HPLC法測定金銀清瘟合劑中有效成分含量的方法技術

本發明專利技術涉及一種HPLC法測定金銀清瘟合劑中有效成分含量的方法，即測量金銀清瘟合劑中綠原酸的含量。采用水煎提取和蒸餾濃縮法提取處方中各藥材有效成分制成合劑，采用HPLC法測定，Diamonsil G8ODS色譜柱(4.6nm×200mm，5μm)；以50%甲醇?0.4%磷酸水為流動相，流速為1.0ml/min，柱溫30℃，檢測波長為327nm，進樣量10μl。綠原酸保留時間為18.126min，線性范圍為0.991～9.93（r=0.9999），平均加樣回收率為99.16%，檢測限為0.1μg/ml。金銀清瘟合劑制備工藝穩定，HPLC法測定綠原酸含量高效、準確、穩定，質量標準可行。

【技術實現步驟摘要】
HPLC法測定金銀清瘟合劑中有效成分含量的方法
本專利技術涉及一種HPLC法測定金銀清瘟合劑中有效成分含量的方法，即測量金銀清瘟合劑中綠原酸的含量。
技術介紹
金銀清瘟合劑（原金銀合劑）為某醫院多年自制合劑，在醫院內應用多年，特別是手足口病流行暴發的前幾年，在臨床使用西藥無很好療效時，該制劑在治療時發揮了積極作用，受到醫生和患者的一致好評。該制劑含有金銀花、連翹、金銀花、連翹、廣藿香、滑石粉、茵陳、防風、白芷、蘆根、葛根、板藍根、拳參、黃芪、白術、甘草共計14味中藥，由于該制劑中藥品種類多達14種，存在一定的相互干擾，在質量控制特別是主要成分含量測定上未有很好方法。目前尚未發現有關金銀清瘟合劑有效成分含量測定的方法。
技術實現思路
本專利技術為了彌補現有技術的不足，提供了一種方法簡單、抗干擾、測量結果穩定準確的HPLC法測定金銀清瘟合劑中有效成分含量的方法。本專利技術是通過如下技術方案實現的：本專利技術的HPLC法測定金銀清瘟合劑中有效成分含量的方法，其特征在于，包括以下步驟：（1）溶液的制備對照品溶液：精密稱取干燥至恒重的綠原酸對照品適量，加50%甲醇使其溶解，制成含綠原酸0.1mg/ml的對照品溶液；供試品溶液：精密量取金銀清瘟合劑10ml,置25ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，用濾膜過濾，棄去初濾液，取續濾液即為供試品溶液；（2）對照品溶液的檢測分別精密量取一定量的對照品溶液置于容量瓶中加50%甲醇定容，然后取10μl進樣，采用高效液相色譜法測定，得到峰面積并記錄；以峰面積為縱坐標Y，以進樣品的濃度為橫坐標X，進行線性分析，得到回歸方程；（3）供試品溶液的檢測取供試品溶液進行高效液相色譜法檢測，得到其峰面積，將其峰面積作為Y值代入步驟（2）的回歸方程，根據Y值計算X，即可得到金銀清瘟合劑中綠原酸的含量。作為優選方案,回歸方程為Y=1563200.216X-1638.212（r=0.9999）,綠原酸在0.991～9.93mg/ml濃度范圍內線性良好。作為優選方案，所述濾膜采用孔徑大小為0.5μm的微孔濾膜。作為優選方案，對照品溶液檢測中量取的對照品溶液分別為1ml、2ml、4ml、6ml和8ml，容量瓶為10ml。作為優選方案，色譜條件：采用DiamonsilG8ODS色譜柱(4.6nm×200mm，5μm)；流動相為50%甲醇-0.4%磷酸水溶液，流速為1.0ml/min，檢測波長為327nm，柱溫為30℃，進樣量為10μl。本專利技術的有益效果：1.本專利技術依據《中華人民共和國藥典》2015年版四部通則首次建立了HPLC法測定金銀清瘟合劑中君藥金銀花主要有效成分綠原酸含量的方法。2.本專利技術的測定方法簡單、高效穩定、測定結果準確且具有一定的抗干擾性。3.本專利技術還有利于金銀清瘟合劑的進一步研究與開發。附圖說明圖1是本專利技術的對照品溶液色譜圖；圖2是本專利技術的供試品溶液色譜圖；圖3是本專利技術的陰性對照溶色譜圖。具體實施方式下面結合附圖及具體的實施例對本專利技術進行進一步介紹。一、儀器與試藥1.儀器Waters-HPLC（美國Waters）；2847紫外檢測器（青島盛瀚色譜技術有限公司）；TC0-250型超聲波清洗器（廣州華南超聲波設備有限公司）；EYELAN-1100型旋轉蒸發儀（日本東京理化器械株式會社）；AUW120D電子分析天平（日本島津）。2.試藥與試劑對照品綠原酸（批號：110753-201615），中國食品藥品檢定研究院；色譜純甲醇，（上海振興化工一廠）；磷酸（分析純，貴陽麟山化工有限公司）。二、金銀清瘟合劑處方組成和制備方法金銀清瘟合劑，菏澤市中醫院多年自制合劑（批準文號：魯藥制字Z20150039，規格：100m/瓶）。1.處方組成金銀花、連翹、廣藿香、滑石粉、茵陳、防風、白芷、蘆根、葛根、板藍根、拳參、黃芪、白術、甘草。2.制備工藝以上十四味，連翹、廣藿香、防風、茵陳、白芷、炒白術加水蒸餾，收集蒸餾液約200ml；藥渣與其余金銀花等八味加水煎煮二次，第一次加水10倍藥材量煎煮2.5小時，第二次加水8倍藥材量煎煮2小時，合并煎液，靜止12小時，自然沉淀，過濾上清夜濃縮至相對密度為1.20～1.30（80℃），加入上述蒸餾液及苯甲酸鈉3g，混勻，靜置，濾過，加水至1000ml，攪勻，灌裝，即得。三、方法與結果1.色譜條件采用DiamonsilG8ODS色譜柱(4.6nm×200mm，5μm)；流動相為50%甲醇—0.4%磷酸水溶液，流速為1.0ml/min，檢測波長為327nm，柱溫為30℃，進樣量為10μl。2.溶液的制備對照品溶液：精密稱取干燥至恒重的綠原酸對照品適量，加50%甲醇適量使其溶解，制成含綠原酸的0.1mg/ml的對照品溶液。供試品溶液：精密量取金銀清瘟合劑10ml，置25ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，用0.5μm微孔濾膜過濾，棄去初濾液取續濾液即為供試品溶液。陰性對照溶液：取不含金銀花外其他配方和配制方法均同金銀清瘟合劑，精密量取10ml，置25ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，用0.5μm微孔濾膜過濾，棄去初濾液，取續濾液即為陰性對照溶液。3.方法學考察線性關系：分別精密量取對照品溶液1ml、2ml、4ml、6ml、8ml置于10ml容量瓶中加50%甲醇定容，各取10μl進樣，按照上述的色譜條件進行測定，記錄峰面積，以峰面積為縱坐標Y，以進樣品濃度為橫坐標X（mg/ml），進行線性回歸，得方程Y=1563200.216X-1638.212（r=0.9999），綠原酸在0.991～9.93線性范圍內良好（r=0.9999）。特異性考察：取上述制備的供試品溶液、對照品溶液、陰性對照溶液在色譜條件下檢測綠原酸保留時間18.126min，分離良好，如圖1-3所示。4.精密度實驗：精密吸取對照品溶液10μl，按照上述色譜條件進行檢測，連續進樣8次，相對標準偏差（RSD）為0.86%，說明精密度良好。5.重復性實驗：分別取用同一批號金銀清瘟合劑9份，按照上述供試品溶液的制備方法配制，再根據上述色譜條件進行檢測，結果相對標準偏差（RSD）為1.1%，表明該方法重復性良好。6.穩定性試驗：取同一批號供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12h內進樣測定，記錄峰面積，結果相對標準偏差（RSD）為１.6%，表明供試品溶液在12h內保持穩定。7.加樣回收實驗：分別精密量取已知含量的供試品溶液9份，3份1組，每組分別加入精密稱定的低、中、高的綠原酸對照品，按上述色譜條件進行分別測定，計算回收率結果見表1：。8.檢測限和定量限：取對照溶液加50%甲醇分別稀釋成不同濃度的溶液測定，檢測限為0.1μm/ml，此時信噪比≥3：1，定量限為1.0μ本文檔來自技高網...

