一種腸激酶凍干制劑制造技術

本發明專利技術提供了一種腸激酶凍干制劑，包含腸激酶、穩定劑、填充劑、非離子表面活性劑和緩沖劑；所述的穩定劑由氨基酸中的一種或多種和糖類中的一種或多種組成；所述的氨基酸為α-氨基酸及它們的可藥用的鹽形式；所述的糖類為非還原性多糖；所述的填充劑為甘露醇；所述的緩沖劑用于將制劑的pH維持在5.8~9.1的范圍。本發明專利技術具有如下技術效果：1）本發明專利技術的腸激酶凍干制劑在冷藏環境下儲存720天后純度均在95%以上，活性保持率均在90%以上；此外，各凍干制劑形態未發生明顯變化，其復溶后未見明顯可見異物；2）本發明專利技術的腸激酶凍干制劑在室溫環境下儲存60天后純度均在94%以上，活性保持率均在90%以上，各凍干制劑形態未發生明顯變化，其復溶后未見明顯可見異物。后未見明顯可見異物。后未見明顯可見異物。

【技術實現步驟摘要】
一種腸激酶凍干制劑


[0001]本專利技術涉及一種含有腸激酶的凍干制劑。

技術介紹

[0002]腸激酶(Enterokinase，EC 3.4.21.9，EK)又稱腸肽酶(Enteropeptidase)，是絲氨酸蛋白酶的胰凝乳蛋白酶家族的一部分，參與動物的消化過程。動物EK特異性的識別胰蛋白酶原的DDDDK序列，對其中賴氨酸羧基端的酰胺鍵進行酶切。
[0003]大腸桿菌融合蛋白表達系統現已廣泛用于蛋白質的制備，但融合蛋白中的融合伴侶可能會影響目標蛋白的活性中心的形成，如果進入人體還可能令人體產生針對融合伴侶的抗體，影響藥物效果并導致額外風險。因此必須用蛋白水解酶或化學裂解試劑切割融合蛋白，使融合伴侶與目標蛋白分開，并在后續純化過程中除去融合伴侶。由于具有相對較高的特異性和較寬的活性范圍，腸激酶及其衍生物是一種理想的用于處理融合蛋白的工具酶，在重組蛋白的生產中得到廣泛使用，在蛋白藥物研發中也起著重要作用。
[0004]目前，市場上的腸激酶產品大部分為液體制劑。而蛋白的液體制劑穩定性較差，其中的蛋白易于聚集、降解或失去活性，且液體制劑容易染菌，因此長期保存、銷售和搬運時會導致產品質量降低。通過冷凍干燥法制備的凍干制劑可以克服這些不足。冷凍干燥法是一種在組合物冷凍后使水從組合物中升華的方法。通過去除組合物的水分減少甚至消除降解和聚集產物的形成，并破壞細菌的潛在生長環境，從而使組合物在干燥狀態下延長貯存時間。凍干制劑通常包含填充劑、穩定劑和緩沖劑等，以保護活性成分在凍干期間和凍干后免受破壞。凍干制劑可通過加入水性溶劑，如注射用水，以簡單的方式復溶，以提供用戶可用的備用溶液。
[0005]本專利技術已經解決了上述技術問題，提供了一種含有腸激酶的制劑，該制劑外觀物理缺陷少、復溶性佳、穩定性良好。

