一種具有抑菌效果的解淀粉芽孢桿菌HD-1菌株及其分離方法和應(yīng)用技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種具有抑菌效果的解淀粉芽孢桿菌Bacillus amyloliquefaciens HD

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
一種具有抑菌效果的解淀粉芽孢桿菌HD
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1菌株及其分離方法和應(yīng)用


[0001]本專利技術(shù)涉及生物工程
，具體涉及一種具有抑菌效果的解淀粉芽孢桿菌Bacillus amyloliquefaciens HD
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1菌株及其分離方法和應(yīng)用。

技術(shù)介紹

[0002]豆腐渣是豆腐加工時所產(chǎn)生的一種副產(chǎn)品，通過對豆腐渣的營養(yǎng)成分進(jìn)行分析，人們發(fā)現(xiàn)豆腐渣中含有17～19％粗蛋白、5～7％粗脂肪、36～38％總糖等，營養(yǎng)價值甚高；但目前我國對豆腐渣的利用率較低，除部分豆腐渣被用作飼料、少量用于制備膳食纖維以外，其余大部分的豆腐渣都作為廢棄物扔掉。究其原因是，豆腐渣本身含水量很大且營養(yǎng)豐富，使它成為微生物的良好棲身地，未經(jīng)加工或者干燥處理的豆腐渣容易在短時間內(nèi)迅速腐敗，再者豆腐渣干燥處理費用大，或干燥后作為原料還沒有很好的銷路，嚴(yán)重妨礙了豆腐渣的綜合利用，造成了資源的大大浪費和環(huán)境污染問題。

技術(shù)實現(xiàn)思路

[0003]本專利技術(shù)所要解決的技術(shù)問題是克服
技術(shù)介紹
的技術(shù)缺陷，提供一種具有抑菌效果的解淀粉芽孢桿菌Bacillus amyloliquefaciens HD
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1菌株及其分離方法和應(yīng)用。本專利技術(shù)主要是利用一種從條紋斑竹鯊Chiloscyllium plagiosum腸道內(nèi)分離得到的一株解淀粉芽孢桿菌Bacillus amyloliquefaciens HD
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1的菌劑處理豆腐渣延長其腐敗時間的技術(shù)。該技術(shù)包括對條紋斑竹鯊腸道的處理、原菌液的獲取、菌群的分離固體培養(yǎng)基、菌劑的制備、豆腐渣防腐處理。經(jīng)防腐實驗證明，本專利技術(shù)菌劑可有效延長豆腐渣的腐敗時間，為更好的綜合利用豆腐渣提供便利。
[0004]本專利技術(shù)解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案如下：
[0005]一種具有抑菌效果的解淀粉芽孢桿菌Bacillus amyloliquefaciens HD
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1菌株，分離自條紋斑竹鯊，并于2019年7月8日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏號為CGMCC No.18080。
[0006]所述芽孢桿菌HD
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1菌株的單菌落形態(tài)如圖1所示。
[0007]所述芽孢桿菌HD
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1菌株的分離過程如下：
[0008]條紋斑竹鯊，來自廣東海域，購回后放于遮光水箱內(nèi)暫養(yǎng)數(shù)日后，對其進(jìn)行手術(shù)取其腸道，75％的酒精擦拭外表面后于紫外超凈臺內(nèi)解剖其腸道，取出腸道內(nèi)容物及粘膜液，使用生理鹽水稀釋，得到原菌液。以稀釋涂布的方法涂布于海水LB固體培養(yǎng)基內(nèi)，置于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)，海水LB固體培養(yǎng)基成分：酵母提取物5g，胰蛋白胨10g，氯化鈉10g，瓊脂13g，1000mL人工海水，搖動容器直至溶質(zhì)溶解，在121℃下滅菌20min，每個玻璃平板內(nèi)倒入15～30mL培養(yǎng)基，優(yōu)選為20mL培養(yǎng)基。人工海水為本實驗室自配，由蒸餾水加適量海鹽溶解的母液配制而成，pH為6.8～7.2，pH優(yōu)選為7.0。
[0009]所述芽孢桿菌HD
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1菌株的遺傳學(xué)特征：用細(xì)菌基因組試劑盒提取細(xì)菌基因DNA后，
amyloliquefaciens HD
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1菌株的16S rDNA序列圖；
[0020]圖3為本專利技術(shù)實施例1具有抑菌效果的解淀粉芽孢桿菌Bacillus amyloliquefaciens HD
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1菌株的PCR鑒定電泳圖。
具體實施方式
[0021]為了更好地理解本專利技術(shù)的內(nèi)容，下面結(jié)合具體實施例和附圖作進(jìn)一步說明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于對本專利技術(shù)進(jìn)一步說明，而不用于限制本專利技術(shù)的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本專利技術(shù)所述的內(nèi)容后，該領(lǐng)域的技術(shù)人員對本專利技術(shù)作出一些非本質(zhì)的改動或調(diào)整，仍屬于本專利技術(shù)的保護(hù)范圍。
[0022]以下是對實驗材料的具體描述。除非另有說明，本專利技術(shù)使用的所有科學(xué)和技術(shù)術(shù)語具有與本專利技術(shù)所屬
人員通常理解的相同含義。
[0023]實施例1
[0024]材料和試劑：
[0025]1.材料：
[0026]條紋斑竹鯊來自廣東海域，鮮豆腐渣購于浙江省杭州市江干區(qū)高沙農(nóng)貿(mào)市場。
[0027]2.主要試劑：
[0028]海鹽購自仟湖魚業(yè)集團(tuán)；瓊脂粉(Agar)購自日本BIOSHARP公司；蛋白胨(Tryptone)、酵母提取物(Yeast Extract)購自英國Oxoid公司；其余試劑為國產(chǎn)分析純。
[0029]LB液體培養(yǎng)基：5g酵母提取物，10g胰化蛋白胨，10g氯化鈉，1L去離子水。
[0030]3.主要儀器：
[0031]索氏抽提器、凱式定氮儀、分析天平、恒溫水浴鍋、蒸餾裝置。
[0032]菌株HD
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1對豆腐渣防腐效果的檢驗具體方法和步驟：
[0033](1)接種1mL芽孢桿菌HD
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1菌液至100mL LB液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，置于220rpm，37℃搖床培養(yǎng)過夜；
[0034](2)分別取1kg鮮豆腐渣作為實驗組、對照組，實驗組加入100ml上述菌液并混合均勻，對照組加入100ml去離子水混合均勻，各自取樣10g用于檢測，其余樣品密封保存于陰涼干燥處，每兩天取樣一次；
[0035](3)各樣品經(jīng)冷凍干燥后粉碎，過80目篩，得到豆腐渣粉，用于檢測其中營養(yǎng)物質(zhì)。
[0036]營養(yǎng)成分測定方法如下：
[0037]蛋白質(zhì)含量測定：凱式定氮法(GB5009.5
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2016)；脂肪含量測定：索式提取法(GB5009.6
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2016)；
[0038]粗纖維含量測定：酸洗堿洗法(GB/T5009.10
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2003)；總糖量測定：稱取一定量豆腐渣粉放入100ml燒杯中，加入10ml 6mol/L HCL，40ml蒸餾水，在沸水浴中加熱30min，去除1～2滴水解液置于白板上，加1滴I
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KI溶液檢驗水解是否完全。水解完畢冷卻至室溫后加入1滴酚酞指示劑，以6mol/L NaOH溶液中和溶液至溶液呈微紅色，過濾，采用DNS法測總糖含量。
[0039]表1豆腐渣樣品中營養(yǎng)成分所占干重比
[0040][0041][0042]結(jié)論：根據(jù)表1中營養(yǎng)成分的實時變化情況以及對豆腐渣樣品的實時觀測，可知實驗組大致在第十五天開始出現(xiàn)腐敗，而對照組在第五～第六天開始腐敗，由此可知本專利技術(shù)解淀粉芽孢桿菌Bacillus amyloliquefaciens HD
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1大致可延長豆腐渣保鮮效果9～10天。
[0043]上述說明并非對本專利技術(shù)的限制，本專利技術(shù)也并不限于上述舉例。本
的普通技術(shù)人員在本專利技術(shù)的實質(zhì)范圍內(nèi)，做出的變化、改型、添加或替換，也應(yīng)屬于本專利技術(shù)的保護(hù)范圍。
本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點】

