本發明專利技術公開了一種LncRNA在糖尿病預后評估和反復流產預警中的應用。本發明專利技術提供了用于檢測LncRNA EPB41L4A?AS1的物質在如下(A1)或(A2)中的應用：(A1)制備用于糖尿病預后評估的產品，或糖尿病預后評估；(A2)制備用于反復流產預警的產品，或反復流產預警。其中，所述LncRNA EPB41L4A?AS1的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。本發明專利技術提示lncRNA EPB41l4A?AS1對于糖尿病預后評估和反復流產預警具有重要意義。
【技術實現步驟摘要】
一種LncRNA在糖尿病預后評估和反復流產預警中的應用
本專利技術涉及生物
，特別涉及一種LncRNA在糖尿病預后評估和反復流產預警中的應用。
技術介紹
人類基因組存在大量的不編碼蛋白的DNA序列，其中80％以上的非編碼序列會轉錄出非編碼蛋白的RNA轉錄本被稱為非編碼核酸(ncRNA)。分子量大于200核苷酸的稱為長非編碼核酸(lncRNA)。近年來的研究發現lncRNA在調節機體的生理和病理過程中發揮重要作用。糖尿病是一種常見的代謝性疾病，近年來隨著社會經濟的發展糖尿病的發病率進一步攀升。國際糖尿病聯盟公布2017年全球糖尿病患者已達到4.25億，到2045年預計可能達到6.29億，其中中國糖尿病患者可能達到1.144億，成為患者數量最多的國家。所以糖尿病的預防，診斷和治療，已成為急需解決的重大社會問題。反復性流產為自然流產連續3次以上者，每次流產往往發生在同一妊娠月份。引起反復性流產的病因復雜，臨床上竟有43種疾病最終可導致反復性流產的發生，有免疫性因素、遺傳性因素、感染性因素、內分泌性因素、解剖因素等，而其中免疫性因素導致的流產占反復性流產的67％之多。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種LncRNA在糖尿病預后評估和反復流產預警中的應用。第一方面，本專利技術要求保護用于檢測LncRNAEPB41L4A-AS1的物質在如下(A1)或(A2)中的應用：(A1)制備用于糖尿病預后評估的產品，或糖尿病預后評估；(A2)制備用于反復流產預警的產品，或反復流產預警。第二方面，本專利技術要求保護用于檢測LncRNAEPB41L4A-AS1的物質在如下任一中的應用：(a1)制備用于診斷高血糖刺激的無菌性炎癥是否存在的產品，或診斷高血糖刺激的無菌性炎癥是否存在；(a2)制備用于對糖尿病的加重進行預警的產品，或對糖尿病的加重進行預警；(a3)制備用于對糖尿病的血管并發癥進行預警的產品，或對糖尿病的血管并發癥進行預警；(a4)制備用于對糖尿病的血管內皮氧化損傷進行預警的產品，或對糖尿病的血管內皮氧化損傷進行預警。糖尿病患者，長期的血管內皮損傷會引起血管內皮并發癥進而加重糖尿病病情。在前述第一方面和第二方面中，所述用于檢測LncRNAEPB41L4A-AS1的物質可為引物對或試劑盒等。其中，所述引物對可為如下任一引物對：(b1)由SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示的兩條單鏈DNA組成的引物對；(b2)由將SEQIDNo.1和SEQIDNo.2經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(b1)中所述引物對功能相同的引物對。在本專利技術的具體實施方式中，所述試劑盒具體為用于檢測所述LncRNAEPB41L4A-AS1的實時熒光RT-PCR檢測試劑盒，含有所述引物對。具體的，所述試劑盒含有熒光RT-PCR反應液A和熒光RT-PCR反應液B；所述熒光RT-PCR反應液A中含有DNA聚合酶、dNTP、鎂離子及緩沖體系等；所述熒光RT-PCR反應液B中含有所述引物對和熒光探針等。第三方面，本專利技術要求保護用于檢測LncRNAEPB41L4A-AS1的物質在如下任一中的應用：(c1)制備用于檢測糖尿病患者(如二型糖尿病患者)外周血中炎癥性因子表達水平的產品，或者檢測糖尿病患者外周血中炎癥性因子表達水平(如外周血單核細胞中炎癥性因子表達水平)；(c2)制備用于檢測經高糖(如30mM的D-葡萄糖)或LPS誘導(如1μg/ml的LPS)處理的免疫細胞中炎癥性因子表達水平的產品，或者檢測經高糖處理的免疫細胞中炎癥性因子表達水平。進一步地，所述免疫細胞可為單核細胞或淋巴細胞。在本專利技術的具體實施方式中，所述單核細胞為THP-1細胞；所述淋巴細胞為JURKAT細胞。在(c1)和(c2)中，如果測得所述LncRNAEPB41L4A-AS1的表達水平低于正常對照組，則所述炎癥性因子表達水平高于或候選高于正常對照組。其中，所述正常對照組可如未患有糖尿病的健康人或者未經高糖(或LPS誘導)處理的免疫細胞。第四方面，本專利技術要求保護用于抑制LncRNAEPB41L4A-AS1的物質在制備具有如下表型的細胞模型中的應用：經高糖(如30mM的D-葡萄糖)或LPS誘導(如1μg/ml的LPS)處理后，胞內炎癥性因子表達水平升高。進一步地，所述細胞可為免疫細胞；更進一步地，所述免疫細胞可為單核細胞；更加具體地，所述單核細胞可為THP-1細胞。第五方面，本專利技術要求保護用于抑制LncRNAEPB41L4A-AS1的物質在制備用于增強因炎癥反應所致的細胞內氧化損傷的產品，或增強因炎癥反應所致的細胞內氧化損傷中的應用。