基于棘突蛋白基因修飾干細胞的新型冠狀病毒疫苗、其制備方法及應用技術

本發明專利技術公開了一種基于棘突蛋白基因修飾干細胞的新型冠狀病毒疫苗、其制備方法及應用。所述疫苗的活性成分為三聚體形式的棘突蛋白基因修飾的間充質干細胞，用于表達棘突蛋白的核苷酸序列具有SEQ ID NO：2所示序列。所述制備方法包括：構建表達棘突蛋白的腺病毒載體、制備棘突蛋白重組腺病毒顆粒、純化富集腺病毒顆粒、獲取間充質干細胞、獲取棘突蛋白編碼基因修飾的人臍帶間充質干細胞。本發明專利技術的疫苗通過棘突蛋白的基因重組型間充質干細胞表達棘突蛋白來啟動人體針對新型冠狀病毒的免疫反應，產生病毒中和性抗體，從而避免病毒對人體的感染，安全、可靠、有效，具有良好的應用前景，為新型冠狀病毒的預防提供了全新的選擇。擇。擇。

【技術實現步驟摘要】
基于棘突蛋白基因修飾干細胞的新型冠狀病毒疫苗、其制備方法及應用


[0001]本專利技術涉及疫苗
，具體涉及一種基于棘突蛋白基因修飾干細胞的新型冠狀病毒 疫苗、其制備方法及應用。

技術介紹

[0002]2019
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nCov病毒感染者的癥狀一般為發熱、乏力、干咳、頭疼，逐漸出現呼吸困難，嚴 重者快速進展為急性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥休克、難以糾正的代謝性酸中毒和出凝血功能 障礙，甚至死亡。病毒潛伏期最短有1天發病，最長的潛伏期是14天，潛伏期具有傳染性。
[0003][0004][0005]然而，目前沒有特別有效的治療手段，對患者主要采用先隔離，然后霧化吸入α
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干擾素， 口服洛匹那韋/利托那韋，及短期內使用糖皮質激素。然而這些治療方法的有效率并不高。病 毒感染造成的肺纖維化(pulmonary fibrosis)也是發病中重要的臨床表現，肺纖維化可對肺造 成不可逆的傷害，可導致進行性呼吸困難，肺功能受損，嚴重者可致死亡。
[0006]間充質干細胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是干細胞家族的重要成員，來源于發育 早期的中胚層，屬于多能干細胞，MSCs最初在骨髓中發現，隨后還發現存在于人體發生、 發育過程的許多種組織中。因其具有多向分化潛能、造血支持和促進干細胞植入、免疫調控 和自我復制等特點而日益受到人們的關注。
[0007][0008]研究發現，MSCs是一種幼稚的發育早期的具有分化潛能的細胞，它具有以下幾種特性： 1)具有強大的增殖能力和多向分化潛能，在適宜的體內或體外環境下具有分化為肌細胞、肝 細胞、成骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞、基質細胞等多種細胞的能力；2)具有免疫調節功能， 通過細胞間的相互作用及產生細胞因子抑制T細胞的增殖及其免疫反應，從而發揮免疫重建 的功能；3)趨化性：MSCs可以向受損組織、腫瘤部位遷移；4)具有來源方便，易于分離、 培養、擴增和純化，多次傳代擴增后仍具有干細胞特性；5)由于無主要組織相容性復合體的 表達，幾乎無免疫排斥，異體移植免疫排異較輕，配型要求不嚴格。正是由于間充質干細胞 所具備的這些獨特的免疫學特性，使其在臨床治療方面具有廣闊的臨床應用前景。
[0009]鑒于此，業界亟需發展出一種安全性高、可靠有效的新型冠狀病毒疫苗。

