一種測定全血中糖化血紅蛋白的洗脫梯度方法技術

本發明專利技術涉及臨床體外診斷檢測領域，公開了一種測定全血中糖化血紅蛋白的洗脫梯度方法，其中涉及試劑盒包括洗脫液A、洗脫液B和溶血劑，洗脫液A和洗脫液B分別包括緩沖液、表面活性劑和添加劑，溶血劑包括表面活性劑和添加劑，添加劑為蘇氨酸、β?丙氨酸、甘氨酸中的一種或一種以上；還公開了一種測定全血中糖化血紅蛋白的方法。本發明專利技術提供的糖化血紅蛋白試劑盒，可以避免樣本的測定值隨著樣本的保存時間的推移而發生變動，同時也減少了樣本前處理的復雜過程，從而實現糖化血紅蛋白的高效、準確檢測。此外，本發明專利技術提供的測定方法，對保存后的樣本也能夠實現快速、準確的檢測。

【技術實現步驟摘要】
一種測定全血中糖化血紅蛋白的洗脫梯度方法
本專利技術申請為申請日2018年12月29日，申請號為：201811635299.2，名稱為“一種測定全血中糖化血紅蛋白的試劑盒及方法”的專利技術專利申請的分案申請。本專利技術涉及臨床體外診斷檢測領域，尤其涉及一種測定全血中糖化血紅蛋白的洗脫梯度方法。
技術介紹
據國際糖尿病聯盟(InternationaleDiabetesFederation，IDF)統計，2017年全球糖尿病患者約有4.25億人。美國糖尿病控制及并發癥試驗(DiabetesControlandComplicationTrial，DCCT)和英國糖尿病控制與并發癥關系研究(UKProspectiveDiabetesStudy，UKPDS)發現糖化血紅蛋白(HbA1c)是糖尿病患者疾病控制程度的一項良好指標，它反映的是患者在檢測前120天內的平均血糖水平，該指標與抽血時間、病人是否空腹、是否使用胰島素等因素無關。在第59屆美國糖尿病協會(AmericanDiabetesAssociation，ADA)年會上，ADA將HbA1c作為血糖控制的金標準，提出所有糖尿病患者每年均應至少常規測定HbA1c兩次，并要求在臨床應用中，無論用什么方法反應血糖的變化，最后都要以HbA1c的變化作為最終評價一種藥物或一個治療方案的有效檢測指標。因此，HbA1c檢測的臨床意義非常重要。目前HbA1c的檢測方法主要包括色譜法、免疫法和電泳法。其中色譜法包括高效液相陽離子交換色譜法和高效液相硼酸親和色譜法等。作為HbA1c檢測的金標準，高效液相陽離子交換色譜法一向是臨床上最具應用價值、最精確的方法。利用高效液相陽離子交換色譜法測定全血中HbA1c的原理是：全血樣本用溶血劑溶血釋放目標蛋白，由于樣本中糖化血紅蛋白(HbA1c)和非糖化血紅蛋白(HbA0)的等電點不同，因此，在弱酸性條件下它們各自所帶正電荷的數量不同，所以，樣品經過糖化血紅蛋白分析柱時，與分析柱中帶有負電荷的離子交換固定相的吸附和交換能力存在差異，然后采用兩種不同鹽濃度的洗脫液(洗脫液A和洗脫液B)將各組份分離；首先用低鹽濃度的洗脫液A將HbA1c洗脫，再用高鹽濃度的洗脫液B將HbA0洗脫；被洗脫的蛋白依次通過檢測器，檢測器自動記錄其在415nm的光吸收強度變化，并將光信號轉化為電信號，得到物質信號譜圖，對收集到的譜圖數據進行分析計算得出HbA1c、HbA0峰的面積，HbA1c峰面積占總血紅蛋白Hb峰面積的百分含量即為人全血樣本中HbA1c的檢測結果。然而，在用上述液相離子交換色譜法測定HbA1c的研究時，樣本(例如全血樣本、全血稀釋樣本、全血凍干樣本等)保存后再進行HbA1c檢測時，測定值會隨著樣本的保存時間的推移而變動。公開號為CN101595230A的專利技術專利公開了一種HbA1c測定方法，同時也指出了含Hb試樣保存后再進行HbA1c檢測時，將得到比使用剛采集的含Hb試樣的測定值低的值。該專利采用在樣本中加入抑制劑的方法來避免因保存樣本而引起的HbA1c測定值的變動，但是，該方法需要測量者的直接參與，使測量過程復雜化，從而大大降低了檢測效率。
技術實現思路
本專利技術針對現有技術中樣本保存后再進行HbA1c檢測的測定值會隨著樣本的保存時間的推移而變動的缺點，提供了一種測定全血中糖化血紅蛋白的試劑盒及方法，利用該試劑盒可以高效、準確地體外定量測定人全血試樣中糖化血紅蛋白的濃度，而測定值不受樣本保存時間的影響。為了解決上述技術問題，本專利技術通過下述技術方案得以解決：一種測定全血中糖化血紅蛋白的試劑盒，包括洗脫液A、洗脫液B和溶血劑，洗脫液A和洗脫液B分別包括緩沖液、表面活性劑和添加劑，溶血劑包括表面活性劑和添加劑，添加劑為蘇氨酸、β-丙氨酸、甘氨酸中的一種或一種以上。作為優選，洗脫液A、洗脫液B和溶血劑中添加劑的添加量均為0.01g/L～1.00g/L，優選為0.05g/L～0.50g/L。作為優選，緩沖液為磷酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液和丁二酸鹽緩沖液中的一種或一種以上。由于磷酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液和丁二酸鹽緩沖液具有較寬的pH緩沖范圍，因此，將該緩沖液加入到洗脫液A和洗脫液B中能達到良好的洗脫效果。作為優選，洗脫液A中緩沖液的摩爾濃度為0.01mol/L～0.50mol/L，優選為0.05mol/L～0.50mol/L，在這個摩爾濃度下的緩沖液不僅具有合適的pH緩沖范圍，還能達到合適的洗脫效果。作為優選，洗脫液B中緩沖液的摩爾濃度為0.02mol/L～1.00mol/L，優選為0.06mol/L～1.00mol/L，在這個摩爾濃度下的緩沖液不僅具有合適的pH緩沖范圍，還能達到合適的洗脫效果。作為優選，表面活性劑為吐溫20、曲拉通X-100中的一種或兩種，表面活性劑的加入有利于增加生物膜對小分子的滲透性，有利于細胞溶解。表面活性劑的添加量為1.00g/L～20.00g/L，優選為5.00g/L～9.00g/L。作為優選，洗脫液A、洗脫液B和溶血劑中還包括防腐劑，防腐劑可以抑制微生物生長，增加洗脫液A、洗脫液B和溶血劑的貯藏時間。防腐劑優選為疊氮化鈉，因其有抑制細胞中基礎代謝酶的合成作用，從而抑制微生物生長，起到防腐作用。洗脫液A、洗脫液B和溶血劑中防腐劑的添加量小于等于5.00g/L，此時即可有效抑制微生物生長。作為優選，還包括分析柱、質控品和校準品，分析柱的填料為陽離子交換固定相，填料粒徑為3μm～10μm，柱長10mm～50mm，柱內徑4.0mm～4.6mm；質控品和校準品均為糖化血紅蛋白血樣凍干粉，校準品的糖化血紅蛋白血樣凍干粉可以通過IFCC(國際臨床化學和實驗室醫學聯盟)溯源。一種測定全血中糖化血紅蛋白的方法，包括以下幾個步驟：樣本中加入溶血劑進行溶血，溶血后的樣本在分析柱中用洗脫液洗脫得到HbA1c組分和HbA0組分后進行檢測，計算得到HbA1c的檢測結果；洗脫液為上述洗脫液A和上述洗脫液B。作為優選，洗脫條件為：分析柱的填料為陽離子交換固定相，填料粒徑為3μm～10μm，柱長10mm～50mm，柱內徑4.0mm～4.6mm；檢測波長：415nm；柱溫為37℃；洗脫梯度：0s～45s洗脫液A體積100％，洗脫液B體積0％；46s～75s洗脫液A體積0％，洗脫液B體積100％；76s～120s洗脫液A體積100％，洗脫液B體積0％；流速1.5mL/min，進樣量10μL。作為優選，樣本為全血樣本、全血稀釋樣本或全血凍干樣本。本專利技術由于采用了以上技術方案，具有顯著的技術效果：本專利技術提供的糖化血紅蛋白試劑盒，在洗脫液A、洗脫液B和溶血劑中均添加了添加劑，可以避免樣本的測定值隨著樣本的保存時間的推移而發生變動，同時也減少了樣本前處理的復雜過程，從而實現糖化血紅蛋白的高效、準確檢測。此外，本專利技術提供的測定方法，對保存后的樣本也能夠實現快速、準確的檢測。因此，對于血樣采集地點和測試地點不同、或收集一定數量樣本后集中檢測，需要對樣本進行保存后再檢測的本文檔來自技高網...

