用于N-MID骨鈣素檢測的組合物及應用和磁微球電化學發光免疫檢測試劑盒與檢測方法技術

本發明專利技術涉及電化學檢測領域，特別涉及用于N

【技術實現步驟摘要】
用于N
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MID骨鈣素檢測的組合物及應用和磁微球電化學發光免疫檢測試劑盒與檢測方法


[0001]本專利技術涉及電化學檢測領域，特別涉及用于N
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MID骨鈣素(N
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MID Osteocalcin)檢測的組合物，該組合物的應用，包含該組合物的磁微球電化學發光免疫檢測試劑盒，以及基于該組合物或試劑盒的磁微球電化學發光免疫檢測方法。

技術介紹

[0002]N
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MID骨鈣素(N
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MID Osteocalcin)是成熟成骨細胞分泌的一種非膠原骨基質蛋白，占骨基質中非膠原蛋白成分的25％，骨總蛋白的2％。完整的骨鈣素有49個氨基酸組成，相對分子質量為5800。血清中的骨鈣素具有多樣性，約1/3為完整骨鈣素(即全段骨鈣素)，1/3為骨鈣素N端中分子(N
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MID)片段，1/3為氨基酸短肽。骨鈣素是成骨細胞功能和骨質礦化的特殊標志物，作為骨轉換標志物逐漸被臨床應用。N
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MID是骨基質中重要的一種特異非膠原蛋白，與骨鈣的結合作用依賴于維生素K，其含量與各種骨代謝紊亂中的骨轉換率有關。N
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MID含量異常多見于骨質疏松、原發性或繼發性甲狀旁腺功能亢進等。
[0003]到目前為止，用于檢測人體血清樣本中N
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MID骨鈣素(N
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MID Osteocalcin)的含量的方法主要有：酶聯免疫法(ELISA)和酶促磁微粒化學發光。本專利技術采用方法為電化學發光法，采用吡啶釕作為化學發光標記物具有明顯優勢，主要表現在：靈敏度更好，穩定性更好，釕是金屬離子，分子量小，不影響抗體的空間位阻。生產過程短，檢測范圍寬，重復性好。電化學發光反應可控，降低信號采集難度。

