本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
一種鴿新城疫
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b亞型陽性血清標(biāo)準(zhǔn)品及其制備方法
[0001]本專利技術(shù)涉及一種鴿新城疫
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b亞型陽性血清標(biāo)準(zhǔn)品及其制備方法，屬于獸用生物制品
技術(shù)介紹
[0002]鴿新城疫是由鴿副黏病毒Ⅰ型(pigeon paramyxovirus
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1，PPMV
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1)引起的流行于鴿群中的一種高度接觸性傳染病，臨床癥狀同雞新城疫相似。該病流行特點為新疫區(qū)傳播迅速，發(fā)病率100％，死亡率80％以上，老疫區(qū)耐過鴿群存在帶毒情況，發(fā)病率、死亡率較低，呈散發(fā)性。近幾年，隨著我國養(yǎng)鴿業(yè)的迅速發(fā)展，該病的發(fā)生呈上升趨勢，甚至一些養(yǎng)鴿場呈暴發(fā)流行，給養(yǎng)鴿業(yè)帶來較大的經(jīng)濟損失。近幾年的流行調(diào)查顯示，我國鴿群中流行的鴿新城疫病毒以基因
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b亞型為主，與當(dāng)前世界上流行的新城疫病毒優(yōu)勢基因
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亞型存在抗原性差異，對鴿具有明顯的宿主特異性。
[0003]近幾年從鴿群中分離的鴿新城疫毒株與常規(guī)雞新城疫疫苗株La Sota株的遺傳距離較遠(yuǎn)，它們的核苷酸和氨基酸與新城疫疫苗株La Sota的同源性相對較低，僅為82％～84％；在交叉病毒中和試驗中，基因
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型的鴿源毒株與La Sota株間的抗原同源性低至65％左右。在交叉血凝抑制試驗中，兩者測定的HI效價相差2～3個滴度。
[0004]本專利技術(shù)是通過
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b亞型鴿新城疫毒株LY/2020/Pi株制備的滅活疫苗多次免疫經(jīng)篩選的陰性鴿后獲得陽性血清標(biāo)準(zhǔn)品。該陽性血清標(biāo)準(zhǔn)品的研制可為鴿群中
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b亞型新城疫流行毒株的準(zhǔn)確監(jiān)測、鴿新城疫種毒的免疫原性評價、特異性檢驗、外源病毒檢驗及疫苗免疫效力評價提供保障，同時可填補研制
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b亞型鴿新城疫疫苗無標(biāo)準(zhǔn)陽性血清的空白。
技術(shù)實現(xiàn)思路
[0005]本專利技術(shù)的目的在于通過多次免疫陰性鴿后獲得鴿新城疫的陽性血清標(biāo)準(zhǔn)品，用于
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b亞型鴿新城疫疾病的監(jiān)測、鴿源新城疫疫苗毒種的免疫原性評價、特異性檢驗、外源病毒檢驗和疫苗免疫效力的評價等。
[0006]為了實現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)采取了如下技術(shù)方案：
[0007]1.一種鴿新城疫
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b亞型陽性血清標(biāo)準(zhǔn)品，其特征在于所述陽性血清標(biāo)準(zhǔn)品是用
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b亞型鴿新城疫病毒LY/2020/Pi株抗原免疫接種健康陰性鴿；
[0008]所述的免疫抗原為鴿新城疫病毒
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b亞型毒株LY/2020/Pi株疫苗，其制備方法為：用鴿新城疫病毒
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b亞型毒株LY/2020/Pi株接種SPF雞胚培養(yǎng)，收獲感染雞胚液，經(jīng)β
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丙內(nèi)酯滅活后，與礦物油佐劑混合乳化制成；
[0009]所述鴿新城疫病毒LY/2020/Pi株是由中崇信諾生物科技泰州有限公司分離、提供，該毒株將送交中國科學(xué)院微生物研究所中國微生物保藏委員會普通微生物保藏中心保藏，保藏號為：CGMCC No.20289。
[0010]2.本專利技術(shù)所述一種鴿新城疫
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b亞型陽性血清標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法，包括：
[0011](1)免疫用健康陰性鴿的篩選：
[0012]1)選擇飼養(yǎng)管理條件好且滿足以下條件的鴿群：采食、飲水、生長發(fā)育均正常，羽毛有光澤，警惕性強，糞便呈螺旋狀，且?guī)б稽c白色尿素；無細(xì)菌、病毒、寄生蟲等發(fā)病史；
[0013]2)對試驗鴿逐只采血，檢測血清中新城疫抗體，剔除HI抗體高于1:4者；
[0014]3)應(yīng)用鴿圓環(huán)病毒、鴿腺病毒、鴿痘檢測試劑盒逐只檢測各病毒感染情況，剔除陽性或可疑者；
[0015]4)篩選的試驗鴿隔離觀察一周，健康者可用于制備陽性血清。
[0016](2)免疫抗原的制備：將