技術實現思路

[0006]本專利技術的目的是解決現有技術存在的上述技術問題，提供能在2℃-8℃下長期儲存期間穩定的腸激酶凍干制劑。
[0007]正是基于上述與現有技術完全不同的技術思路，專利技術人提供了一種新的技術解決方案，并解決了現有技術存在的技術問題。
[0008]本專利技術的技術方案如下：
[0009]一種腸激酶凍干制劑，包含腸激酶、穩定劑、填充劑、非離子表面活性劑和緩沖劑；
[0010]本專利技術中所使用的腸激酶，為本領域技術人員已知的任何腸激酶及其衍生物。腸激酶的添加量，即以注射用水復溶凍干制劑后，所得水溶液中腸激酶濃度為0.5～1mg/mL。
[0011]所述的穩定劑由氨基酸中的一種或多種和糖類中的一種或多種組成；
[0012]所述的氨基酸為α-氨基酸及它們的可藥用的鹽形式，優選精氨酸、甘氨酸及上述兩者的鹽酸鹽中的一種或幾種。特別優選精氨酸鹽酸鹽。其作用是在凍干過程中與腸激酶
形成氫鍵，使腸激酶的天然構象得以保持；并與緩沖劑共同將體系pH值維持在一定范圍內；此外，使用氨基酸的鹽形式而不是氨基酸可以避免氨基酸在凍干過程中的結晶，進一步提高腸激酶穩定性。氨基酸的添加量，即以注射用水復溶凍干制劑后，所得水溶液中氨基酸濃度為0.05％～5％w/v，優選濃度為0.5％～3％w/v，最優選濃度為1％w/v。
[0013]所述的糖類為非還原性多糖，優選海藻糖、蔗糖的一種或兩種。特別優選海藻糖。其作用是包裹腸激酶，減少制劑的自由體積，防止腸激酶聚集；還可以在凍干過程中與腸激酶形成氫鍵，使腸激酶的天然構象得以保持。糖類的添加量，即以注射用水復溶凍干制劑后，所得水溶液中氨基酸濃度為0.5％～8％w/v，優選濃度為1％～5％w/v，最優選濃度為2％w/v。
[0014]所述的填充劑為甘露醇。其作用是增加干物質含量，避免腸激酶被升華的水蒸氣氣流帶走，同時使凍干后的產品能形成蓬松不塌陷的固體團塊。甘露醇的添加量，即以注射用水復溶凍干制劑后，所得水溶液中甘露醇濃度為1％～10％w/v，優選濃度為3％～8％w/v，最優選濃度為5％w/v。
[0015]所述的非離子表面活性劑可以是所有通常用于蛋白制劑中的表面活性劑，優選聚乙二醇、泊洛沙姆和聚山梨酯，特別優選泊洛沙姆188。其作用是顯著提高凍干制劑的玻璃化轉變溫度，從而避免凍干過程中溫度高于玻璃化轉變溫度時產生的產品黏度降低、表面萎縮的現象。表面活性劑的添加量，即以注射用水復溶凍干制劑后，所得水溶液中表面活性劑濃度為重量體積比0.001％～1％，優選濃度為重量體積比0.005％～0.1％，最優選濃度為重量體積比0.01％。
[0016]所述的緩沖劑用于將制劑的pH維持在5.8～9.1的范圍，此外沒有特別的限制，可為磷酸緩沖劑或三羥甲基氨基甲烷緩沖劑等。緩沖劑優選使用三羥甲基氨基甲烷緩沖劑。優選緩沖劑將pH維持在7.3～7.7之間，最優選將pH維持在7.5。緩沖劑的添加量，即以注射用水復溶凍干制劑后，所得水溶液中緩沖劑濃度為20mmol/L～100mmol/L，優選濃度為30mmol/L～50mmol/L，最優選濃度為40mmol/L。
[0017]優選地，
[0018]所述的腸激酶凍干制劑，包括如下成分：
[0019]1)腸激酶
[0020]2)穩定劑：選用精氨酸或精氨酸鹽酸鹽中的任意一種，以及海藻糖；
[0021]3)填充劑：選用甘露醇；
[0022]4)非離子表面活性劑：選用泊洛沙姆或聚山梨酯；
[0023]5)緩沖劑：
[0024]其中，
[0025]氨基酸的添加量，即以注射用水復溶凍干制劑后，所得水溶液中氨基酸濃度為0.5-1％w/v；