【技術(shù)特征摘要】
1.一種具有抑菌效果的解淀粉芽孢桿菌Bacillus amyloliquefaciens HD
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1菌株，其特征在于，分離自條紋斑竹鯊，并于2019年7月8日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏號為CGMCC No.18080。2.如權(quán)利要求1所述的一種具有抑菌效果的解淀粉芽孢桿菌Bacillus amyloliquefaciens HD
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1菌株，其特征在于，所述菌株的16S rDNA序列如SEQ ID No.1所示。3.如權(quán)利要求1所述的一種具有抑菌效果的解淀粉芽孢桿菌Bacillus amyloliquefaciens HD
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1菌株的分離方法，其特征在于，包括如下步驟：(1)取條紋斑竹鯊腸道的內(nèi)容物及粘膜液，使用生理鹽水稀釋，得到原菌液；(2)以稀釋涂布的方法涂布于海水LB固體培養(yǎng)基內(nèi)，置于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)，搖動容器直至溶質(zhì)溶解；(3)在121℃下滅菌20min，每個玻璃平板內(nèi)倒入15～30mL培養(yǎng)基；所述步驟(2)中，所述海水LB固體培養(yǎng)基成分為：酵母提取物5g，胰蛋白胨10g，氯化鈉10g，瓊脂13g，1000mL人工海水；所述人工海水由蒸餾水加適量海鹽溶解的母液配制而成，pH為6.8～7.2。4.如權(quán)利要求3所述的一種具有抑菌效果的解淀粉芽孢桿菌Bacillus amyloliq...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：呂正兵，葉盛群，方銀兵，
申請(專利權(quán))人：寧波中瑞生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：