素標記的辣根過氧化物酶,三種配合而成,(3)用生物素快速反應試劑藥盒的測試技術程序于下Ag包被(室溫2小時)→NS洗滌1次→加待測血清(室溫15分鐘)→NS洗滌三次→加生物素快速反應試劑(室溫15分鐘),→NS洗滌三次→加底物顯色,由原來10個程序減少為7個程序,測試時間由原來4~6小時減少為0.5~1小時。全文摘要本專利技術屬于用一種試劑的生物素藥盒及簡便快速的測試技術。本專利技術采用N-溴化琥珀酰亞胺為活化劑生產的生物素藥盒它具有活潑易標記,使用方便,應用范圍廣,檢測靈敏度高,速度快,穩定性能好。藥盒容易貯存,保管,成本低,效益高,它簡化了操作程序和縮短了操作時間,不受環境條件限制,特別適應廣大基層防治單位的病疫普查和其它生物
    應用。文檔編號G01N33/52GK1044340SQ9010541公開日1990年8月1日 申請日期1990年2月22日 優先權日1990年2月22日專利技術者姜光斗, 易詠梅 申請人:姜光斗, 易詠梅本文檔來自技高網
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    【技術保護點】
    用一種試劑的生物素藥盒及簡便,快速的測試技術,廣泛用于人、畜疾病的診斷、調查和基因探測等生物技術領域,其特征:(1)生物素藥盒用N-溴化琥珀酰亞胺活化生物素來標記抗人IgG,SPA,NRP凝集素(2)本專利技術的生物素快速反應試劑藥盒, 由(a)生物素標記的金黃色葡萄球菌蛋A(B-SPA),(b)親和素(Avidin),(c)生物素標記的辣根過氧化物酶,三種配合而成,(3)用生物素快速反應試劑藥盒的測試技術程序于下:Ag包被(室溫2小時)→NS洗滌1次→加待測血清( 室溫15分鐘)→NS洗滌三次→加生物素快速反應試劑(室溫15分鐘),→NS洗滌三次→加底物顯色,由原來10個程序減少為7個程序,測試時間由原來4~6小時減少為0.5~1小時。

    【技術特征摘要】

    【專利技術屬性】
    技術研發人員:姜光斗詠梅
    申請(專利權)人:姜光斗詠梅
    類型:發明
    國別省市:43[中國|湖南]

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