具有抗真菌和清除自由基活性的環(huán)色-纈-絲-異亮-亮肽及制備方法技術

本發(fā)明專利技術涉及具有抗真菌和清除自由基活性的環(huán)色

【技術實現(xiàn)步驟摘要】
具有抗真菌和清除自由基活性的環(huán)色
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纈
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絲
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異亮
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亮肽及制備方法


[0001]本專利技術屬于生物制品的提取制備
，涉及具有抗真菌和自由基清除活性的環(huán)色
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纈
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絲
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異亮
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亮肽（Trp
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Ser
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Val
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Leu環(huán)肽）提取和純化。

技術介紹

[0002]環(huán)色
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纈
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絲
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異亮
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亮肽是從一種蛙糞霉(Basidiobolussp. )培養(yǎng)物中分離制備得到的具有抗真菌和清除自由基活性的生物活性物質(zhì)。
[0003]蛙糞霉(Basidiobolussp. )為蟲霉目蛙糞霉科蛙糞霉屬的真菌；在我國常見的有蛙生蛙糞霉、固孢蛙糞霉和裂孢蛙糞霉等。上述菌種可從土壤和兩棲類動物糞便中分離得到。
[0004]抗真菌活性：有多種真菌是條件致病菌，當人們抵抗力下降時容易感染，特別是老人和病人容易發(fā)生真菌感染。目前世界老齡化日趨嚴重，同時由于環(huán)境污染等因素，人們的抵抗力呈下降趨勢，真菌感染病例呈上升趨勢，同時早期抗真菌藥已出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，因此開發(fā)新型抗真菌活性物質(zhì)非常有意義。
[0005]清除自由基活性：自由基（free radical），從化學結構上看是指含未配對電子的基團、原子或分子。自由基具有高度化學活性。對于生命體來說，自由基是生命活動中多種生化反應的中間產(chǎn)物。在正常情況下，人體內(nèi)的自由基是處于產(chǎn)生與清除的動態(tài)平衡之中。自由基是機體有效的防御系統(tǒng)，如不能維持一定水平的自由基則會對機體生命活動帶來不利影響。但自由基產(chǎn)生過多或清除過慢，它通過攻擊生命大分子物質(zhì)及各種細胞器，會造成機體分子水平、細胞水平及組織器官水平的各種損傷，加速機體的衰老進程并誘發(fā)各種疾病。最新的研究表明，人類的衰老及許多疾病都與自由基損傷有關。具有清除自由基活性的物質(zhì)能與自由基反應并使之還原成非自由基化合物，可清除機體代謝過程中產(chǎn)生的過多的自由基，是一種可增進人體健康的重要活性物質(zhì)。自由基清除劑在非生命體系中有抗氧化作用，能夠有效地阻止物質(zhì)的氧化敗壞，對于延長物品的保質(zhì)期有著重要作用，被廣泛用于食品、藥品、日用化學品等中。

