EB病毒有關疾病的體外鑒別診斷方法技術

本發明專利技術提供了一種ＥＢＶ相關病毒的體外鑒別診斷方法，其中使用了一組診斷上相關的抗原性ＥＢＶ多肽，這些抗原多肽通過ＤＮＡ重組技術產生，并具有ＥＢＶ相關蛋白的免疫學活性．（*該技術在2006年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及到EB病毒有關疾病的體外鑒別診斷方法，其中使用了一組診斷上相關的EB病毒抗原多肽，這些多肽通過DNA重組技術產生，并具有EB病毒有關蛋白的免疫學活性。皰疹病毒是具套膜的十二面體衣殼，總直徑為150毫微米。病毒基因組由一雙鏈DNA組成，其分子量約為108。人類皰疹病毒有單式Ⅰ型皰疹病毒(“發熱性皰疹”)、單式Ⅱ型皰疹病毒(生殖器皰疹)、水痘帶狀皰疹病毒(水痘，帶形皰疹)、細胞巨化病毒(先天性異常，如頭小畸形)、及EB病毒(EBV)。EBV導致的原發性疾病為傳染性單核細胞增多癥。它主要感染兒童和青年人。普通成人人口的90%以上受到EBV感染，并且EBV終身都留在外周B淋巴細胞中。該病毒在人的一生中都在腮腺中產生并通過口腔途徑傳播。在需要對白血病，或在器官移植情況下受體對移植物的排斥危象進行鑒別診斷時，明確而快速地鑒定傳染性單核細胞增多癥或急性EBV感染是特別重要的。在這些情況中，錯誤的診斷可能導致不正確的治療，而這些不正確的治療可能導致嚴重的甚至危及生命的后果。血清學研究提示EBV還極可能與人類繼發性腫瘤，即與非洲伯克特氏(Burkitts)淋巴瘤(BL)和鼻咽癌(NPC)形成有關。明確而迅速地鑒定這種繼發性疾病也是很重要的，因為NPC的早期檢測可使之對其進行早期處理，這將會顯著降低NPC的死亡率。在中國南方的某些地區及新加坡和馬來西亞的華人中，NPC是最常見的人類腫瘤，發病率達每年每100，000人中有40人。在世界其它地區，如婆羅洲或突尼西亞發病率也很高。在大部分其它地區，發病率約為每年每100，000人中有0.2人，約占耳、鼻和喉(ENT)腫瘤的4%。在幾乎所有的高發病率地區，病人的年齡分布顯示在40至50歲左右有一清楚的單峰。對用于EBV有關疾病診斷的EBV有關基因產物的選擇A.EBV感染初期產生抗病毒衣殼抗原(VCA)、早期抗原(EA)及EB核心抗原(EBNA)的抗體。在感染(單核細胞增多癥)的急性期或初期，EBV感染B淋巴細胞。由于缺乏免疫反應，致使一些細胞進入溶解周期，并產生一系列病毒抗原，這些病毒抗原在細胞溶解時進入血流。為了抗這些抗原，宿主免疫系統將合成特異性抗體(表1)。表Ⅰ 2XLP代表缺乏免疫力宿主的實例1通過GP240/200的免疫沉淀確定(MA膜抗原)由于細胞因子阻礙EBV的表達，也許并非所有的B淋巴細胞都能受到完全的溶解性感染。在宿主的余生中，這些細胞潛在地攜帶著EBV基因組。B.恢復期抗EA抗體的消失及抗VCA和EBNA抗體的保留由于肌體的免疫防御機制而從循環中去掉溶解感染的細胞，恢復期的抗體水平將開始下降。一段時間后，抗EA抗體消失。然而，如上所述，EBV仍在腮腺中產生。病毒顆粒及包括EB在內的細胞內病毒相關抗原將進入唾液并到達口咽部。病毒顆粒在這兒與B淋巴細胞結合并作為抗原存在于體內，從而仍維持著抗VCA抗體的效價。