用于快速甲型流感診斷測試的抗體對制造技術

用于甲型流感診斷測試的新抗體對。用于甲型流感診斷測試的新抗體對。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】用于快速甲型流感診斷測試的抗體對
[0001]專利技術概述
[0002]本專利技術涉及單克隆抗體(mAb)種類的新選擇，其提供了用于檢測生物學樣品中的人甲型流感的高度靈敏性免疫層析測定法(以下稱為“免疫測定法”)。當在“三明治型”側向流免疫測定法(LFIA)中作為檢測和捕捉試劑配對使用時，所述mAb種類是特別有用的，例如在所謂的“快速流感診斷測試”(RIDT)(也稱為“接近患者”或“護理點”測試(POCT)或“浸漬片”，參見WHO論文，“Use of Influenza Rapid Diagnostic Tests”(2010))中通常使用。
[0003]本專利技術的新mAb選擇，在本文中也稱為“抗體(或mAb)對”或“匹配的抗體對”選自對病毒核蛋白(NP)(也稱為核殼蛋白或蛋白N)具有結合親和力的種類，所述病毒核蛋白是一種跨甲型流感的高度保守的蛋白，其可用于區分甲型和乙型流感，并且已成為上市RIDT的常見靶標(WHO，2010，第11頁)。
[0004]盡管當前可用的RIDT對季節性流感，即針對感染上呼吸道的呼吸道病毒和細菌具有特異性(中位數90
–
95％)，但是與RT-PCR或病毒培養相比靈敏性卻高度可變(即10-96％)。低靈敏性產生假陰性結果的嚴重風險。
[0005]我們已經鑒定出某些匹配的抗體對，用作“三明治型”免疫測定法的試劑，令人驚訝地，它們提供了每毫升樣品低至約10納克病毒蛋白的活病毒檢測限(LOD)，據我們至今所知大大改善可用RIDT的靈敏性。
[0006]僅使用特定匹配的抗體對分別作為檢測抗體和捕捉抗體就實現此種非常低的LOD，并且基于單獨的個別抗體的結合親和力尚不能進行預測。
[0007]此外，出乎意料的是，如本專利技術所要求的，可以用結合NP的相鄰或甚至相同抗原性表位的抗體對實現如此高的靈敏性。
[0008]事后看來，根據本專利技術的知識，盡管無意于被束縛，但可以假設，通常預期會抑制此類抗體對與單體形式的NP的同時結合的位阻可被在某些條件下形成暴露額外的抗體結合位點的多價復合物的NP寡聚體形成抵消。
[0009]本專利技術的匹配的抗體對表現出的高靈敏性特別有利于即使在低病毒滴度的生物流體中也易于檢測病毒，所述生物流體例如可以由消費者相對無創地自我采樣，例如通過擦拭粘膜液諸如鼻液或唾液。
[0010]因此，本專利技術一般涉及：用于檢測樣品(特別是包含活病毒的生物樣品)中存在的甲型流感的匹配抗體對；和包含所述匹配的抗體對作為檢測和捕捉試劑的免疫測定法，尤其是三明治型的免疫測定法，最優選三明治型的LFIA。
[0011]一方面，本專利技術包括匹配的抗體對，其用作LFIA中的相應檢測和捕捉抗體，以檢測樣品中存在的甲型流感的核蛋白(NP)抗原，其中所述匹配的抗體對的抗體獨立地能夠結合包含全長甲型流感核蛋白的連續位置氨基酸1-60的區域中的NP表位，如SEQ.ID.No:1所示。
[0012]在另一方面，本專利技術還包含三元復合物作為新型物質組合物，其在三明治型LFIA的運行中產生，所述三元復合物包含：
[0013](a)甲型流感核蛋白
[0014](b)與可檢測信號綴合或以其他方式關聯的至少一種“檢測抗體”；和
[0015](c)至少一種任選地固定化在基底上的“捕捉抗體”，
[0016]其中(b)和(c)獨立能夠結合包含甲型流感核蛋白的氨基酸1-60的區域中(a)的表位，從而形成所述三元復合物。
[0017]本專利技術還包含含有免疫層析材料的基底，所述免疫層析材料上具有通過其捕捉抗體(c)固定化的上述三元復合物。
[0018]本專利技術進一步包括用于檢測樣品中甲型流感的核蛋白(NP)的側向流免疫測定法，其包含：
[0019](a)流動相，其包含與可檢測信號綴合或以其他方式關聯的檢測抗體，所述檢測抗體能夠結合NP以形成二元復合物；和
[0020](b)固定相，其包含含有免疫層析材料的基底，所述免疫層析材料上固定化有捕捉抗體，所述捕捉抗體能夠結合所述二元復合物的所述NP以形成三元復合物，由此由所述三元復合物產生的可檢測信號指示所述樣品中NP的存在；
[0021]所述捕捉和檢測抗體能夠結合包含甲型流感核蛋白的氨基酸1-60的區域中的NP表位。
[0022]本專利技術進一步包括使用包含流動相和固定相的側向流免疫測定法檢測樣品中的甲型流感的方法，所述方法包括
[0023](a)將所述樣品引入所述測定法的所述流動相，
[0024](b)使所述樣品中的甲型流感核蛋白(NP)與檢測抗體接觸以在所述流動相中形成包含所述檢測抗體和NP的二元復合物，所述檢測抗體與可檢測信號綴合或以其他方式關聯，并且
[0025](c)使所述流動相與包含上面固定化有捕捉抗體的免疫層析材料的固定支持物接觸，所述捕捉抗體能夠結合所述二元復合物的所述NP以形成三元復合物，由此由所述三元復合物產生的可檢測信號復雜指示樣品中NP的存在，
