一種預防干細胞不良反應的細胞組合及其制備方法技術

本發明專利技術公開了一種預防干細胞不良反應的細胞組合及其制備方法，屬于細胞治療領域。其中，所述細胞組合包括免疫活性細胞和干細胞；所述免疫活性細胞為分離自健康人的CIK細胞，所述干細胞為間充質干細胞。本發明專利技術還公開了所述免疫活性細胞和干細胞組合制備方法及其在預防和治療癌癥以及抗衰老方面的應用。本發明專利技術的免疫活性細胞來自年輕的健康人的優良細胞，其抗癌抗病毒的免疫能力更好。利用本發明專利技術的免疫活性細胞和干細胞組合進行臨床應用，既能發揮干細胞的生物功能，又能消除或抑制干細胞的成瘤性隱患，并且無不良反應，安全性高，具有重要的臨床價值。

【技術實現步驟摘要】
一種預防干細胞不良反應的細胞組合及其制備方法
本專利技術屬于細胞治療領域，具體地，涉及一種預防干細胞不良反應的細胞組合及其制備方法。
技術介紹
據國家癌癥中心2018年2月報告：由于環境惡化等因素，導致全球每年新增癌癥患者1400多萬，我國每年新發病例429萬，占全球新增癌癥病例的30％，目前中國有1500多萬的癥患者，每年死亡病例達300萬。癌癥已成為危害人類生命和健康的第一殺手。腫瘤的治療任重道遠，美國曾把“向癌癥宣戰”作為基本國策之一，15年投入25億美元，但結果不令人滿意：腫瘤5年生存率提高4％，但發病率確升高7％。在我國，腫瘤的三大傳統療法都有其瓶頸和弊端。小肝癌切除例數20年來增加了10倍多，但患者的5年生存率卻沒有明顯提高。傳統的放療化療或可帶來反作用，因為放療和化療治癌也可能致癌；目前肺癌的切除率為70％-97％，可肺癌總的5年生存率僅為8％-11％。肺癌的外科治療可能已達極限。相比之下，近年來腫瘤的生物治療卻得到了突飛猛進的發展。腫瘤的生物治療已成為三大治療技術之后的第四大療法，也是最有可能治愈癌癥的方法。在過去的20多年中，自體CIK細胞已普遍用于腫瘤的治療(國家認定為第三類醫療技術)，然而，自體CIK細胞治療，臨床療效未盡人意：有效率平均在30％以下。干細胞在抗擊疾病，抗衰回春和治療亞健康中發揮著重要作用。目前已經在治療某些難治性疾病和抗衰保健方面展現出了良好效果。然而，干細胞臨床應用存在重大的案例隱患：具有成瘤性，曾有患者干細胞卵巢抗衰后引起卵巢瘤，另有小兒腦病患者干細胞腦部注射治療后出現腦瘤。隨著干細胞技術的快速推廣和普遍應用，對免疫功能低下的人群和老年人群，這種隱患將更加明顯。
技術實現思路
為了解決上述技術問題中的至少一個，本專利技術提供的技術方案如下：本專利技術一方面提供一種預防干細胞不良反應的細胞組合，包括免疫活性細胞和干細胞，所述免疫活性細胞為分離自健康人的CIK細胞，所述干細胞為間充質干細胞。CIK細胞，即細胞因子誘導的殺傷細胞(Cytokine-InducedKiller，CIK)，是一種新型的免疫活性細胞，健康人CIK細胞增殖速度快，抗癌能力強，細胞毒作用強，具有一定的免疫特性。干細胞是一類具有自我更新、高度增殖和多向分化潛能的細胞群體。一旦機體需要，這些干細胞可按照發育途徑，通過分裂而產生分化細胞，并進一步發育成組織或器官。間充質干細胞是一種多能干細胞，它具有干細胞的所有共性，即自我更新和多向分化能力。本專利技術將分離自健康人的CIK細胞和間充質干細胞組合使用，一方面可以發揮干細胞的生物功能，另一方面能夠消除或抑制干細胞的成瘤性隱患。在本專利技術的一些實施方案中，所述CIK細胞分離自健康人外周血。在本專利技術的一些具體實施方案中，所述健康人符合以下條件：(1)年齡18-30歲；(2)血象WBC在5000/mm3以上，淋巴細胞20％以上；(3)無傳染病：乙、丙肝炎病毒檢測合格、艾滋病毒(HIV)、梅毒陰性；(4)流式細胞儀測：CD45+細胞大于2000/mm3；(5)外周血單核細胞對K562的自然殺傷活性大于80％。在本專利技術的一些實施方案中，所述間充質干細胞分離自臍血、臍帶、胎盤或骨髓。在本專利技術的一些具體實施方案中，所述間充質干細胞分離自骨髓。本專利技術第二方面提供一種免疫活性細胞和干細胞組合的制備方法，包括以下步驟：S1，制備CIK細胞：S11，獲得健康人的單核細胞；S12，對獲得的單核細胞進行擴增培養10-14天，獲得所述CIK細胞；S2，制備間充質干細胞：S21，采用密度梯度離心法從樣本中分離包含間充質干細胞的細胞；S22，采用貼壁培養篩選；S23，在無菌條件下進行培養6-7天，制備得到所述間充質干細胞。在本專利技術的一些實施方案中，步驟S11中，從健康人外周血中獲得單核細胞。在本專利技術的一些實施方案中，所述健康人符合以下條件：(1)年齡18-30歲；(2)血象WBC在5000/mm3以上，淋巴細胞20％以上；(3)無傳染病：乙、丙肝炎病毒檢測合格、艾滋病毒(HIV)、梅毒陰性；(4)流式細胞儀測：CD45+細胞大于2000/mm3；(5)外周血單核細胞對K562的自然殺傷活性大于80％。在本專利技術的一些實施方案中，步驟S21中所述樣本為臍血、臍帶、胎盤或骨髓。本專利技術的第三方面提供本專利技術第一方面所述的免疫活性細胞和干細胞組合在制備用于預防和治療癌癥的藥物的應用。在本專利技術的一些實施方案中，所述癌癥為惡性腫瘤。在本專利技術的一些具體實施方案中，所述惡性腫痛包括但不限于乳腺癌、肺癌、肝癌、乳腺癌、宮頸癌、胃癌、食管癌。本專利技術的第四方面提供本專利技術第一方面所述的免疫活性細胞和干細胞組合在制備用于防衰老的藥物中的應用。本專利技術的其他方面提供本專利技術第一方面所述的免疫活性細胞和干細胞組合在制備用于預防和治療其他疾病的藥物或臨床用制劑中的應用。在本專利技術的一些實施方案中，所述其他疾病選自免疫缺陷疾病中的一種。在本專利技術的一些具體實施方案中，所述其他疾病為系統性紅斑狼瘡。在本專利技術的一些實施方案中，所述其他疾病包括但不限于慢性肝炎、糖尿病、帕金森綜合癥、腦血管意外后遺癥、腦癱。本專利技術的有益效果相對于現有技術，本專利技術具有以下有效效果：本專利技術提供的免疫活性細胞和干細胞組合，不僅可以預防干細胞的不良反應，還具有抗癌、抗病和抗衰老的多重作用。本專利技術的免疫活性細胞來自年輕的健康人的優良細胞，其抗癌抗病毒的免疫能力更好。利用本專利技術的免疫活性細胞和干細胞組合進行臨床應用，既能發揮干細胞的生物功能，又能消除或抑制干細胞的成瘤性隱患，并且無不良反應，安全性高。附圖說明圖1示出了腫瘤患者(上)和健康人(下)來源的單核細胞培養21天時CD3CD56(CIK)比較。圖2示出了人骨髓間充質干細胞(hBMSCs)形態學觀察。A：原代hBMSCs(×100)；B：第3代hBMSCs(×100)，圖3示出了hBMSCs傳代培養生長曲線。圖4示出了流式細胞儀檢測hBMSCs表面標記物結果。圖5示出了hBMSCs體外定向成脂分化誘導結果。A：成脂分化誘導5天油紅O染色(×100)；B：成脂分化誘導21天油紅O染色(×100)。具體實施方式為了使本專利技術所解決的技術問題、技術方案及有益效果更加清楚明白，以下結合實施例，對本專利技術進行進一步詳細說明。實施例以下例子在此用于示范本專利技術的優選實施方案。本領域內的技術人員會明白，下述例子中披露的技術代表專利技術人發現的可以用于實施本專利技術的技術，因此可以視為實施本專利技術的優選方案。但是本領域內的技術人員根據本說明書應該明白，這里所公開的特定實施例可以做很多修改，仍然能得到相同的或者類似的結果，而非背離本文檔來自技高網...