由于EA不能與淋巴細胞結合，它將被蛋白酶降解，因此不能被免疫系統用作誘導抗體的抗原。被EBV潛在感染的循環淋巴細胞含有EBNA。在其生命周期之末，這些細胞將被分解，并將EBNA釋放到血流中去。因此將保留有針對此抗原的抗體。這樣，由于腮腺產生EBV及潛在感染的B細胞釋放EBNA，恢復期的血清中將含有低水平的抗VCA及抗EBNA的IgG抗體(見前面表Ⅰ)。此外，極少數可能進入溶解周期的B淋巴細胞釋放的EA，可能是抗原性很差的，故不能產生出本測試系統所能檢測出的抗體水平。C.患有繼發性NPC個體體內的EBV相關抗體抗原和抗體分類特異性檢測方法的引入，尤其是對于抗EA及VCA兩個抗原族的外周IgA抗體的確定，及至少對EA族進行再分類的第一次嘗試(EA、D或R;G.Henle，W.Henle和G.Klein，”對EB病毒感染之細胞中早期抗原復合物兩個不同組分的確定”，Int.J.Cancer，第8卷第272頁(1971年))，顯著地改善了檢測方法的診斷及預防價值。在NPC的高發病區，1%的成人中具有EBV衣殼抗原(VCA)的IgA抗體。這些人中有百分之三經臨床檢查發現患有NPC，除那些極端的病例外，沒有發現抗VCA IgA陰性病例。在抗VCA IgA陽性病例之外，三年隨訪中，患NPC的每年約1%。如果能使用高度特異性的自動讀數的ELISA法來檢測，則它將為尋找極端危險的群體，提供極好的“第一步”篩選的定量試驗。EB病毒IgA/VCA抗體的檢測有助于NPC的診斷，對早期階段的檢測尤其有價值。例如，在梧州市(中國，NPC高危險地區)，通過血清學方法作人群普查，檢測NPC發病率的結果表明，Ⅰ期(42%)和Ⅱ期(48%)病人的百分數比在門診病人中檢測出的數值(1.7%為Ⅰ期，30%為Ⅱ期)高得多。存活機會顯然與開始治療的階段有關，Ⅰ期病人的存活率(根據上海腫瘤醫院)為93%，Ⅱ期為75%，更以后階段的存活率是很低的。因此，通過早期檢測和早期治療可以降低NPC的死亡率。基于本方法，能從40%至70%的NPC病人中檢測到EBV初期抗原復合物的IgA抗體。非帶瘤群體中實質上不存在這些抗體。對帶瘤個體的這種測試，對于決定開始治療來說是極為重要的，如果能提高其靈敏度，使腫瘤病人的疾病檢出率達到近100%，則其價值將會更大。聯系到各類抗體出現的已知順序，尤其是考慮到早期產生IgM抗體，然后產生IgG抗體，便可將EBV產生的各類抗原應用于EBV相關疾病的鑒別診斷中。然而，目前可用的檢測系統主要基于細胞抗原或細胞衍生的抗原，因此其實用范圍是極為有限的。這種限制的第一個原因，即由于含有大量非EBV蛋白，造成所述試驗中非特異性本底反應過高。其次，由于必須按照復雜費時的多步過程從無菌細胞培養物中制備帶有病毒抗原的細胞，則致使所述試驗的費用很高。因此，本專利技術所涉及的技術問題即是要提供一個廉價、簡潔、可靠而快速的體外鑒別診斷EBV有關疾病的方法，其中，檢定了表明EBV感染不同階段(表Ⅰ)的各類抗體。根據本專利技術，該技術問題的解決，是通過利用一組診斷上有關的抗原性EBV多肽完成的，這些多肽是借助DNA重組技術產生的，并具有EBV相關蛋白的免疫學活性。本文中的術語“免疫學活性”，是指所述EBV多肽至少含有一個抗原決定基，它能與識別相應的天然EBV相關蛋白抗原決定基的抗體產生交叉反應。