[0026]其中所述捕捉抗體和所述檢測抗體獨立能夠結合包含甲型流感核蛋白的氨基酸1-60限定的區域中的NP表位。
[0027]在本專利技術的各種實施方案中，本專利技術的抗體對的每個檢測和捕捉抗體獨立地能夠結合甲型流感核蛋白的相同或不同表位。在一個實施方案中，所述捕捉和檢測抗體能夠結合NP表位，所述NP表位在每種情況下獨立地選自本文的SEQ.ID.NO:2和3。在一個優選的實施方案中，抗體的至少一種能夠結合包含所述SEQ ID NO:2的表位。在另一個實施方案中，捕捉抗體和檢測抗體均能夠結合包含SEQ ID NO:2的表位。在又一個實施方案中，捕捉和檢測抗體中的至少一種(例如，檢測抗體)能夠結合包含SEQ ID NO:3的表位；例如，一方面，捕捉抗體和檢測抗體均能夠結合包含SEQ ID NO:3的表位。
[0028]另外，本專利技術考慮了用于診斷患有甲型流感的患者的方法(或由消費者進行自我診斷的方法)，該方法包括在根據本專利技術的側向流免疫測定法中測試從患者或消費者獲得的生物學樣品，并確定甲型流感核蛋白的存在，所述核蛋白的存在指示甲型流感感染；以及監測患者中的甲型流感的治療性處理的效力的方法，其通過在所述測定法中測試來自患者的生物樣品并測定在治療甲型流感的藥物活性劑施用之前和之后甲型流感核蛋白的存在或缺乏。
[0029]此外，本專利技術包括用于在哺乳動物尤其是人受試者中快速測試甲型流感感染的醫
療裝置或試劑盒，其在殼體中包含本專利技術的LFIA，任選地還包含觀察口和/或閱讀器裝置和/或使用試劑盒的說明書。
[0030]專利技術背景
[0031]流感是由正粘病毒科(Orthomyxoviridae)的“甲型”、“乙型”和“丙型”屬引起的高度傳染性流行性至大流行性急性病毒性呼吸道疾病。甲型流感和乙型流感病毒是最常與人疾病相關的兩個屬。
[0032]在人類中，甲型和乙型流感病毒導致季節性流行病，在溫帶地區出現冬季高峰，在熱帶地區終年傳播。兩種病毒均通過突變持續進化，所述突變導致某些糖蛋白的抗原本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】1.匹配的抗體對，其在側向流免疫測定法中用作檢測和捕捉抗體以檢測樣品中存在的甲型流感的核蛋白(NP)抗原，其中所述匹配的抗體對的抗體獨立地能夠結合包含甲型流感核蛋白的氨基酸1-60的區域中的NP表位。2.根據權利要求1的匹配的抗體對，其中所述抗體能夠結合在每種情況下獨立地選自下組的NP表位：本文的SEQ.ID.No.2和3。3.根據權利要求1的匹配的抗體對，其中所述抗體的至少一種結合包含SEQ.ID.NO:2的NP表位。4.根據權利要求1的匹配的抗體對，其中所述檢測和捕捉抗體能夠結合包含SEQ.ID.No.2的NP表位。5.根據權利要求1的匹配的抗體對，其中所述檢測抗體是Antibodies Online ABIN2489610，克隆B248M，并且所述捕捉抗體是Meridian CO1731M，克隆B1632M。6.三元復合物，其包含：(a)甲型流感核蛋白(NP)；(b)與可檢測信號綴合或以其他方式關聯的檢測抗體；和(c)捕捉抗體，其任選地固定化在基底上，其中(b)和(c)能夠結合在每種情況下獨立選自下組的(a)的表位：在包含甲型流感核蛋白的氨基酸1-60的區域中的NP表位。7.根據權利要求6的三元復合物，其中(b)和(c)能夠結合在每種情況下獨立地選自下組的(a)的表位：本文的SEQ.ID.No.2和3。8.根據權利要求6的三元復合物，其中所述抗體的至少一種能夠結合包含SEQ.ID.No.2的NP表位。9.根據權利要求6的三元復合物，其中所述檢測和捕捉抗體能夠結合包含SEQ.ID.No.2的NP表位。10.根據權利要求6的三元復合物，其中(b)和(c)分別是Antibodies Online ABIN2489610，克隆B248M，和Meridian CO1731M，克隆B1632M。11.基底，其包含免疫層析材料，所述免疫層析材料上固定化有根據權利要求6、7、8、9或10中任一項的三元復合物。12.用于檢測樣品中的甲型流感核蛋白(NP)的側向流免疫測定法，其包含：(a)流動相，其包含與可檢測信號綴合或以其他方式關聯的檢測抗體，所述檢測抗體能夠結合NP以形成二元復合物；和(b)固定相，其包含含有免疫層析材料的基底，所述免疫層析材料上固定化有捕捉抗體，所述捕捉抗體能夠結合所述二元復合物的所述NP以形成三元復合物，由此由所述三元復合物產生的可檢測信號指示所述樣品中NP的存在；所述捕捉和檢測抗體能夠結合包含甲型流感核蛋白的氨基酸1-60的區域中的NP表位。13.根據權利要求12的側向流免疫測定法，其中所述檢測和捕捉抗體結合在每種情況下獨立地選自下組的NP表位：本文的SEQ.ID.NO:2和3。14.根據權利要求12的側向流免疫測定法，其中...

【專利技術屬性】
技術研發人員：DJ徹奇，A尼古拉斯，
申請(專利權)人：葛蘭素史克消費保健美國控股有限責任公司，
類型：發明
國別省市：