一種由軟骨素制備類肝素的方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種由軟骨素制備類肝素的方法，包括以下步驟：軟骨素和三氧化硫吡啶在溶劑中梯度升溫反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后除去溶劑、分離純化得到類肝素。本發(fā)明專利技術(shù)的制備方法以軟骨素為原料，制備的產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定、取代度高、生物活性好；制備過(guò)程中以梯度升溫的方式，避免了原料成團(tuán)，便于攪拌；制備條件溫和、制備過(guò)程副產(chǎn)物少。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種由軟骨素制備類肝素的方法
本專利技術(shù)屬于原料藥制備領(lǐng)域，涉及一種類肝素的制備方法。
技術(shù)介紹
軟骨素是由細(xì)菌產(chǎn)生的一種糖胺聚糖，其糖鏈的結(jié)構(gòu)單元為葡萄糖醛酸和N-乙酰半乳糖胺。也是動(dòng)物體內(nèi)合成硫酸軟骨素的前體。類肝素是一種在結(jié)構(gòu)上與肝素類似的粘多糖，具有抗凝血活性等作用。目前類肝素的制備方法有兩種，一種是提取法，直接以魚鰾或魚皮為原料酶解提取，缺點(diǎn)是原材料少，成本高；另一種是合成法，多數(shù)為以動(dòng)物喉骨氣管、軟骨等為原料，酶解提取硫酸軟骨素再以硫酸軟骨素為原料制備，這個(gè)過(guò)程產(chǎn)生大量的高級(jí)脂肪酸副產(chǎn)物難以處理，且每一批硫酸軟骨素的硫含量不同，所以導(dǎo)致制備類肝素的硫含量也會(huì)不穩(wěn)定。為解決這個(gè)問(wèn)題本專利技術(shù)以軟骨素為原料制備類肝素，由于軟骨素自身不含磺酸基，所以制備的類肝素硫含量穩(wěn)定，且軟骨素相對(duì)于硫酸軟骨素更好制備價(jià)格更低。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)提供一種上述類肝素的制備方法，原料易得、制備方法簡(jiǎn)單。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)采用如下技術(shù)方案。一種類肝素的制備方法，包括以下步驟：軟骨素和三氧化硫吡啶在溶劑中梯度升溫反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后除去溶劑、分離純化得到類肝素：。所述梯度升溫過(guò)程為：48-52℃攪拌1-2h；58-62℃攪拌1-2h；68-72℃攪拌1-2h；78-82℃攪拌1-2h；88-92℃靜置反應(yīng)1-2h。優(yōu)選的，所述攪拌速度為120-150rpm。所述軟骨素和三氧化硫吡啶的摩爾比為0.9-1.2:1。所述溶劑為吡啶或吡啶與N,N-二甲基甲酰胺的混合。所述分離純化包括以下步驟：（1）將除去溶劑的反應(yīng)液中加入堿液完全溶解，；（2）將步驟（1）中溶液加水調(diào)節(jié)pH并濃縮；（3）調(diào)節(jié)步驟（2）獲得的濃度液的pH，加入雙氧水反應(yīng)；（4）將步驟（3）中的溶液反復(fù)以酒精沉淀、溶解、調(diào)節(jié)pH后，將沉淀進(jìn)行洗滌、脫水、干燥處理得到類肝素。步驟（1）中，所述堿液選自氫氧化鈉、碳酸鈉或醇鈉的溶液。步驟（2）中，pH為9.80-10.20。步驟（3）中，pH為10.50-11.50。步驟（3）中，所述雙氧水中過(guò)氧化氫濃度為30-50wt%；所述雙氧水與溶液體積比為1:50-1:100。步驟（4）中，pH為5.3-7.6。步驟（4）中以乙醇沉淀、溶解、調(diào)節(jié)pH的步驟重復(fù)2-3次。