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b亞型鴿新城疫病毒LY/2020/Pi株接種10日齡SPF雞胚培養(yǎng)，收獲感染雞胚液，經(jīng)β
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丙內(nèi)酯滅活后，與礦物油佐劑混合乳化制成；
[0017](3)免疫程序為：1～2月齡陰性鴿首免，0.5mL/只；兩周后二免，1.0mL/只；再兩周后三免，1.0mL/只。最后一次采血時間為免疫后21～28天；
[0018](4)陽性血清的制備及純化：采集后靜置的鴿血用5000r/min離心10min，收集血清，經(jīng)層析柱純化后，用0.22μm一次性濾器過濾除菌后混合于無菌容器中，分裝保存；
[0019](5)陽性血清標(biāo)準(zhǔn)品檢驗：對制備的陽性血清標(biāo)準(zhǔn)品進行無菌、支原體、外源病毒、特異性檢驗、HI效價及中和效價測定。其中HI效價不低于1:128，中和效價不低于1:1600；同時與雞新城疫抗原進行交叉反應(yīng)實驗，用LY/2020/Pi株抗原和La Sota株抗原分別與鴿新城疫病毒陽性血清進行HI試驗，HI效價分別為10.0log2和7.5log2。
[0020]本專利技術(shù)具體實施方式
[0021]1.鴿新城疫滅活疫苗的制備
[0022]制備鴿新城疫滅活疫苗所用疫苗株為鴿新城疫病毒LY/2020/Pi株，由中崇信諾生物科技泰州有限公司分離、鑒定，該毒株將送交中國科學(xué)院微生物研究所中國微生物保藏委員會普通微生物保藏中心保藏，保藏編號為：CGMCC No.20289。
[0023](1)抗原液的制備用重組鴿新城疫病毒LY/2020/Pi株毒種作適當(dāng)稀釋，尿囊腔內(nèi)接種10日齡SPF雞胚培養(yǎng)，棄去48h前死亡雞胚。至96h，取出雞胚冷凍，無菌收獲尿囊液，抽樣測定血凝價及病毒含量，同時按《中華人民共和國獸藥典》(中國獸藥典委員會，中華人民共和國獸藥典，二〇一五年版三部，中國農(nóng)業(yè)出版社，2016，以下稱2015年版《中國獸藥典》)附錄進行無菌、支原體及外源病毒檢驗。將檢驗合格的胚液用β
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丙內(nèi)酯充分滅活，滅活方法：按抗原量的1/4000(V/V)加入β
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丙內(nèi)酯，混勻后置于4℃冰箱滅活20h，然后置于37℃水浴鍋中水解2h。滅活完成后取樣進行無菌檢驗和滅活檢驗。檢驗合格后大部分用于疫苗制備，一小部分作為血凝抑制試驗抗原備用。
[0024](2)疫苗制備油相制備：取注射用白油95份，置于油相制備罐中加熱至80℃，再加入司本
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80 5份，攪拌至透明，當(dāng)溫度達(dá)到125℃時維持30min，冷卻后備用；水相制備：將滅活后檢驗合格的鴿新城疫病毒液93份，滅菌的吐溫
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80 7份，加入配液罐中，開動攪拌電機攪拌20～30min，使吐溫
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80完全溶解；之后按水油比1:3進行乳化。乳化后，取疫苗10mL加入離心管中，以3000r/min離心15min，觀察管底是否有水相析出。將乳化合格的疫苗分裝備用。同時取樣按2015年版《中國獸藥典》方法進行性狀、無菌、甲醛殘留量檢驗。檢驗合格的疫苗用于陽性血清的制備。
[0025]2.篩選陰性鴿
[0026](1)初篩。選擇至少三家鴿場進行調(diào)研，查看鴿本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
【技術(shù)特征摘要】
1.一種鴿新城疫
Ⅵ
b亞型陽性血清標(biāo)準(zhǔn)品，其特征在于所述陽性血清標(biāo)準(zhǔn)品是用
Ⅵ
b亞型鴿新城疫病毒LY/2020/Pi株抗原免疫接種健康陰性鴿所制備；所述的免疫抗原為鴿新城疫病毒
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b亞型毒株疫苗，其制備方法為：用鴿新城疫病毒
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b亞型毒株LY/2020/Pi株接種SPF雞胚培養(yǎng)，收獲感染雞胚液，經(jīng)β
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丙內(nèi)酯滅活后，與礦物油佐劑混合乳化制成；所述鴿新城疫病毒LY/2020/Pi株是由中崇信諾生物科技泰州有限公司分離、鑒定的，該毒株已于2021年6月17日送交北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號為：CGMCC No.20289。2.權(quán)利要求1所述一種鴿新城疫
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b亞型陽性血清標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法，包括：(1)免疫用健康陰性鴿的篩選：1)選擇飼養(yǎng)管理條件好且滿足以下條件的鴿群：采食、飲水、生長發(fā)育均正常，羽毛有光澤，警惕性強，糞便呈螺旋狀，且?guī)б稽c白色尿素；無細(xì)菌、病毒、寄生蟲等發(fā)病史；2)對試驗鴿逐只采血，檢測血清中新城疫...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：刁小龍，劉云迎，何海蓉，印廣浩，欒璐，田志偉，
申請(專利權(quán))人：中崇信諾生物科技泰州有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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