一種動物血紅蛋白多肽冷凍干燥粉化方法技術

本發明專利技術涉及藥物加工技術領域，具體地說，涉及一種動物血紅蛋白多肽冷凍干燥粉化方法。包括制備血紅蛋白、制備血紅蛋白多肽以及對血紅蛋白多肽溶液進行處理等步驟，最后得到血紅蛋白多肽粉。本發明專利技術設計可以保證血液原料的活性，提高血紅蛋白多肽的產量，且可以提高產品的抗氧化性，進而延長成品的保存期限，同時可以提高冷凍的速度及效果，另外可以在保持血紅蛋白多肽活性的前提下，快速完成血紅細胞蛋白的冷凍操作，降低加工過程中血紅蛋白多肽的失活率，提高藥物成品的質量，保證血紅蛋白多肽可以更好地發揮補血功效。可以更好地發揮補血功效。可以更好地發揮補血功效。

【技術實現步驟摘要】
一種動物血紅蛋白多肽冷凍干燥粉化方法


[0001]本專利技術涉及藥物加工
，具體地說，涉及一種動物血紅蛋白多肽冷凍干燥粉化方法。

技術介紹

[0002]動物類中藥的有效成分以蛋白多肽為主，因此活性蛋白多肽具有重要的醫療保健價值。動物血紅蛋白多肽應用到保健藥品中，具有良好的補血及抗貧血功能。但是，動物血紅細胞蛋白多肽在加工過程中，很多因素都會影響血液原料中血紅蛋白多肽的含量及活性，從而導致成品藥物中的血紅蛋白多肽含量降低，導致成品藥物的質量低下，無法有效發揮血紅多肽的補血功效。

