一種青春雙歧桿菌菌株及其應用制造技術

本發明專利技術公開了一種青春雙歧桿菌(Bifidobacterium adolescents)菌株ZJ2，該菌株是從健康百歲長壽老人糞便中分離篩選而得，且已于2019年11月04日保藏于中國微生物菌種保藏中心，保藏編號為CGMCC No.18901。該菌株對酸和膽鹽具有良好的耐受作用，培養原液以及5倍濃縮液對小鼠無毒性作用，青春雙歧桿菌ZJ2對外源加入的0.1mg/ml膽固醇孵育48h后膽固醇的降解率29.15％，對大腸桿菌ATCC33849、沙門氏菌ATCC14028、綠膿桿菌ATCC9027、肺炎克雷伯桿菌ATCC700603、金黃色葡萄球菌NCTC8325、單增李斯特菌ATCC19115均有一定的抑制效果以及對菌株ZJ2對萬古霉素(Van)、紅霉素(Ery)以及四環素(Tet)敏感，同時青春雙歧桿菌菌株ZJ2具有良好的抗氧化能力。

【技術實現步驟摘要】
一種青春雙歧桿菌菌株及其應用
本專利技術屬于益生菌
，具體涉及一種青春雙歧桿菌菌株。
技術介紹
腸道作為人體最龐大、最復雜的微生態系統，在維持機體正常免疫防御功能中發揮著極其重要的作用，腸道菌群本身及其代謝產物越來越受到科學家們的重視。人體腸道中定植著大量的微生物。腸道微生物與人體健康與疾病之間存在著十分密切的關系。腸道微生物可分為有益菌、中性菌和有害菌3大類。有益菌，主要以各種雙歧桿菌、乳酸桿菌為代表的益生菌群體，是人體健康不可缺少的要素，可以合成各種維生素，發揮著參與食物的消化，促進腸道蠕動，抑制致病菌群的生長，分解有害、有毒物質等重要作用。有害菌，即能夠產生致癌物等有害物質，或者影響免疫系統的功能的致病菌。中性菌，即具有雙重作用的細菌，如大腸桿菌、腸球菌等，在正常情況下對健康有益，一旦腸道內的益生菌屏障受到破壞，腸道通透性增加，中性菌就會加入有害菌的大軍，威脅人體健康。益生菌是一類可以改善人體腸內微生態的平衡，并對機體有正面效益的活性微生物，能夠定植于人體腸道、生殖系統內，具有緩解不耐乳糖癥狀、預防生殖系統感染、增強人體免疫力、降膽固醇、幫助吸收營養成分、增強植物新陳代謝等有益作用。人體內常見的益生菌主要有嗜酸乳桿菌、雙歧桿菌、乳酸菌、酪酸梭菌、酵母菌和放線菌等，其中雙歧桿菌是一種專性厭氧的革蘭氏陽性細菌，不運動，形態多變，呈現彎曲桿狀、L、V或Y形等多種形態。細胞呈桿狀，其末端分叉，故命名為雙歧桿菌。雙歧桿菌主要寄居在人體的胃腸道內，分布在胃腸的數量及種類會隨年齡階段的增長而減少，分布最多的是母乳嬰兒時期，是健康者腸道內的優勢菌種，其種類和數量隨年齡呈動態變化，而且其改變與機體內許多生理病理變化關系密切。隨著年齡增加，有害菌的數量增多，產生的毒素加速腸道老化和免疫力下降等因素，正常老年人腸道有益菌(如雙歧桿菌)的豐度降低。然而有文章報道發現健康百歲老人腸道內的雙歧桿菌種類豐富，研究者對這些百歲老人進行體檢發現：他們體內的雙歧桿菌等有益菌占比率明顯高于普通老人，相當于青少年水平。通過多年考察，研究者們認為這些百歲老人與其所在的良好的自然生態環境和生活習慣密不可分。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種青春雙歧桿菌菌株，克服了現有技術的不足，在長壽老人的糞便中分離篩選出了青春雙歧桿菌菌株ZJ2，并對該菌株的環境耐受情況、抑菌作用、自由基的清除能力和還原力大小進行試驗。為解決上述問題，本專利技術所采取的技術方案如下：一種青春雙歧桿菌菌株，所述菌株由健康百歲長壽老人的糞便中分離篩選得到的，命名為青春雙歧桿菌(Bifidobacteriumadolescents)ZJ2，且已于2019年11月04日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCCNO.18901。本專利技術還保護了一種活性成分中含有上述青春雙歧桿菌菌株ZJ2的菌劑。本專利技術還保護了一種成分中含有上述青春雙歧桿菌菌株ZJ2的菌劑的組合物。本專利技術還保護了上述組合物或者菌劑在食品中的應用。本專利技術還保護了上述組合物或者菌劑在保健產品中的應用。本專利技術最后還保護了上述組合物或者菌劑在抑制胃腸道致病菌藥物中的應用。青春雙歧桿菌ZJ2菌株在pH3.0環境中孵育2h后仍能存活，對0.3％膽鹽環境也有一定的耐受；對青春雙歧桿菌ZJ2對大腸桿菌ATCC33849、沙門氏菌ATCC14028、綠膿桿菌ATCC9027、肺炎克雷伯桿菌ATCC700603、金黃色葡萄球菌NCTC8325、單增李斯特菌ATCC19115均有抑制效果；對外源加入0.1mg/ml膽固醇孵育48h后膽固醇的降解率為29.15％；且對DPPH自由基和ABTS+自由基有良好的清除能力，有良好的還原力并對亞麻酸過氧化有一定抑制作用。