【技術保護點】
1.一種HPLC法測定金銀清瘟合劑中有效成分含量的方法，其特征在于，包括以下步驟：/n（1）溶液的制備/n對照品溶液：精密稱取干燥至恒重的綠原酸對照品適量，加50%甲醇使其溶解，制成含綠原酸0.1mg/ml的對照品溶液；/n供試品溶液：精密量取金銀清瘟合劑10ml,置25ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，用濾膜過濾，棄去初濾液，取續濾液即為供試品溶液；/n（2）對照品溶液的檢測/n分別精密量取一定量的對照品溶液置于容量瓶中加50%甲醇定容，然后取10μl進樣，采用高效液相色譜法測定，得到峰面積并記錄；以峰面積為縱坐標Y，以進樣品的濃度為橫坐標X，進行線性分析，得到回歸方程；/n（3）供試品溶液的檢測/n取供試品溶液進行高效液相色譜法檢測，得到其峰面積，將其峰面積作為Y值代入步驟（2）的回歸方程，根據Y值計算X，即可得到金銀清瘟合劑中綠原酸的含量。/n

【技術特征摘要】
1.一種HPLC法測定金銀清瘟合劑中有效成分含量的方法，其特征在于，包括以下步驟：
（1）溶液的制備
對照品溶液：精密稱取干燥至恒重的綠原酸對照品適量，加50%甲醇使其溶解，制成含綠原酸0.1mg/ml的對照品溶液；
供試品溶液：精密量取金銀清瘟合劑10ml,置25ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，用濾膜過濾，棄去初濾液，取續濾液即為供試品溶液；
（2）對照品溶液的檢測
分別精密量取一定量的對照品溶液置于容量瓶中加50%甲醇定容，然后取10μl進樣，采用高效液相色譜法測定，得到峰面積并記錄；以峰面積為縱坐標Y，以進樣品的濃度為橫坐標X，進行線性分析，得到回歸方程；
（3）供試品溶液的檢測
取供試品溶液進行高效液相色譜法檢測，得到其峰面積，將其峰面積作為Y值代入步驟（2）的回歸方程，根據Y值計算X，即可得到金銀清瘟合劑中綠原酸的含量。


2.根據權利要求1所述的一種HPLC法測定金銀...

【專利技術屬性】
技術研發人員：孫國棟，杜世霞，廉英杰，
申請(專利權)人：孫國棟，
類型：發明
國別省市：山東;37