本發明專利技術公開了具有防腐功效的石斛多肽提取物及其制備方法和應用。屬于化妝品領域，解決了現有化妝品中添加化學防腐劑對人體刺激性強、防腐抗菌效果不理想的問題。石斛多肽提取物的制備包括如下步驟：(1)酶解提取：選取石斛藥材加入純化水和復合酶，酶解提取；(2)石斛多肽純化：將酶解液滅活后，用納濾膜過濾，濾液減壓濃縮、乙醇沉淀、濾液再過低分子納濾膜，截留液濃縮，烘干，得到肉蓯蓉多肽提取物。該肉蓯蓉多肽提取物在護膚品中的添加量，按質量分數計，為0.05～0.3％，添加量少，具有很好的抑菌防腐效果。防腐效果。
【技術實現步驟摘要】
具有防腐功效的石斛多肽提取物及其制備方法和應用
[0001]本專利技術屬于天然產物提取應用領域，具體的涉及一種具有防腐功效的石斛多肽提取物及其制備方法和應用。
技術介紹
[0002]霍山石斛(學名：Dendrobium huoshanense C.Z.Tang et S.J.Cheng)俗稱米斛，是蘭科石斛屬的草本植物，中國國家地理標志產品。主產于大別山區的安徽省霍山縣，大多生長在云霧繚繞的懸崖峭壁崖石縫隙間和參天古樹上，生于山地林中樹干上和山谷巖石上。2020年版的《中華人民共和國藥典》新增霍山石斛，擁有多種生物活性，不僅可以益胃生津，增強機體免疫力。
[0003]生物活性肽(Bioactive peptide)是由20個天然氨基酸構成的小到兩個氨基酸大到數百個氨基酸的并具有特殊生物功能的多肽類化合物。肽雖然是由氨基酸組成的，但是具有許多單個氨基酸所不具備的功能。生物活性肽可以通過水解蛋白質得到，其生物活性也在水解過程中被釋放出來。隨著研究的深入，生物活性肽的多種生物活性已經被大量的研究證實，常被提及活性的有降血糖活性、抑菌活性、抗癌活性、抗病毒活性、免疫調節活性等。可以預測，在不久的將來生物活性肽將成為人類篩選藥物的天然資源寶庫。
[0004]化妝品市場上的產品大部分都添加化學防腐劑，如苯氧乙醇，尼泊金酯類等，這些化學防腐劑，在發揮防腐作用的同時可能會導致皮膚潛在危害，如影響皮膚屏障，皮膚松弛，過敏，角質層增厚等問題。因此尋找純天然，植物體系，安全有效的防腐劑是目前的熱點，雖然有較多的天然來源的成分具有防腐抗菌作用，但是涉及對皮膚的刺激性，純度，氣味以及溶解性等問題，導致眾多植物提取物不能或者不適合添加到化妝品中作為防腐劑使用；部分植物提取物作為防腐劑添加到化妝品中，其防腐抗菌效果也不理想。
技術實現思路
[0005]專利技術目的：本專利技術的目的是針對現有的技術存在上述問題，提供了一種具有防腐功效的石斛多肽提取物的制備及其在化妝品中應用，本專利技術方法環保，高效，可以制備防腐功效的石斛多肽提取物應用于護膚品，替代化學防腐劑，適合工業化生產。
[0006]技術方案：一種具有防腐功效的石斛多肽提取物的制備方法，包括以下步驟：
[0007](1)酶解提取：選取石斛藥材碎至20～40目，按固液比1：6～15加入純化水，加入石斛重量0.05％～0.3％的復合酶進行酶解，酶解過程調節PH至7.0～7.5，控制溫度45～55℃，進行攪拌酶解8～12h；酶解結束后，過濾得到酶解提取液；
[0008](2)石斛多肽純化：將酶解提取液置于水浴滅活后，用截留分子量為10000Da的納濾膜過濾，濾液減壓濃縮至浸膏，加入5～8倍重量的乙醇，靜置沉淀，過濾除去多糖沉淀，將濾液過低分子納濾膜，將截留液濃縮，烘干，得到石斛多肽提取物。
[0009]其中，步驟(1)中，所述的石斛為霍山石斛。
[0010]本專利技術步驟(1)中，若pH過高或者過低，均影響酶的活力，導致石斛蛋白成分水解
不完全。
[0011]步驟(2)中，所述的低分子納濾膜截留分子量為1000Da。可以去除黃酮，氨基酸，無機鹽等小分子非肽類雜質。
[0012]步驟(1)中，所述的復合酶為中性蛋白酶和木瓜蛋白酶；
[0013]復合酶的用量過低，會影響催化反應的速度，導致石斛蛋白成分水解不完全；復合酶的用量過高，將增加純化的成本。所述中性蛋白酶和木瓜蛋白酶質量比為1:1～4，優選為1:1.5～2.5，最優選1:2。
[0014]本專利技術還提供了所述的制備方法制備得到的石斛多肽。
[0015]本專利技術還提供了所述的石斛多肽在制備化妝品中的應用。本專利技術制備得到的石斛多肽提取物，制備得到的石斛多肽提取物可用于化妝品，作為無添加防腐劑，具有防腐抑菌的功效。