本專利技術(shù)的有益效果：本專利技術(shù)的制備方法以軟骨素為原料，制備的產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定、取代度高、生物活性好；制備過(guò)程中以梯度升溫的方式，避免了原料成團(tuán)，便于攪拌；制備條件溫和、制備過(guò)程副產(chǎn)物少。附圖說(shuō)明圖1是實(shí)施例1制備類肝素的紅外譜圖；圖2是軟骨素的紅外譜圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例和附圖對(duì)本專利技術(shù)做進(jìn)一步說(shuō)明，但本專利技術(shù)不受下述實(shí)施例的限制。實(shí)施例中采用的原料酒精的質(zhì)量百分濃度不小于95%。實(shí)施例1類肝素的制備（1）將原料軟骨素進(jìn)行了一次60℃真空（加五氧化二磷）12h的干燥。吡啶和DMF使用分子篩進(jìn)行脫水處理備用；（2）向5000mL三口玻璃燒瓶中分別投入600mL的吡啶，1600mL的DMF；將反應(yīng)瓶置于冰鹽浴中，降溫20min后，分別開始滴加氯磺酸185mL，控制滴加溫度2℃及以下：氯磺酸滴加速度2滴/s，滴加時(shí)長(zhǎng)60min；獲得三氧化硫吡啶；（3）滴加完畢后將燒瓶移入35℃水浴中回溫10min，投入軟骨素180g；升溫至50℃攪拌反應(yīng)1h，再升溫至60℃攪拌反應(yīng)1h，再升溫至70℃攪拌反應(yīng)1h，再升溫至80℃攪拌反應(yīng)1h，攪拌速度為150rpm；最后升溫至90℃無(wú)需攪拌靜置反應(yīng)1h；（4）將燒瓶置于冰鹽浴中降溫30min后，將液體倒出。向反應(yīng)瓶中加入3000mLpH為13的氫氧化鈉溶液，攪拌至固體全溶，再將溶液調(diào)節(jié)料液pH至10.0，最后加入純化水調(diào)節(jié)體系體積至4000mL；將料液分別減壓蒸餾至2000mL，蒸餾過(guò)程中調(diào)節(jié)2次pH至10.0；（5）蒸餾結(jié)束，將料液置于30℃水浴中，調(diào)節(jié)pH至11，加入30mL的50%的雙氧水，再次調(diào)節(jié)pH至11，氧化12h；（6）氧化結(jié)束，將料液過(guò)濾后加入2%的氯化鈉，加入6000mL的原料酒精進(jìn)行一次沉淀；傾出上清加入純化水至1000mL，加入2%氯化鈉，全溶后調(diào)節(jié)pH至6.5，加入3000mL的原料酒精進(jìn)行二次沉淀。沉淀用80%的酒精1000mL洗滌3次，再用原料酒精1000mL脫水3次。過(guò)濾后60℃真空（加五氧化二磷）干燥12h；得到類肝素固體149g，收率82.7%。其紅外光譜如圖1所示：相比于軟骨素的紅外譜圖（圖2），類肝素在1238cm-1處硫酸基中的S=O伸縮振動(dòng)和860cm-1處硫酸酯基中的C-O-S軸向伸縮振動(dòng)表明存在硫酸基團(tuán)。實(shí)施例2類肝素的制備（1）將原料軟骨素進(jìn)行了一次60℃真空（加五氧化二磷）12h的干燥。吡啶和DMF使用分子篩進(jìn)行脫水處理備用；（2）向5000mL三口玻璃燒瓶中分別投入400mL的吡啶，1600mL的DMF。將反應(yīng)瓶置于冰鹽浴中，降溫20min后，分別開始滴加氯磺酸180mL，控制滴加溫度2℃及以下：氯磺酸滴加速度3滴/s，滴加時(shí)長(zhǎng)45min；獲得三氧化硫吡啶；（3）滴加完畢后將燒瓶移入35℃水浴中回溫10min，投入軟骨素180g；升溫至48℃攪拌反應(yīng)1.5h，再升溫至58℃攪拌反應(yīng)1.5h，再升溫至68℃攪拌反應(yīng)1.5h，再升溫至78℃攪拌反應(yīng)1.5h，攪拌速度為120rpm；最后升溫至88℃靜置反應(yīng)1.5h；（4）將燒瓶置于冰鹽浴中降溫30min后，將液體倒出。