半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN與Cathepsin L1復合物作為胃癌診斷標志物的應用制造技術

本發明專利技術涉及醫學診斷學領域，具體而言，涉及一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN與Cathepsin L1復合物作為胃癌診斷標志物的應用。通過CST1?CTSL復合物的檢測能夠有效的提高標志物的組織特異性，還能夠有效提高對早期胃癌的檢測率。

【技術實現步驟摘要】
半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN與CathepsinL1復合物作為胃癌診斷標志物的應用
本專利技術涉及醫學診斷學領域，具體而言，涉及一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN與CathepsinL1復合物作為胃癌診斷標志物的應用。
技術介紹
胃癌(gastriccarcinoma)是指原發于胃的上皮源性惡性腫瘤。研究發現在腫瘤的侵襲轉移過程中，腫瘤細胞必須穿越周圍的基質，基質的降解主要與各種組織蛋白水解酶有關，研究表明腫瘤細胞的侵襲轉移能力與組織蛋白酶降解細胞外基質的能力密切相關。組織蛋白酶L1（CathepsinL1,CTSL）是一種溶酶體半胱氨酸蛋白酶，廣泛存在于人體組織細胞中，該酶是一種肽鏈內切酶，但同時也具有外切酶活性，該酶通常以無活性的前體形式被合成，其內肽酶活性在溶酶體的酸性PH中通過自溶獲得，而外肽酶活性則通過內肽酶活性獲得。CTSL的表達在大多數的惡性腫瘤中上調，如胸，肺，胃，黑色素瘤，神經膠質瘤，而且其表達水平與腫瘤惡性程度相關。半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN(cystatinsSN，CST1)是組織蛋白酶抑制劑的一種，由CST1基因編碼的含141個氨基酸的蛋白質，分子量為16.4Kda。CST1分子中含有兩個二硫鍵，為典型的分泌蛋白，它能抑制細胞內、外的組織蛋白酶活性，在腫瘤的生長、血管生成、浸潤和轉移中起重要作用，并且有研究表明CST1的高表達與多種癌癥相關。目前對于胃癌的腫瘤標記物分析主要包括CA125、CEA、CA199等，但是臨床檢測陽性率僅20%-40%。由于CTSL用作腫瘤診斷標志物時組織特異性較差，很難定位到具體腫瘤類型，不僅僅在胃癌中有高表達，在胃癌、神經膠質瘤、黑色素瘤等患者中也存在表達。雖然CST1在胃癌中有一定的區分度，但是由于其序列上與同家族的半胱氨酸蛋白酶抑制劑S（cystatinsS，CST4）存在高度同源性，因此CST1作為胃癌靶標也具有一定的局限性。
技術實現思路
本專利技術涉及半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN與CathepsinL1復合物的定量檢測劑在制備用于胃癌的診斷、輔助診斷或預后分析的試劑盒中的應用。可選的，所述定量檢測劑用于執行如下任一種方法：免疫共沉淀以及酶聯免疫吸附試驗。可選的，所述定量檢測劑為所述半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN與CathepsinL1復合物的特異性抗體。可選的，所述特異性抗體為單克隆抗體或多克隆抗體。可選的，所述特異性抗體由SEQIDNO:1所示的氨基酸序列免疫得到。可選的，所述特異性抗體具有用于指示信號強度的標記。可選的，所述用于指示信號強度的標記選自發色團、地高辛標記探針、電子致密物質、膠體金或酶中的任一種或多種。本專利技術還涉及胃癌診斷、輔助診斷或預后分析試劑盒，其包含如上所定義的特異性抗體。可選的，所述試劑盒還包含固相載體、封閉液、顯色劑、CST1-CTSL融合抗原的校準品以及洗滌緩沖液中的至少一種。可選的，所述固相載體為化學發光板。通過CST1-CTSL復合物的檢測能夠有效的提高標志物的組織特異性，還能夠有效提高對早期胃癌的檢測率。附圖說明為了更清楚地說明本專利技術具體實施方式或現有技術中的技術方案，下面將對具體實施方式或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本專利技術的一些實施方式，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。圖1為本專利技術一個實施例中CST1-CTSL重組蛋白純化后的SDS-PAGE電泳圖；圖2為本專利技術一個實施例中CST1-CTSL檢測試劑盒校準曲線；圖3為本專利技術一個實施例中CST1-CTSL對胃癌和正常人檢測結果的樣本濃度散點圖；圖4為本專利技術一個實施例中CST1-CTSL對胃癌診斷的ROC曲線。具體實施方式現將詳細地提供本專利技術實施方式的參考，其一個或多個實例描述于下文。提供每一實例作為解釋而非限制本專利技術。實際上，對本領域技術人員而言，顯而易見的是，可以對本專利技術進行多種修改和變化而不背離本專利技術的范圍或精神。例如，作為一個實施方式的部分而說明或描述的特征可以用于另一實施方式中，來產生更進一步的實施方式。