一種間充質干細胞分泌因子與內容物和馬齒筧干細胞提取物組合物及其制備方法技術

本發明專利技術公開了本發明專利技術的目的是通過下述技術方案予以實現：一種間充質干細胞分泌因子與內容物和馬齒筧干細胞提取物組合物及其制備方法，包括以下重量組分的原材料，間充質干細胞分泌因子凍干粉、馬齒筧干細胞提取物、透明質酸、蚯蚓激酶、芳香劑、乳化劑、增稠劑，其中，間充質干細胞分泌因子凍干粉10

【技術實現步驟摘要】
一種間充質干細胞分泌因子與內容物和馬齒筧干細胞提取物組合物及其制備方法


[0001]本專利技術涉及涉及醫藥技術、美容保健
，特別涉及一種間充質干細胞分泌因子與內容物和馬齒筧干細胞提取物組合物及其制備方法。

技術介紹

[0002]間充質干細胞是一種具有多向分化潛能的細胞，根據來源的不同可以分為胎盤間充質干細胞和牙髓間充質干細胞，子宮蛻膜間充質干細胞，骨髓間充質干細胞，脂肪間充質干細胞等。分化方向是具有組織或器官特異性的細胞，能在適宜的環境中分化成與其定位相宜的細胞系，又稱為多能干細胞。干細胞在特定的環境中可以定向分化，從而達到修復組織和細胞損傷的作用。間充質干細胞可以通過分化為特定的細胞來修復組織，而間充質干細胞的干細胞分泌因子的旁分泌作用在組織的修復中發揮了更大的作用。也就是說，在間充質干細胞治療組織損傷的時候，干細胞分泌的細胞因子也發揮了極為重要的作用。甚至影響到分化方向。間充質干細胞的干細胞分泌因子體系包括內皮細胞生長因子(VEGF)、表皮細胞生長因子(EGF)、干細胞因子(SCF)、腫瘤凋亡因子(TNF)，肝細胞生長因子(HGF)、神經生長因子(NGF)、胰島素樣成長因子(IGF)、纖維母細胞生長因子、白細胞介素2(IL)，粒細胞集落刺激因子(G
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CSF)等20余種。
[0003]此外，干細胞分泌因子中還含各型膠原蛋白(如i、ii、iii、iV型膠原蛋白)以及各種溶菌酶等對機體的作有及修復損傷中都是必不可少的。表皮干細胞是一種單能干細胞，也是皮膚更新的種子細胞。人類表皮每天都有大量的表皮細胞死亡脫落，也會有相應數量的新生表皮細胞加以補充。隨著人們年齡的增加，干細胞數量逐漸枯竭，以及干細胞再生能力下降。皮膚出現斑點，折皺也逐漸增多，這就是表皮干細胞再生能力的減退，如何使表皮干細胞保持旺盛的新陳代謝能力，是保持皮膚健康的關鍵。
[0004]基于人們對皮膚的健康以及美容的需求，干細胞美容技術及其相關產品的近年來受到業界的重視。目前市場上出現了大量所謂的干細胞產品，從專業技術角度上并不具備實施的可行性。中國專利CN1817339A、N1872025A、CN1817339A專利涉及產品的內容使用了活性干細胞和中藥組分，首先如何在護膚品種保持干細胞的活性？干細胞如何穿透皮膚的角質層？其次如何避免干細胞培養液中添加的毒素對人體的損害？以上問題及因素在其公布的專利中的組分無法解決，這些都是對干細胞的不成熟認識，且中國專利CN107714640A公開了本專利技術公開了一種含有荷花干細胞提取物的美白祛斑化妝品所述美白祛斑化妝品由1
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10％的美白祛斑制劑和90
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99％的載體組成。其中美白制劑為荷花干細胞提取物、甘草提取物和桑葉提取物，其中本專利技術的美白祛斑化妝品的主要機理是是通過美白制劑抑制酪氨酸酶、減少酪氨酸酶的產生和合成、抑制酪氨酸酶的糖化、加速酪氨酸酶的分解從而抑制酪氨酸酶的活性。觀察專利特點，化學配方過于復雜，干細胞配方過于簡單，其次，干細胞添加量太少，效果有限。雖然配方具有一定科學性，但是大量的化學品添加影響了當今護膚品的天然，環保的理念
[0005]基于以上因素，本申請人經過多年的實踐經驗，特別研發了一種間充質干細胞分泌因子與內容物和馬齒筧干細胞提取物組合物及其制備方法，其中包含間充質干細胞分泌因子與內容物、馬齒筧干細胞提取物、蚯蚓激酶、透明質酸。主要涉及用于水性化妝品制備方法。該組合物對皮膚無過敏反應，無刺激與反應性皮炎，小分子量，是能夠展現諸多效應的，很有效吸收的高質量化妝品。