在本專利技術一個較好的實施方案中，那組在診斷上相關的抗原EBV多肽至少包含一種早期抗原(EA)、一種病毒抗原(VCA)、一種膜抗原(MA)、一種EB核心抗原(EBNA)，含有或不含有一種被檢測淋巴細胞的膜抗原(LYDMA)。上述EA的特殊實例是p90、p54、p110及p138。上述VCA的特殊實例是p143及p150。上述MA的一個特殊實例是gp250/350。上述EBNA-I的一個特殊實例是p72。上述LYDMA的一個特殊實例是P42。那組用于本專利技術目的在診斷上相關的抗原性EBV多肽，最好是包含有EBV相關蛋白p54和p138(EA)、p150(VCA)、gp250/350(MA)、及p72(EBNA-I)之免疫學活性的EBV多肽。在本專利技術一個較好的實施方案中，用于EBV有關疾病的體外鑒別診斷方法，是放射免疫測定法(RIA)或酶聯免疫吸附法(ELISA)。用于本專利技術方法的具有EBV相關蛋白之本文檔來自技高網...

【技術保護點】
ＥＢＶ相關疾病的體外鑒別診斷方法，其特征在于，該方法使用了一組診斷上相關的抗原性ＥＢＶ多肽，這些抗原多肽通過ＤＮＡ重組技術產生，并具有ＥＢＶ相關蛋白的免疫學活性。

【技術特征摘要】
1.EBV相關疾病的體外鑒別診斷方法，其特征在于，該方法使用了一組診斷上相關的抗原性EBV多肽，這些抗原多肽通過DNA重組技術產生，并具有EBV相關蛋白的免疫學活性。2.根據權利要求1的方法，其特征在于，所述一組診斷上相關的抗原性EBV多肽至少包含一種早期抗原(EA)、一種病毒衣殼抗原(VCA)、一種膜抗原(MA)、一種EB核心抗原(EBNA)，并任意地包含一種檢測淋巴細胞的膜抗原(LYDMA)。3.根據權利要求1或2的方法，其特征在于，所述一組診斷上相關的抗原性EBV多肽，包含具有EBV相關蛋白p90、p54、p110和/或p138(EA)免疫學活性的EBV多肽。4.根據權利要求1或2的方法，其特征在于，所述一組診斷上相關的抗原性EBV多肽包含具有EBV相關蛋白p143和/或p150(VCA)之免疫學活性的EBV多肽。5.根據權利要求1或2的方法，其特征在于，所述一組診斷上相關的抗原性EBV多肽，包含具有EBV有關蛋白gp250/350(MA)之免疫學活性的EBV多肽。6.根據權利要求1或2的方法，其特征在于，所述一組診斷上相關的抗原性EBV多肽，包含具有EBV有關蛋白p72(EBNA-I)之免疫學活性的EBV多肽。7.根據權利要求1或2的方法，其特征在于，所述一組診斷上相關的EBV抗原多肽，包含具有EBV有關蛋白p42(LYDMA)之免疫學活性的EBV多肽。8.根據權利要求1或2的方法，其特征在于，所述一組診斷上相關的EBV抗原多肽，包含具有EBV有關蛋白p54和p138(EA)、p150(VCA)、gp250/350(MA)和p72(EBNA-I)之免疫學活性的EBV多肽。9.根據權利要求1至8中任何一項的方法，其特征在于，它是一種放射免疫測定法(RIA)或一種酶聯免疫吸附法(ELISA)。10.根據權利要求1的方法，其特征在于，所述具有EBV相關蛋白免疫學活性的診斷上相關的抗原性EBV多肽，是按...

【專利技術屬性】
技術研發人員：翰斯J沃爾夫，
申請(專利權)人：翰斯J沃爾夫，
類型：發明
國別省市：DE[德國]