因此，旨在本專利技術覆蓋落入所附權利要求的范圍及其等同范圍中的此類修改和變化。本專利技術的其它對象、特征和方面公開于以下詳細描述中或從中是顯而易見的。本領域普通技術人員應理解本討論僅是示例性實施方式的描述，而非意在限制本專利技術更廣闊的方面。本專利技術涉及半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN與CathepsinL1復合物（CST1-CTSL復合物）的定量檢測劑在制備用于胃癌的診斷、輔助診斷或預后分析的試劑盒中的應用。本專利技術提供了一種用于診斷的新標志物：CST1-CTSL復合物。據文獻報道，CTSL可被CST1抑制而結合形成復合物，而CST4不具備此能力。因此通過CST1-CTSL復合物的檢測能夠有效的提高標志物的組織特異性，還能夠有效提高對早期胃癌的檢測率。本文使用的術語“標志物”指要用作分析患者實驗樣品的靶標的分子。這樣的分子靶標的實例是蛋白或多肽。在本專利技術中用作標志物的蛋白或多肽預期包括所述蛋白的天然存在的變體以及所述蛋白或所述變體的片段，特別是免疫學上可檢測的片段。免疫學上可檢測的片段優選地包含所述標志物多肽的至少5、6、7、8、9、10、11、12、15或20個連續氨基酸。本領域的技術人員可認識到，由細胞釋放的蛋白或存在于胞外基質中的蛋白可能受到損害（例如，在炎癥過程中），且可被降解或切割成這樣的片段。某些標志物以無活性形式合成，其可以隨后通過蛋白酶解來激活。如熟練的技術人員將明白的，蛋白或其片段也可以作為復合物的部分而存在。這樣的復合物也可以用作本專利技術意義上的標志物。另外，或在替代方案中，標志物多肽或其變體可以攜帶翻譯后修飾。翻譯后修飾的非限制性實例是糖基化、酰化和/或磷酸化。特別地，所述標志物應當位于CST1-CTSL復合物中CST1和CTSL結合部位，這種“結合”是指CST1和CTSL相互作用時氨基酸序列互相接觸的部位，可以是線性表位或空間表位。在一些實施方式中，所述定量檢測試劑為所述半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN以及所述CathepsinL1的特異性抗體，所述抗體可用于執行免疫共沉淀或酶聯免疫吸附試驗以對所述半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN與CathepsinL1復合物進行檢測。定量檢測試劑對半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN與CathepsinL1復合物的檢測可采用本領域公知的方法；可嘗試的方法例如生物質譜法、非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳、色譜法、酶聯免疫吸附試驗、免疫熒光法、免疫化學發光法、免疫比濁法、免疫印跡法以及斑點印跡。常見的優選方法為免疫共沉淀以及酶聯免疫吸附試驗，可通過A抗體捕獲CST1，并洗去未結合的組分，再通過帶有信號物質的B抗體檢測CTSL；當然也可以捕獲CTSL再檢測CST1，這對本領域技術人員說容易的。定量檢測劑通常是特異性地檢測CST1-CTSL復合物的試劑，例如，特異性結本文檔來自技高網...

【技術保護點】
1.半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN與Cathepsin L1復合物的定量檢測劑在制備用于胃癌的診斷、輔助診斷或預后分析的試劑盒中的應用。/n

【技術特征摘要】
1.半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN與CathepsinL1復合物的定量檢測劑在制備用于胃癌的診斷、輔助診斷或預后分析的試劑盒中的應用。


2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述定量檢測劑為所述半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN以及所述CathepsinL1的特異性抗體，所述抗體可用于執行免疫共沉淀或酶聯免疫吸附試驗以對所述半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN與CathepsinL1復合物進行檢測。


3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述定量檢測劑為所述半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN與CathepsinL1復合物的特異性抗體。


4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述特異性抗體為單克隆抗體或多克隆抗體。


5.根據權利要求4所述的應用，其特征在...

【專利技術屬性】
技術研發人員：王力軍，孫玉龍，楊亞云，王弢，
申請(專利權)人：上海良潤生物醫藥科技有限公司，
類型：發明
國別省市：上海;31