[0016]本專利技術具有的積極有益效果：本專利技術制備得到的石斛多肽提取物分離于霍山石斛，具有防腐抑菌的功效，安全無毒副作用，可用于化妝品，作為無添加防腐劑。按質量分數計，為0.05～0.3％，添加量少，具有很好的抑菌防腐效果
具體實施方式
[0017]下面結合具體實施例詳細說明本專利技術。
[0018]實施例中，石斛為霍山石斛。
[0019]多肽含量測定：
[0020]多肽含量測定采用分光光度法，使用紫外分光光度計，分析方法是首先繪制對照品的吸收標準曲線，將待測的樣品稀釋至一定濃度，測定其吸光度，利用標準曲線計算得到多肽的含量。
[0021]標準曲線制備：精密稱取酪氨酸對照品適量，制成濃度為5mg/ml的對照品貯備液。
[0022]取上述對照品貯備液分別置于5個10ml的量瓶中，加5％(W/V)TCA制成濃度分別為0.0mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml的酪氨酸標準溶液。然后分別取6.0ml標準溶液，加入4.0ml雙縮脲試劑(1％(W/V)硫酸銅溶液+10％NaOH溶液)，于漩渦混合儀上混合均勻，靜置10min，2000r/min離心10min，取上清液于238nm下測定OD值(以第一管做空白對照)。以多肽的濃度為橫坐標X(mg/ml)，OD值為縱坐標Y，制作標準曲線。得回歸方程為y＝10.035x
?
0.145R2＝0.999。
[0023]多肽含量的測定：按照以上方法測定待測溶液中多肽吸光度A，由回歸方程即可求得質量濃度。取待測石斛多肽提取物，制成濃度為0.2mg/ml溶液。取樣品溶液1mL，按照上述的制作方法，測定其吸光度，每個樣品做三個平行試驗，取平均值，計算得到樣品中的多肽含量。
[0024]實施例1：
[0025](1)酶解提取：選取1kg石斛藥材碎至20～40目，加入純化水10L，加入0.4g中性蛋白酶(北京鴻潤寶順科技，貨號200810)和0.6g木瓜蛋白酶(北京鴻潤寶順科技，貨號190220)；酶解過程用10％(W/V)的氫氧化鈉溶液調節PH至7.0，控制溫度50℃，進行攪拌酶解8h。酶解結束后，過濾得到酶解提取液。
[0026](2)石斛多肽純化：將酶解提取液置于90℃水浴滅活10min，用截留分子量為
10000Da的納濾膜過濾，濾液減壓濃縮至浸膏，加入5倍重量的乙醇，靜置沉淀，過濾除去多糖沉淀，將濾液過截留分子量為1000Da低分子納濾膜，將截留液濃縮，烘干，得到石斛多肽提取物2.85g，多肽純度82.6％。
[0027]實施例2：
[0028](1)酶解提取：選取1kg石斛藥材碎至20～40目，加入純化水10L，加入0.6g中性蛋白酶(北京鴻潤寶順科技，貨號200810)和1.2g木瓜蛋白酶(北京鴻潤寶順科技，貨號190220)；酶解過程用10％(W/V)的氫氧化鈉溶液調節PH至7.2，控制溫度55℃，進行攪拌酶解10h。酶解結束后，過濾得到酶解提取液；
[0029](2)石斛多肽純化：將酶解提取液置于90℃水浴滅活10min，用截留分子量為10000Da的納濾膜過濾本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
1.一種具有防腐功效的石斛多肽提取物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)酶解提取：選取石斛藥材碎至20～40目，按固液比1：6～15加入純化水，加入石斛重量0.05％～0.3％的復合酶進行酶解，酶解過程調節PH至7.0～7.5，控制溫度45～55℃，進行攪拌酶解8～12h；酶解結束后，過濾得到酶解提取液；(2)石斛多肽純化：將酶解提取液置于水浴滅活后，用截留分子量為10000Da的納濾膜過濾，濾液減壓濃縮至浸膏，加入5～8倍重量的乙醇，靜置沉淀，過濾除去多糖沉淀，將濾液過低分子納濾膜，將截留液濃縮，烘干，得到石斛多肽提取物。2.根據權利要求1所述的具有防腐功效的石斛多肽提取物的制備方法...
【專利技術屬性】
技術研發人員：魏元剛，季曉雨，張昊，
申請(專利權)人：江蘇耐雀生物工程技術有限公司，
類型：發明
國別省市：
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