本專利技術與現有技術相比較，具有以下有益效果：本專利技術在長壽老人的糞便中分離篩選出了青春雙歧桿菌菌株ZJ2，并對該菌株的環境耐受情況、抑菌作用、自由基的清除能力和還原力大小進行試驗；經過試驗發現，該菌株對胃腸道內的致病菌具有一定的抑制作用，有助于恢復胃腸道微生物菌群的穩定和協調。附圖說明圖1為青春雙歧桿菌ZJ2菌株菌落示意圖。圖2為青春雙歧桿菌ZJ2菌株與相關種的16SrDNA序列系統發育樹。圖3為青春雙歧桿菌ZJ2菌株對酸的耐受情況的柱狀統計圖。圖4為青春雙歧桿菌ZJ2菌株對膽鹽的耐受情況的柱狀統計圖。圖5為青春雙歧桿菌ZJ2菌株對幾種病原菌的抑菌作用效果圖。圖6為青春雙歧桿菌ZJ2菌株對DPPH自由基的清除能力的柱狀統計圖。圖7為青春雙歧桿菌ZJ2菌株的還原力大小的柱狀統計圖。圖8為青春雙歧桿菌ZJ2菌株對亞麻酸過氧化的抑制作用的柱狀統計圖。圖9為青春雙歧桿菌ZJ2菌株對ABTS+自由基的清除能力的柱狀統計圖。具體實施方式下面將結合本專利技術實施例中的附圖，對本專利技術實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本專利技術一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本專利技術中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本專利技術保護的范圍。實施例1分離篩選鑒定在厭氧工作站里，取安徽省亳州市譙城區的健康百歲長壽老人的糞便樣品2g，用無菌生理鹽水進行梯度稀釋，分別涂布于BL、BBL、BS、TPY及MRS-L等固體培養基，于37℃厭氧培養24-48h后選取菌落數量適中的平板，挑取乳白色圓形菌落進行劃線分離2-3次，得到純化的單菌落。將分離得到的菌株分別進行液體培養，所得到的菌體用于抽取菌株的基因組DNA，利用設計的引物擴增其基因片段，將擴增的16SrDNA基因片段測序，測序結果經NCBI數據庫Blast比對，初步判斷菌株的種屬分類。根據《益生菌類保健食品申報與審評規定(試行)》，判定分離篩選出的菌株屬于益生菌類保健品的菌株，將篩選純化后的菌株接種于TPY肉湯中，菌液與50％的甘油(生理鹽水配置)等體積混合，保存于-80℃冰箱備用。⑴定性鑒定按照《伯杰細菌鑒定手冊》和《常見細菌系統鑒定手冊》，并結合之前觀察的菌株形態特征和生理生化特性，對分離得到的ZJ2菌株進行初步鑒定，可初步判斷該菌株歸屬于雙歧桿菌。該菌株為厭氧的革蘭氏陽性細菌，菌株細胞長而稍彎曲，有多種形態，如Y型、V型、長桿狀、彎曲弧狀。該菌株菌落光滑、凸圓、邊緣完整、乳脂白色、具有柔軟的質地，如圖1所示。該菌株的生理生化特征如表1所示。表1ZJ2菌株API20鑒定結果符號說明：“+”，陽性；“-”，陰性。使用細菌基因組提取試劑盒提取基因組DNA，PCR擴增目標序列后進行測序，將測序結果在數據庫中進行序列比對，獲得與其相似性較高的其他菌株的基因序列，詳見序列表。使用MEGA7.0軟件構建系統發育樹，如圖2所示，確定該菌的種屬分類地位，由進化樹圖可看出ZJ2菌株定位在青春雙岐桿菌。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
1.一種青春雙歧桿菌菌株，其特征在于：所述菌株由健康百歲長壽老人的糞便中分離篩選得到的，命名為青春雙歧桿菌(Bifidobacterium adolescents)ZJ2，且已于2019年11月04日保藏于中國微生物菌種保藏中心，保藏編號為CGMCC NO.18901。/n

【技術特征摘要】
1.一種青春雙歧桿菌菌株，其特征在于：所述菌株由健康百歲長壽老人的糞便中分離篩選得到的，命名為青春雙歧桿菌(Bifidobacteriumadolescents)ZJ2，且已于2019年11月04日保藏于中國微生物菌種保藏中心，保藏編號為CGMCCNO.18901。


2.一種菌劑，其特征在于：所述菌劑的活性成分中含有權利要求1所述青春雙歧...

【專利技術屬性】
技術研發人員：李威，張丁，王瑋，金澤宇，孫寶林，郭建，
申請(專利權)人：卓源健康科技有限公司，
類型：發明
國別省市：安徽;34