技術實現思路

[0010]針對現有技術中的不足，本專利技術要解決的技術問題在于提供了一種基于棘突蛋白基因修 飾干細胞的新型冠狀病毒疫苗及其制備方法與應用，該干細胞可在體內長時間滯留，高效分 泌新型冠狀病毒棘突蛋白，啟動人體針對新型冠狀病毒的免疫反應，產生病毒
中和性抗體， 避免病毒對人體的感染。
[0011]為解決上述技術問題，本專利技術通過以下方案來實現：
[0012]本專利技術實施例提供了一種棘突蛋白，用于表達棘突蛋白的核苷酸序列具有SEQ ID NO：2 所示序列，或者與SEQ ID NO：2的全長序列95％以上相同的序列。即，本專利技術實施例提供的 棘突蛋白的核苷酸序列可以是原始序列，增加或截短的序列。
[0013]本專利技術實施例還提供了用于編碼所述棘突蛋白的編碼基因。
[0014]在一些實施方式中，所述的編碼基因具有SEQ ID NO：1所示序列或者與SEQ ID NO：1的 全長序列95％以上相同的序列。
[0015]本專利技術實施例還提供了一種重組腺病毒載體，其包含所述棘突蛋白的編碼基因。
[0016]在一些實施方式中，所述重組腺病毒載體包括但不限于pAd/CMV/V5
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DEST等。
[0017]本專利技術實施例還提供了一種宿主細胞，其包含所述棘突蛋白的編碼基因。
[0018]本專利技術實施例還提供了一種免疫組合物，其包括：三聚體形式的棘突蛋白基因修飾的干 細胞；以及，醫藥學上可接受的載劑。
[0019]本專利技術實施例還提供了所述棘突蛋白或免疫組合物在制備新型冠狀病毒疫苗中的用途。
[0020]本專利技術實施例還提供了一種基于棘突蛋白基因修飾干細胞的新型冠狀病毒疫苗，所述疫 苗包含前述棘突蛋白、重組腺病毒載體、宿主細胞，或者免疫組合物。
[0021]在一些實施方式中，所述新型冠狀病毒疫苗的活性成分為三聚體形式的棘突蛋白編碼基 因修飾的間充質干細胞，所述新型冠狀病毒疫苗可應用于預防新型冠狀病毒。
[0022]本專利技術實施例還提供了所述基于棘突蛋白基因修飾干細胞的新型冠狀病毒疫苗的制備方 法，其包括：
[0023](1)通過自由重組分別構建表達棘突蛋白的腺病毒載體；
[0024](2)采用步驟(1)構建的腺病毒載體轉染細胞，制備棘突蛋白重組腺病毒顆粒；
[0025](3)純化富集步驟(2)所獲棘突蛋白重組腺病毒顆粒；
[0026](4)采用富集的棘突蛋白重組腺病毒顆粒對間充質干細胞進行感染，獲得棘突蛋白編碼 基因修飾的間充質干細胞。
[0027]相對于現有技術，本專利技術的有益效果是：
[0028](1)本專利技術將細胞治療和基因治療相結合，以三聚體形式的棘突蛋白修飾的間充質干細 胞作為疫苗的活性成分，具有方便獲取的優勢，其可以補充局部干細胞數量，并高效分泌三 聚體棘突蛋白及人源性生長因子(如EGF、bFGF等)，在來改善局部微環境及免疫調節的 同時，刺激機體產生針對新型冠狀病毒的中和性抗體，安全、可靠、有效，具有良好的應用 前景；
[0029](2)本專利技術通過基因修飾的手段使得臍帶來源間充質干細胞高效表達三聚體棘突蛋白， 以最接近病毒棘突蛋白的天然形態對個體進行免疫，從而有效防御病毒；
[0030](3)本專利技術從臍帶中分離間充質干細胞，能大量擴增治療用細胞的數量，并克服從骨髓 獲取間充質干細胞數量少、取材具有創傷性等特點，降低了生產及使用成本。
附圖說明
[0031]為了更清楚地說明本專利技術實施方式的技術方案，下面將對實施方式中所需要使用
的附圖 作簡單地介紹，應當理解，以下附圖僅示出了本專利技術的某些實施例，因此不應被看作是對范 圍的限定，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些 附圖獲得其他相關的附圖。
[0032]圖1為本專利技術實施例1中新型冠狀病毒棘突蛋白的結構域示意圖；
[0033]圖2為本專利技術實施例1中新型冠狀病毒棘突蛋白的RBD區域抗原性分析圖；
[0034]圖3為本專利技術實施例1中腺病毒載體pAD/CMV/Spike的結構示意圖；
[0035]圖4為本專利技術實施例1中新型冠狀病毒疫苗的制備流程示意圖。
具體實施方式
[0036]應該指出，以下詳細說明都是示例性的，旨在對本專利技術提供進一步的說明。除非另有指 明，本說明書使用的所有技術和科學術語具有與本專利技術所屬
的普通技術人員通常理 解的相同含義。
[0037]需要注意的是，這里所使用的術語僅是為了描述具體實施方式，而非意圖限制根據本發 明的示例性實施方式。如在這里所使本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.棘突蛋白，用于表達棘突蛋白的核苷酸序列具有SEQ ID NO：2所示序列。2.用于編碼權利要求1所述棘突蛋白的編碼基因。3.如權利要求2所述的編碼基因，其特征在于：它具有SEQ ID NO：1所示序列。4.重組腺病毒載體，其包含權利要求1所述棘突蛋白的編碼基因。5.如權利要求4所述的重組腺病毒載體，其特征在于：所述重組腺病毒載體包括pAd/CMV/V5
?
DEST。6.宿主細胞，其包含權利要求1所述棘突蛋白的編碼基因。7.一種免疫組合物，其特征在于包括：三聚體形式的、權利要求1所述的棘突蛋白基因修飾的干細胞；以及，醫藥學上可接受的載劑。8.如權利要求1所述棘突蛋白或權利要求7所述免疫組合物在制備新型冠狀病毒疫苗中的...

【專利技術屬性】
技術研發人員：李丁，
申請(專利權)人：李丁，
類型：發明
國別省市：