【技術保護點】
1.一種預防干細胞不良反應的細胞組合，包括免疫活性細胞和干細胞，其特征在于，所述免疫活性細胞為分離自健康人的CIK細胞，所述干細胞為間充質干細胞。/n

【技術特征摘要】
1.一種預防干細胞不良反應的細胞組合，包括免疫活性細胞和干細胞，其特征在于，所述免疫活性細胞為分離自健康人的CIK細胞，所述干細胞為間充質干細胞。


2.根據權利要求1所述的細胞組合，其特征在于，所述CIK細胞分離自健康人外周血。


3.根據權利要求1所述的細胞組合，其特征在于，所述間充質干細胞分離自臍血、臍帶、胎盤或骨髓。


4.根據權利要求3所述的細胞組合，其特征在于，所述間充質干細胞分離自骨髓。


5.權利要求1所述細胞組合的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1，制備CIK細胞：
S11，獲得健康人的單核細胞；
S12，對獲得的單核細胞進行擴增培養10-14天，獲得所述CIK細胞；
S2，制備間充質干細胞：
S21，采用密度梯度離心法從樣本中分離包含間充質干細胞的細胞；
S22，采用貼壁培養篩選；
S23，在無菌條件下進行培養6-...

【專利技術屬性】
技術研發人員：祁巖超，祁秋干，
申請(專利權)人：祁巖超，祁秋干，
類型：發明
國別省市：廣東;44