【技術保護點】
1.一種測定全血中糖化血紅蛋白的洗脫梯度方法，涉及試劑盒包括洗脫液A、洗脫液B和溶血劑，其特征在于：/n樣本中加入溶血劑后溶血，溶血后的樣本在分析柱中用洗脫液洗脫；/n洗脫用到的分析柱的填料為陽離子交換固定相；/n洗脫梯度：0s～45s洗脫液A體積100％，洗脫液B體積0％；46s～75s洗脫液A體積0％，洗脫液B體積100％；76s～120s洗脫液A體積100％，洗脫液B體積0％；/n洗脫液A包括緩沖液、表面活性劑、防腐劑和添加劑；/n洗脫液B包括緩沖液、表面活性劑、防腐劑和添加劑；/n溶血劑包括表面活性劑、防腐劑、添加劑。/n

【技術特征摘要】
1.一種測定全血中糖化血紅蛋白的洗脫梯度方法，涉及試劑盒包括洗脫液A、洗脫液B和溶血劑，其特征在于：
樣本中加入溶血劑后溶血，溶血后的樣本在分析柱中用洗脫液洗脫；
洗脫用到的分析柱的填料為陽離子交換固定相；
洗脫梯度：0s～45s洗脫液A體積100％，洗脫液B體積0％；46s～75s洗脫液A體積0％，洗脫液B體積100％；76s～120s洗脫液A體積100％，洗脫液B體積0％；
洗脫液A包括緩沖液、表面活性劑、防腐劑和添加劑；
洗脫液B包括緩沖液、表面活性劑、防腐劑和添加劑；
溶血劑包括表面活性劑、防腐劑、添加劑。


2.根據權利要求1所述的一種測定全血中糖化血紅蛋白的洗脫梯度方法，其特征在于：涉及洗脫梯方法使用的試劑盒包括洗脫液A、洗脫液B和溶血劑；
洗脫液A包括濃度為0.40g/L的一水合檸檬酸、濃度為2.38g/L的二水合檸檬酸三鈉、濃度為20.00g/L曲拉通X-100和吐溫20，質量比為1:1、濃度為0.2...

【專利技術屬性】
技術研發人員：孫旭東，王植，呂志剛，
申請(專利權)人：江山德瑞醫療科技有限公司，孫旭東，
類型：發明
國別省市：浙江;33