向反應(yīng)瓶中加入3000mLpH為13的氫氧化鈉溶液，攪拌至固體全溶，再將溶液調(diào)節(jié)料液pH至10.0，最后加入純化水調(diào)節(jié)體系體積至4000mL；將料液分別減壓蒸餾至2000mL，蒸餾過(guò)程中調(diào)節(jié)2次pH至10.0；（5）蒸餾結(jié)束，將料液置于30℃水浴中，調(diào)節(jié)pH至11，加入30mL的50%的雙氧水，再次調(diào)節(jié)pH至11，氧化12h；（6）氧化結(jié)束，將料液過(guò)濾后加入2%的氯化鈉，加入6000mL的原料酒精進(jìn)行一次沉淀；傾出上清加入純化水至1000mL，加入2%氯化鈉，全溶后調(diào)節(jié)pH至6.5，加入3000mL的原料酒精進(jìn)行二次沉淀。沉淀用80%的酒精1000mL洗滌3次，再用原料酒精1000mL脫水3次。過(guò)濾后60℃真空（加五氧化二磷）干燥12h。得到類肝素固體154g，收率85.6%。實(shí)施例3類肝素的制備（1）將原料軟骨素進(jìn)行了一次60℃真空（加五氧化二磷）12h的干燥，以確保反應(yīng)無(wú)水。吡啶和DMF使用分子篩進(jìn)行脫水處理備用；（2）向5000mL三口玻璃燒瓶中分別投入500mL的吡啶，1600mL的DMF。將反應(yīng)瓶置于冰鹽浴中，降溫20min后，分別開始滴加氯磺酸170mL，控制滴加溫度2℃及以下：氯磺酸滴加速度2滴/s，滴加時(shí)長(zhǎng)60min；獲得三氧化硫吡啶；...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種類肝素的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：軟骨素和三氧化硫吡啶在溶劑中梯度升溫反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后除去溶劑、分離純化得到類肝素；/n所述梯度升溫過(guò)程為：48-52℃攪拌1-2h；58-62℃攪拌1-2h；68-72℃攪拌1-2h；78-82℃攪拌1-2h；88-92℃靜置反應(yīng)1-2h。/n

【技術(shù)特征摘要】
1.一種類肝素的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：軟骨素和三氧化硫吡啶在溶劑中梯度升溫反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后除去溶劑、分離純化得到類肝素；
所述梯度升溫過(guò)程為：48-52℃攪拌1-2h；58-62℃攪拌1-2h；68-72℃攪拌1-2h；78-82℃攪拌1-2h；88-92℃靜置反應(yīng)1-2h。


2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的類肝素的制備方法，其特征在于，所述軟骨素和三氧化硫吡啶的摩爾比為0.9-1.2:1。


3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的類肝素的制備方法，其特征在于，所述溶劑為吡啶或吡啶與N,N-二甲基甲酰胺的混合。


4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的類肝素的制備方法，其特征在于，所述攪拌速度為120-150rpm。


5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的類肝素的制備方法，其特征在于，所述分離純化包括以下步驟：
（1）將除去溶劑的反應(yīng)液中加入堿液完全溶解，；
（2）將步驟（1...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王朋田，張建勇，趙貴吉，朱偉偉，王斌，相茂功，劉寶珍，張健健，王勇，劉守壘，王春朋，王海泉，趙莉莉，張東巧，盧瀅瀅，鄭成紅，張杰，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：山東眾山生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：山東;37