技術實現思路

[0006]本專利技術的目的在于提供一種間充質干細胞分泌因子與內容物和馬齒筧干細胞提取物組合物及其制備方法，該組合物對皮膚無過敏反應，無刺激與反應性皮炎，小分子量，是能夠展現諸多效應的，很有效吸收的高質量化妝品。
[0007]本專利技術的目的是通過下述技術方案予以實現：一種間充質干細胞分泌因子與內容物和馬齒筧干細胞提取物組合物，其特征在于：包括以下重量組分的原材料，間充質干細胞分泌因子凍干粉、馬齒筧干細胞提取物、透明質酸、蚯蚓激酶、芳香劑、乳化劑、增稠劑；
[0008]其中，間充質干細胞分泌因子凍干粉10
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25份、馬齒筧干細胞提取物10
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20份、透明質酸10
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30份、蚯蚓激酶1
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8份、芳香劑0.01
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1份、乳化劑2
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10份、增稠劑0.1
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1份。
[0009]進一步地，所述原材料包括以下材料及重量組分：間充質干細胞分泌因子凍干粉10
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15份、馬齒筧干細胞提取物10
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15份、透明質酸15
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25份、蚯蚓激酶2
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5份、芳香劑0.01
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0.05份、乳化劑3
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5份、增稠劑0.1
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0.5份。
[0010]進一步地，所述原材料包括以下材料及重量組分：間充質干細胞分泌因子凍干粉10份，馬齒筧干細胞提取物10份，透明質酸15份，蚯蚓激酶2份，芳香劑0.01
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0.05份，乳化劑3份、增稠劑0.5份。
[0011]進一步地，所述原材料包括以下材料及重量組分：間充質干細胞分泌因子凍干粉15份，馬齒筧干細胞提取物15份，透明質酸25份，蚯蚓激酶5份，芳香劑0.05份，乳化劑5份、增稠劑0.5份。
[0012]進一步地，所述原材料包括以下材料及重量組分：間充質干細胞分泌因子凍干粉10份，馬齒筧干細胞提取物15份，透明質酸20份，蚯蚓激酶4份，芳香劑0.05份，乳化劑5份。
[0013]進一步地，所述間充質干細胞分泌因子與內容物的制備如下：
[0014]第一步：間充質干細胞的組織成分液獲取步驟：取設定的間充質干細胞加入到細胞培養工廠中進行培養，獲得目標數量的間充質干細胞，然后用含有雙抗的PBS緩沖液反復對細胞培養工廠中的目標間充質干細胞進行清洗，然后將收集的間充質干細胞放置與加入不含丙酮，不含酚紅，不含二甲基亞砜制劑的細胞培養基細胞培養基(無菌蒸餾水1000ml，60％低糖DMEM，40％MCDB201為基礎培養源，然后添加(按體積計算)1％～3％胎牛血清、維生素B1(單獨滅菌)1μg/ml，維生素B6(單獨滅菌)2mg/ml，5～15μg/L堿性成纖維細胞生長因子、10～25μg/L血小板生長因子、5～15μg/L內皮細胞生長因子，5～15μg/L表皮細胞生長因子，0.25～0.5g/L胎盤白蛋白，NaCl(氯化鈉)0.5g。完全培養基和含雙抗的PBS緩沖液體積比為1∶3～5。總PH值緩沖至7.2土0.2可由碳酸氫鈉或磷酸二氫鈉調節。)中的新容器內。此時采用酶溶細胞破壁法，在細胞培養基中加入溶壁酶，所需濃度為1
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2％(W/V)，酶解溫度為25
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35℃，酶解時間為1
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2小時。用倒置顯微鏡觀本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種間充質干細胞分泌因子與內容物和馬齒筧干細胞提取物組合物，其特征在于：包括以下重量組分的原材料，間充質干細胞分泌因子凍干粉、馬齒筧干細胞提取物、透明質酸、蚯蚓激酶、芳香劑、乳化劑、增稠劑；其中，間充質干細胞分泌因子凍干粉10
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25份、馬齒筧干細胞提取物10
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20份、透明質酸10
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30份、蚯蚓激酶1
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8份、芳香劑0.01
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1份、乳化劑2