[0026]糖類的添加量，即以注射用水復溶凍干制劑后，所得水溶液中糖類濃度為1-2％w/v；
[0027]甘露醇的添加量，即以注射用水復溶凍干制劑后，所得水溶液中甘露醇濃度為重量體積比5％w/v；
[0028]表面活性劑的添加量，即以注射用水復溶凍干制劑后，所得水溶液中表面活性劑
濃度為重量體積比0.01-0.1％w/v；
[0029]緩沖劑的添加量，即以注射用水復溶凍干制劑后，所得水溶液中緩沖劑濃度為40-50mmol/L。
[0030]最優選地，
[0031]所述的腸激酶凍干制劑，包括如下成分：
[0032]1)腸激酶
[0033]2)穩定劑：選用精氨酸鹽酸鹽和海藻糖；
[0034]3)填充劑：選用甘露醇；
[0035]4)非離子表面活性劑：選用泊洛沙姆；
[0036]5)緩沖劑：選用三羥甲基氨基甲烷緩沖劑；
[0037]其中，
[0038]腸激酶的添加量，即以注射用水復溶凍干制劑后，所得水溶液中腸激酶濃度為0.5mg/mL；
[0039]氨基酸的添加量，即以注射用水復溶凍干制劑后，所得水溶液中氨基酸濃度為1％w/v；
[0040]糖類的添加量，即以注射用水復溶凍干制劑后，所得水溶液中糖類濃度為2％w/v；
[0041]甘露醇的添加量，即以注射用水復溶凍干制劑后，所得水溶液中甘露醇濃度本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種腸激酶凍干制劑，其特征在于，包含腸激酶、穩定劑、填充劑、非離子表面活性劑和緩沖劑；所述的穩定劑由氨基酸中的一種或多種和糖類中的一種或多種組成；所述的氨基酸為α-氨基酸及它們的可藥用的鹽形式；所述的糖類為非還原性多糖；所述的填充劑為甘露醇；所述的緩沖劑用于將制劑的pH維持在5.8～9.1的范圍；其中，腸激酶的添加量，即以注射用水復溶凍干制劑后，所得水溶液中腸激酶濃度為0.5～1mg/mL；氨基酸的添加量，即以注射用水復溶凍干制劑后，所得水溶液中氨基酸濃度為0.05％～5％w/v；糖類的添加量，即以注射用水復溶凍干制劑后，所得水溶液中糖類濃度為0.5％～8％w/v；甘露醇的添加量，即以注射用水復溶凍干制劑后，所得水溶液中甘露醇濃度為1％～10％w/v；表面活性劑的添加量，即以注射用水復溶凍干制劑后，所得水溶液中表面活性劑濃度為0.001％～1％w/v；緩沖劑的添加量，即以注射用水復溶凍干制劑后，所得水溶液中緩沖劑濃度為20mmol/L～100mmol/L。2.根據權利要求1所述的腸激酶凍干制劑，其特征在于，所述的氨基酸為精氨酸、甘氨酸、精氨酸鹽酸鹽和甘氨酸鹽酸鹽中的一種或幾種。3.根據權利要求2所述的腸激酶凍干制劑，其特征在于，所述的氨基酸為精氨酸鹽酸鹽。4.根據權利要求1所述的腸激酶凍干制劑，其特征在于，所述的糖類為海藻糖和蔗糖中的一種或兩種。5.根據權利要求4所述的腸激酶凍干制劑，其特征在于，所述的糖類為海藻糖。6.根據權利要求1所述的腸激酶凍干制劑，其特征在于，所述的非離子表面活性劑為聚乙二醇、泊洛沙姆或聚山梨酯。7.根據權利要求1所述的腸激酶凍干制劑，其特征在于，所述的緩沖劑選用磷酸緩沖劑或三羥甲基氨基甲烷緩沖劑。8.根據權利要求1所述的腸激酶凍干制劑，其特征在于，氨基酸的添加量，即以注射用水復溶凍干制劑后，所得水溶液中氨基酸濃度為重量體積比0.5％～3％w/v；糖類的添加量，即以注射用水復溶凍干制劑后，所得水溶液中糖類濃度為重量體積比1％～5％w/v；甘露醇的添加量，即以注射用水復溶凍干制劑...

【專利技術屬性】
技術研發人員：張弨，
申請(專利權)人：修正生物醫藥杭州研究院有限公司，
類型：發明
國別省市：