技術實現思路

[0003]本專利技術的目的在于提供一種動物血紅蛋白多肽冷凍干燥粉化方法，以解決上述
技術介紹
中提出的問題，包括如下步驟：
[0004]S1、制備血紅蛋白；
[0005]S2、制備血紅蛋白多肽；
[0006]S3、對血紅蛋白多肽溶液進行冷凍、干燥及粉化處理，得到血紅蛋白多肽粉。
[0007]作為本技術方案的進一步改進，所述S1中，制備血紅蛋白的方法包括如下步驟：
[0008]S1.1、將新鮮動物血液與4％的檸檬酸鈉抗凝劑按照體積比為6:1混合后過濾，將過濾后的血液按照體積比為1:1加入0.9％NaCl水溶液進行洗滌；
[0009]S1.2、將混合后的溶液轉移至離心管中，設置溫度為4℃、離心轉速3000rpm、離心時間10min，棄上清液，反復洗滌兩次、離心，后收集下層紅細胞；
[0010]S1.3、將收集的紅細胞用4～6倍體積冷生理鹽水再洗滌2～3次后，在42℃下超聲25min進行溶血處理，超聲粉碎時加入適當體積的水，保持操作時溶液處于流動狀態；
[0011]S1.4、將充分溶血的紅細胞溶液置于離心機中，設置溫度4℃、離心轉速4200rpm、離心時間15min，取上層液得到血紅蛋白。
[0012]作為本技術方案的進一步改進，所述S1.3中，進行溶血處理的操作過程中，超聲波細胞破碎儀的功率為200W。
[0013]作為本技術方案的進一步改進，所述S2中，制備血紅蛋白多肽的方法包括如下步驟：
[0014]S2.1、稱取一定的血紅蛋白，用蒸餾水調節血紅蛋白溶液濃度至8.5～9.0％；
[0015]S2.2、加入一定的以殼聚糖為載體的固定化風味蛋白酶進行酶解，加入稀HCl調節pH為6.5，設定溫度為50℃、水解時間4.5h；
[0016]S2.3、再加入以殼聚糖為載體的固定化堿性蛋白酶，加入稀NaOH調節pH至9.0～9.5，設定溫度為55～58℃，酶解4～6h；
[0017]S2.4、設定離心轉速為8200rpm、冷凍離心15min，取上清液得到血紅蛋白多肽溶
液。
[0018]作為本技術方案的進一步改進，所述S2.2中，加入以殼聚糖為載體的固定化風味蛋白酶的含量為20000U/g。
[0019]作為本技術方案的進一步改進，所述S2.3中，加入以殼聚糖為載體的固定化堿性蛋白酶的含量為8500U/g。
[0020]作為本技術方案的進一步改進，所述S3中，對血紅蛋白多肽溶液進行處理的方法包括如下步驟：
[0021]S3.1、將新制得的血紅蛋白多肽溶液置于冷凍罐中預冷至
?
5～
?
8℃，溶液體積不超過罐體的75％；
[0022]S3.2、將預冷的血紅蛋白多肽敲碎，輕微攪拌混勻，設置溫度
?
32～
?
35℃，冷凍2～2.5h；
[0023]S3.3、將溫度調整為
?
40～
?
70℃，冷凍30min后，將冷凍罐抽真空至10～20Pa；
[0024]S3.4、設定抽真空
?
升溫循環，即當罐壓達到10～20Pa后停止抽真空，緩慢升溫使罐壓回升，罐壓升至90～100Pa后再度抽真空至10～20Pa，隨后循環進行抽真空
?
升溫操作，并關注罐溫度；
[0025]S3.5、當罐溫升至55～58℃時，停止循環，再次抽真空至罐壓10～13Pa，干燥3～5h；
[0026]S3.6、當含水量達到5～8％后，將凍干的血紅蛋白多肽進行低溫粉碎，用50～80目篩進行過篩，得到凍干血紅蛋白多肽粉。
[0027]與現有技術相比，本專利技術的有益效果：該動物血紅蛋白多肽冷凍干燥粉化方法中，通過選擇合適配比的抗凝劑，可以保證血液原料的活性，其次通過合理合適配比多種蛋白酶并調節適宜的反應條件，提高蛋白質裂解的效率及效果，提高血紅蛋白多肽的產量，且可以提高產品的抗氧化性，進而延長成品的保存期限，同時通過預冷、敲碎再進一步冷凍的方法，可以提高冷凍的速度及效果，另外通過設置多次的真空
?
升溫循環，可以在保持血紅蛋白多肽活性的前提下，快速完成血紅細胞蛋白的冷凍操作，降低加工過程中血紅蛋白多肽的失活率，提高藥物成品的質量，保證血紅蛋白多肽可以更好地發揮補血功效。
附圖說明
[0028]圖1為本專利技術的整體方法流程圖；
[0029]圖2為本專利技術中制備血紅蛋白的方法流程圖；
[0030]圖3為本專利技術中制備血紅蛋白多肽的方法流程圖；
[0031]圖4為本專利技術中對血紅蛋白進行處理的方法流程圖。
具體實施方式
[0032]下面將結合本專利技術實施例中的附圖，對本專利技術實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本專利技術一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本專利技術中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本專利技術保護的范圍。
[0033]實施例1
[0034]如圖1
?
4所示，本實施例的目的在于，提供一種動物血紅蛋白多肽冷凍干燥粉化方法，包括如下步驟：
[0035]S1、制備血紅蛋白；
[0036]S2、制備血紅蛋白多肽；
[0037]S3、對血紅蛋白多肽溶液進行冷凍、干燥及粉化處理，得到血紅蛋白多肽粉。
[0038]本實施例中，S1中，制備血紅蛋白的方法包括如下步驟：
[0039]S1.1、將新鮮動物血液與4％的檸檬酸鈉抗凝劑按照體積比為6:1混合后過濾，將過濾后的血液按照體積比為1:1加入0.9％NaCl水溶液進行洗滌；
[0040]S1.2、將混合后的溶液轉移至離心管中，設置溫度為4℃、離心轉速3000rpm、離心時間10min，棄上清液，反復洗滌兩次、離心，后收集下層紅細胞；
[0041]S1.3、將收集的紅細胞用4～6倍體積冷生理鹽水再洗滌2～3次后，在42℃下超聲25min進行溶血處理，超聲粉碎時加入適當體積的水，保持操作時溶液處于流動狀態；
[0042]S1.4、將充分溶血的紅細胞溶液置于離心機中，設置溫度4℃、離心轉速4200rpm、離心時間15min，取上層液得到血紅蛋白。
[0043]其中，S1.1中，因鈣是凝血反應中不可缺少的元素，而檸本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種動物血紅蛋白多肽冷凍干燥粉化方法，其特征在于：包括如下步驟：S1、制備血紅蛋白；S2、制備血紅蛋白多肽；S3、對血紅蛋白多肽溶液進行冷凍、干燥及粉化處理，得到血紅蛋白多肽粉。2.根據權利要求1所述的動物血紅蛋白多肽冷凍干燥粉化方法，其特征在于：所述S1中，制備血紅蛋白的方法包括如下步驟：S1.1、將新鮮動物血液與4％的檸檬酸鈉抗凝劑按照體積比為6:1混合后過濾，將過濾后的血液按照體積比為1:1加入0.9％NaCl水溶液進行洗滌；S1.2、將混合后的溶液轉移至離心管中，設置溫度為4℃、離心轉速3000rpm、離心時間10min，棄上清液，反復洗滌兩次、離心，后收集下層紅細胞；S1.3、將收集的紅細胞用4～6倍體積冷生理鹽水再洗滌2～3次后，在42℃下超聲25min進行溶血處理，超聲粉碎時加入適當體積的水，保持操作時溶液處于流動狀態；S1.4、將充分溶血的紅細胞溶液置于離心機中，設置溫度4℃、離心轉速4200rpm、離心時間15min，取上層液得到血紅蛋白。3.根據權利要求2所述的動物血紅蛋白多肽冷凍干燥粉化方法，其特征在于：所述S1.3中，進行溶血處理的操作過程中，超聲波細胞破碎儀的功率為200W。4.根據權利要求1所述的動物血紅蛋白多肽冷凍干燥粉化方法，其特征在于：所述S2中，制備血紅蛋白多肽的方法包括如下步驟：S2.1、稱取一定的血紅蛋白，用蒸餾水調節血紅蛋白溶液濃度至8.5～9.0％；S2.2、加入一定的以殼聚糖為載體的固定化風味蛋白酶進行酶解，加入稀HCl調節pH為6.5，設定溫度為50℃、水解時間4.5h；S2.3、再加入以殼聚糖為載體的固定化堿性蛋白酶，加入稀NaOH調節pH至9.0～9.5，設定溫度為55～58℃，...

【專利技術屬性】
技術研發人員：牛海濤，王麗萍，王永華，李丹，
申請(專利權)人：青島大學附屬醫院，
類型：發明
國別省市：