其中，所述產品可為細胞模型或動物模型。可用于藥物篩選等。進一步地，所述細胞可為絨毛細胞(如HTR-8/SVneo細胞)或胰島細胞(如Beta-TC-6細胞)或血管內皮細胞(如HUV-EC-C[HUVEC]細胞)。第六方面，本專利技術要求保護LncRNAEPB41L4A-AS1表達水平降低的免疫細胞制備用于增強因炎癥反應所致的細胞內氧化損傷的產品，或增強因炎癥反應所致的細胞內氧化損傷中的應用。其中，所述產品可為細胞模型或動物模型。可用于藥物篩選等。在本專利技術具體實施方式中，所述免疫細胞具體為THP-1細胞。相應的，所述LncRNAEPB41L4A-AS1表達水平降低的免疫細胞具體為向THP-1細胞中導入siEPB41L4A-AS1后獲得的；所述siEPB41L4A-AS1由SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示的兩條單鏈退火形成。在前文第四方面和第五方面中，所述用于抑制LncRNAEPB41L4A-AS1的物質具體可為siEPB41L4A-AS1；所述siEPB41L4A-AS1由SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示的兩條單鏈RNA退火形成。在前文第五方面和第六方面中，所述增強因炎癥反應所致的細胞內氧化損傷具體可體現為增加因炎癥反應所致的細胞內ROS水平。在本專利技術的具體實施方式中，所述炎癥反應具體為由高糖(如30mMD-葡萄糖)或LPS誘導所致(LPS的誘導濃度可為100-200ng/ml)。第七方面，本專利技術還要求保護前文所述引物對或所述試劑盒。在前文各方面中，所述LncRNAEPB41L4A-AS1均可為如下任一：(B1)SEQIDNo.5所示的RNA；(B2)將SEQIDNo.5所示的核苷酸序列經過一個或幾個核苷酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的RNA；(B3)與(B1)或(B2)所限定的核苷酸序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且具有相同功能的RNA。在前文各方面中，所述炎癥性因子均可為如下：IL1β，IL-8、TNF-α和/或IL-16。本專利技術研究發現：lncRN本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.用于檢測LncRNA EPB41L4A-AS1的物質在如下(A1)或(A2)中的應用：/n(A1)制備用于糖尿病預后評估的產品，或糖尿病預后評估；/n(A2)制備用于反復流產預警的產品，或反復流產預警。/n
【技術特征摘要】
1.用于檢測LncRNAEPB41L4A-AS1的物質在如下(A1)或(A2)中的應用：
(A1)制備用于糖尿病預后評估的產品，或糖尿病預后評估；
(A2)制備用于反復流產預警的產品，或反復流產預警。
2.用于檢測LncRNAEPB41L4A-AS1的物質在如下任一中的應用：
(a1)制備用于診斷高血糖刺激的無菌性炎癥是否存在的產品，或診斷高血糖刺激的無菌性炎癥是否存在；
(a2)制備用于對糖尿病的加重進行預警的產品，或對糖尿病的加重進行預警；
(a3)制備用于對糖尿病的血管并發癥進行預警的產品，或對糖尿病的血管并發癥進行預警；
(a4)制備用于對糖尿病的血管內皮氧化損傷進行預警的產品，或對糖尿病的血管內皮氧化損傷進行預警。
3.根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于：所述用于檢測LncRNAEPB41L4A-AS1的物質為引物對或試劑盒；
所述引物對為如下任一引物對：
(b1)由SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示的兩條單鏈DNA組成的引物對；
(b2)由將SEQIDNo.1和SEQIDNo.2經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的兩條單鏈DNA分子組成的，且與(b1)中所述引物對功能相同的引物對；
所述試劑盒為用于檢測所述LncRNAEPB41L4A-AS1的實時熒光RT-PCR檢測試劑盒，含有所述引物對。
4.用于檢測LncRNAEPB41L4A-AS1的物質在如下任一中的應用：
(c1)制備用于檢測糖尿病患者外周血中炎癥性因子表達水平的產品，或者檢測糖尿病患者外周血中炎癥性因子表達水平；
(c2)制備用于檢測經高糖或LPS誘導處理的免疫細胞中炎癥性因子表達水平的產品，或者檢測經高糖或LPS誘導處理的免疫細胞中炎癥性因子表達水平；
進一步地，所述免疫細胞為單核細胞或淋巴細胞；
更進一步地，所述單核細胞為THP-1細胞；所述淋巴細胞為JURKAT細胞。
【專利技術屬性】
技術研發人員：張雅鷗，廖衛捷，劉福海，王紫晴，胡紹良，許乃寒，謝偉東，
申請(專利權)人：清華大學深圳研究生院，深圳市康百得生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：廣東;44
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