技術實現思路

[0004]本專利技術提供了一種用于N
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MID骨鈣素(N
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MID Osteocalcin)檢測的組合物及應用和磁微球電化學發光免疫檢測試劑盒與檢測方法，具有生產效率高、檢測時間短、適用于全自動檢測，具有更高的靈敏度、線性范圍寬等優點。
[0005]為了實現上述專利技術目的，本專利技術提供以下技術方案：
[0006]本專利技術提供了用于N
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MID骨鈣素(N
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MID Osteocalcin)檢測的組合物，包括N
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MID Osteocalcin試劑Ra、N
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MID Osteocalcin試劑Rb、鏈霉親和素超順磁微球；
[0007]所述N
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MID Osteocalcin試劑Ra包括含生物素標記的抗N
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MID Osteocalcin單克隆抗體；
[0008]所述N
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MID Osteocalcin試劑Rb包括含三聯吡啶釕標記的抗N
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MID Osteocalcin單克隆抗體；
[0009]所述鏈霉親和素超順磁微球包括表面包裹帶有鏈霉親和素的超順磁微球。
[0010]在本專利技術的一些具體實施方案中，所述超順磁微球的粒徑在1.5～5.0μm。
[0011]在本專利技術的一些具體實施方案中，所述N
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MID Osteocalcin試劑Ra中，每個抗體分子表面的生物素分子標記量為2～5個；所述N
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MID Osteocalcin試劑Rb中，每個抗體分子表面的釕分子標記量為2～10個。
[0012]在本專利技術的一些具體實施方案中，所述N
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MID Osteocalcin試劑Ra的制備方法為：在緩沖液存在的條件下，取抗N
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MID Osteocalcin單克隆抗體與生物素混合，制得所述N
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MID Osteocalcin試劑Ra；所述緩沖液包括pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的磷酸鹽緩沖液或pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的三羥甲基氨基甲烷緩沖液。
[0013]在本專利技術的一些具體實施方案中，所述N
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MID Osteocalcin試劑Ra的制備方法為：取2.0mg的用于標記生物素N
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MID骨鈣素(N
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MID Osteocalcin)抗體，使用脫鹽柱PD10更換緩沖液為磷酸鹽緩沖液(pH＝7.8)，使用超濾管濃縮后調整濃度為2.0mg/mL，加入80μg的生物素(使用DMF溶解)，混勻反應30分鐘，使用脫鹽柱PD10去除未標記的生物素。使用含1％的牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液(pH＝7.4)稀釋標記生物素的N
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MID骨鈣素(N
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MID Osteocalcin)抗體到1mg/L，作為N
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MID Osteocalcin試劑Ra。
[0014]在本專利技術的一些具體實施方案中，所述N
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MID Osteocalcin試劑Rb的制備方法為：在緩沖液存在的條件下，取抗N
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MID Osteocalcin單克隆抗體與三聯吡啶釕混合，制得所述N
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MID Osteocalcin試劑Rb；所述緩沖液包括pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的磷酸鹽緩沖液或pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的三羥甲基氨基甲烷緩沖液。
[0015]在本專利技術的一些具體實施方案中，所述N
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MID Osteocalcin試劑Rb的制備方法為：取2.0mg的用于標記三聯吡啶釕的N
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MID骨鈣素(N
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MID Osteocalcin)抗體，使用脫鹽柱PD10更換緩沖液為磷酸鹽緩沖液(pH＝7.8)，使用超濾管濃縮后調整濃度為2.0mg/mL，加入30
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80μg的琥珀酰胺三聯吡啶釕(使用DMF溶解)，混勻反應30分鐘，使用脫鹽柱PD10去除未標記的釕。使用含1％的牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液(pH＝7.4)稀釋標記釕的N
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MID骨鈣素(N
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MID Osteocalcin)抗體到1mg/L，作為N
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MID Osteocalcin試劑Rb。
[0016]在本專利技術的一些具體實施方案中，本專利技術提供的組合物還包括定標品和/或清洗液；所述清洗液包括濃度150～200mmol/L的三丙胺和濃度200～400mmol/L的磷酸鹽緩沖液；或濃度80～100mmol/L的二丁基乙醇胺和濃度200～400mmol/L的磷酸鹽緩沖液。
[0017]在本專利技術的一些具體實施方案中，所述清洗液包括但不限于三丙胺清洗液、二丁基乙醇胺清洗液、管路清洗液。
[0018]在本專利技術的一些更具體的實施方案中，所述清洗液包括濃度180mmol/L的三丙胺和濃度300mmol/L的磷酸鹽緩沖液；或濃度90mmol/L的二丁基乙醇胺本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.用于N
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MID骨鈣素(N
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MID Osteocalcin)檢測的組合物，其特征在于，包括N
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MID Osteocalcin試劑Ra、N
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MID Osteocalcin試劑Rb、鏈霉親和素超順磁微球；所述N
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MID Osteocalcin試劑Ra包括含生物素標記的抗N
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MID Osteocalcin單克隆抗體；所述N
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MID Osteocalcin試劑Rb包括含三聯吡啶釕標記的抗N
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MID Osteocalcin單克隆抗體；所述鏈霉親和素超順磁微球包括表面包裹帶有鏈霉親和素的超順磁微球。2.如權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述超順磁微球的粒徑在1.5～5.0μm。3.如權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述N
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MID Osteocalcin試劑Ra中，每個抗體分子表面的生物素分子標記量為2～5個；所述N
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MID Osteocalcin試劑Rb中，每個抗體分子表面的釕分子標記量為2～10個。4.如權利要求1至3任一項所述的組合物，其特征在于，所述N
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MID Osteocalcin試劑Ra的制備方法為：在緩沖液存在的條件下，取抗N
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MID Osteocalcin單克隆抗體與生物素混合，制得所述N
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MID Osteocalcin試劑Ra；所述緩沖液包括pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的磷酸鹽緩沖液或pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的三羥甲基氨基甲烷緩沖液。5.如權利要求1至3任一項所述的組合物，其特征在于，所述N
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MID Osteocalcin試劑Rb的制備方法為：在緩沖液存在的條件下，取抗N
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MID Osteocalcin單克隆抗體與三聯吡啶釕混合，制得所述N
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MID Osteocalcin試劑Rb；所述緩沖液包括pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的磷酸鹽緩沖液或pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的三羥甲基氨基甲烷緩沖液...

【專利技術屬性】
技術研發人員：秦軍，謝元東，謝良思，馬東鈺，王曉寧，
申請(專利權)人：北京聯眾泰克科技有限公司，
類型：發明
國別省市：