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10份、增稠劑0.1
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1份。2.根據權利要求1所述的一種間充質干細胞分泌因子與內容物和馬齒筧干細胞提取物組合物，其特征在于：所述原材料包括以下材料及重量組分：間充質干細胞分泌因子凍干粉10
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15份、馬齒筧干細胞提取物10
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15份、透明質酸15
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25份、蚯蚓激酶2
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5份、芳香劑0.01
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0.05份、乳化劑3
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5份、增稠劑0.1
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0.5份。3.根據權利要求1所述的一種間充質干細胞分泌因子與內容物和馬齒筧干細胞提取物組合物，其特征在于：所述原材料包括以下材料及重量組分：間充質干細胞分泌因子凍干粉10份，馬齒筧干細胞提取物10份，透明質酸15份，蚯蚓激酶2份，芳香劑0.01
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0.05份，乳化劑3份、增稠劑0.5份。4.根據權利要求1所述的一種間充質干細胞分泌因子與內容物和馬齒筧干細胞提取物組合物，其特征在于：所述原材料包括以下材料及重量組分：間充質干細胞分泌因子凍干粉15份，馬齒筧干細胞提取物15份，透明質酸25份，蚯蚓激酶5份，芳香劑0.05份，乳化劑5份、增稠劑0.5份。5.根據權利要求1所述的一種間充質干細胞分泌因子與內容物和馬齒筧干細胞提取物組合物，其特征在于：所述原材料包括以下材料及重量組分：間充質干細胞分泌因子凍干粉10份，馬齒筧干細胞提取物15份，透明質酸20份，蚯蚓激酶4份，芳香劑0.05份，乳化劑5份。6.根據權利要求1
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5所述的一種間充質干細胞分泌因子與內容物和馬齒筧干細胞提取物組合物，其特征在于：所述間充質干細胞分泌因子與內容物的制備如下：第一步：間充質干細胞的組織成分液獲取步驟：取設定的間充質干細胞加入到細胞培養工廠中進行培養，獲得目標數量的間充質干細胞，然后用含有雙抗的PBS緩沖液反復對細胞培養工廠中的目標間充質干細胞進行清洗，然后將收集的間充質干細胞放置與加入不含丙酮，不含酚紅，不含二甲基亞砜制劑的細胞培養基細胞培養基(無菌蒸餾水1000ml，60％低糖DMEM，40％MCDB201為基礎培養源，然后添加(按體積計算)1％～3％胎牛血清、維生素B1(單獨滅菌)1μg/ml，維生素B6(單獨滅菌)2mg/ml，5～15μg/L堿性成纖維細胞生長因子、10～25μg/L血小板生長因子、5～15μg/L內皮細胞生長因子，5～15μg/L表皮細胞生長因子，0.25～0.5g/L胎盤白蛋白，NaCl(氯化鈉)0.5g，完全培養基和含雙抗的PBS緩沖液體積比為1∶3～5，總PH值緩沖至7.2土0.2可由碳酸氫鈉或磷酸二氫鈉調節)中的新容器內，此時采用酶溶細胞破壁法，在細胞培養基中加入溶壁酶，所需濃度為1
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2％(W/V)，酶解溫度為25
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35℃，酶解時間為1
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2小時，用倒置顯微鏡觀察細胞破碎程度，滿意后所制得液體為間充質干細胞的組織成分液；第二步，向細胞培養工廠中繼續加入蛋白培養基P1和含雙抗的PBS緩沖液繼續進行培養，通過蛋白反應測試，達到目標蛋白濃度后，吸取細胞培養工廠中的上清液，放置與新的容器內，在上清液中加入PCFT聚合鐵陽離子高分子聚合絮凝劑，使所吸取的上清液中蛋白質發生沉淀，然后將含有沉淀的上清液通過纖維濾紙或濾膜進行過濾，將過濾沉淀的蛋白質轉移到半透膜中，用無菌蒸餾水對半透膜中的沉淀物質進行數次清洗，將以蛋白質為主
要成分的沉淀從半透膜上收集至新容器中，所制得液體為間充質干細胞的組織成分的蛋白加強培養液；第三步，纖維濾紙或濾膜進行過濾后不沉淀的溶解液，收集至新容器內，為細胞內可溶性的大量粘多糖，脂肪小體等小分子物質的溶液；以上三步獲得的均為間充質干細胞的組織成分；第四步，間充質干細胞的干細胞分泌因子液獲取步驟：取設定的間充質干細胞加入到細胞培養工廠中進行培養，獲得目標數量的間充質干細胞，然后用含有雙抗的PBS緩沖液反復對細胞培養工廠中的目標間充質干細胞進行清洗，移出含間充質干細胞的A液前體后，繼續向原有細胞培養工廠中再次添加蛋白培養基P1(P1：無菌蒸餾水1000ml，甘氨酸0.5g，天冬酰胺0.5g，天冬酰胺0.5g，絲氨酸0.5g，蘇氨酸0.5g，半胱氨酸0.5g，Na2HPO4(磷酸氫二鈉)2.0g，KH2PO4(磷酸二氫鉀)3.0g，NaCl(氯化鈉)0.5g，NH4Cl(氯化銨)0.5g,葡萄糖(單獨滅菌)10.0g，維生素B1(單獨滅菌)1μg/ml.)和含雙抗的PBS緩沖液，繼續進行培養，通過蛋白反應測試，達到目標蛋白濃度后，吸取細胞培養工廠中的上清液，放置與新的容器內，在上清液中加入PCFT聚合鐵陽離子高分子聚合絮凝劑，使所吸取的上清液中蛋白質發生沉淀，然后將含有沉淀的上清液通過纖維濾紙或濾膜進行過濾，將過濾沉淀的蛋白質轉移到半透膜中，用去離子水對半透膜中的沉淀物質進行數次清洗，將以蛋白質為主要成分的沉淀從半透膜上收集至新容...

【專利技術屬性】
技術研發人員：劉哲，
申請(專利權)人：劉哲，
類型：發明
國別省市：