技術實現(xiàn)思路

[0006]為尋找新型天然高效的具有抗真菌活性和清除自由基活性的物質(zhì)，專利技術人通過對中國的100余株昆蟲病原真菌代謝物進行活性研究，發(fā)現(xiàn)了從一種蛙糞霉中提取的環(huán)色
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纈
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絲
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異亮
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亮肽具有很強的抗白色鏈珠菌活性和清除自由基活性的作用，本專利技術的目的是提供一種具有抗真菌和清除自由基活性的環(huán)色
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纈
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絲
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異亮
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亮肽及制備方法。
[0007]一種具有抗真菌和清除自由基活性的環(huán)色
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纈
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絲
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異亮
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亮肽的結構式如下：
所述環(huán)色
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纈
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絲
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異亮
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亮肽為白色粉末狀，是由色氨酸、纈氨酸、絲氨酸、異亮氨酸和亮氨酸，以酰胺鍵連接而成的十五元環(huán)狀五肽；所述環(huán)色
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纈
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絲
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異亮
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亮肽具有清除自由基活性和抗白色鏈珠菌活性；對二苯基苦基苯肼自由基（DPPH）的半數(shù)清除濃度（DC
50
）為1.32mg/mL，在200 μg /mL的濃度下對白色鏈珠菌的抑菌圈直徑為13.25mm。
[0008]所述具有抗真菌和清除自由基活性的環(huán)色
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纈
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絲
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異亮
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亮肽的制備操作步驟如下：（1）菌種培養(yǎng)將蛙糞霉（Basidiobolussp.）經(jīng)過一級斜面菌種培養(yǎng)、二級液體種子培養(yǎng)、三級液體種子培養(yǎng)和四級培養(yǎng)，得到液體的最終發(fā)酵物或固體的最終發(fā)酵物；所述蛙糞霉（Basidiobolussp.）為蛙生蛙糞霉、固孢蛙糞霉或裂孢蛙糞霉中的一種；（2）最終發(fā)酵物中有效成分的提取和精制用甲醇或乙醇提取最終發(fā)酵物中的有效成分，采用反相色譜方法純化，得到白色粉末狀的環(huán)色
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纈
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絲
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異亮
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亮肽。
[0009]具體制備操作如下：（1.1）斜面種子培養(yǎng)將蛙糞霉菌株接種于土豆瓊脂（PDA）斜面培養(yǎng)基，每支試管接種1～3接種環(huán)原始菌種，于25～36℃恒溫、培養(yǎng)4～8d，得到一級菌種；（1.2）二級液體種子培養(yǎng)將一級菌種接種至液體搖瓶培養(yǎng)基培養(yǎng)；在大于等于100 ml三角瓶中加入30～50%三角瓶體積的液體培養(yǎng)基，每個三角瓶接種1～3支斜面菌種，在全溫振蕩培養(yǎng)箱中，溫度25～36℃、轉速150～250 rpm條件下，培養(yǎng)3～7d，即得到二級菌種；液體搖瓶培養(yǎng)基由葡萄糖25.0～50.0 g/L、麥芽提取物10.0～30.0 g/L、蛋白胨2.0～6.0 g/L、酵母浸出粉1.0～4.0 g/L、氯化鉀（KCl2）0.3～2.0 g/L、七水硫酸鎂（MgSO4.7H2O）0.3～2.0 g/L、磷酸二氫鉀（KH2PO4）0.3～2.0 g/L和水混合均勻制成；
（1.3）三級液體種子培養(yǎng)將二級菌種接種到大于等于5L的發(fā)酵罐，裝液量為罐體積的50～80%，接種量3～10%；在通氣量按體積比1L:1～2L（v/v）、壓力0.1～0.2MP、溫度25～36℃條件下，恒溫通氣培養(yǎng)2～5天，得到三級菌種；發(fā)酵罐中的培養(yǎng)基同步驟（1.2）中的液體培養(yǎng)基；（1.4）四級培養(yǎng)四級培養(yǎng)為液體培養(yǎng)，將三級菌種接種到大于等于50L的發(fā)酵罐，裝液量為罐體積的50～80%，接種量3～10%；在通氣量按體積比1L:1～2L（v/v）、壓力0.1～0.2MP、溫度25～36℃條件下，恒溫通氣培養(yǎng)5～15天，得到液體的最終發(fā)酵物；發(fā)酵罐中的培養(yǎng)基與步驟（1.2）中的液體培養(yǎng)基相同。
[0010]進一步地具體技術方案如下：所述步驟（1.4）中，四級培養(yǎng)為固體培養(yǎng)，將三級菌種拌入固體培養(yǎng)基中，接種量為固體料量的3～10%，25～36℃恒溫培養(yǎng)5～15天，得到固體的最終發(fā)酵物；所述固體培養(yǎng)基由葡萄糖25.0～50.0 g/L、麥芽提取物10.0～30.0 g/L、蛋白胨2.0～6.0 g/L、酵母浸出粉1.0～4.0 g/L、氯化鉀（KCl2）0.3～2.0 g/L、七水硫酸鎂（MgSO4.7H2O）0.3～2.0 g/L、磷酸二氫鉀（KH2PO4）0.3～2.0 g/L、瓊脂15.0～30.0 g/L和水混合均勻制成。
[0011]所述步驟（2）的具體操作如下：（2.1）最終發(fā)酵物的預處理將液體的最終發(fā)酵物經(jīng)0.20～1.0μm濾本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.具有抗真菌和清除自由基活性的環(huán)色
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纈
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絲
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異亮
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亮肽，其特征在于：所述環(huán)色
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亮肽的結構式如下：所述環(huán)色
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纈
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亮肽為白色粉末狀，是由色氨酸、纈氨酸、絲氨酸、異亮氨酸和亮氨酸，以酰胺鍵連接而成的十五元環(huán)狀五肽；所述環(huán)色
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纈
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亮肽具有清除自由基活性和抗白色鏈珠菌活性；對二苯基苦基苯肼自由基DPPH的半數(shù)清除濃度DC
50
為1.32mg/mL，在200 μg /mL的濃度下對白色鏈珠菌的抑菌圈直徑為13.25mm。2.根據(jù)權利要求1所述具有抗真菌和清除自由基活性的環(huán)色
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亮肽的制備方法，其特征在于操作步驟如下：（1）菌種培養(yǎng)將蛙糞霉（Basidiobolussp.）經(jīng)過一級斜面菌種培養(yǎng)、二級液體種子培養(yǎng)、三級液體種子培養(yǎng)和四級培養(yǎng)，得到液體的最終發(fā)酵物或固體的最終發(fā)酵物；（2）最終發(fā)酵物中有效成分的提取和精制用甲醇或乙醇提取最終發(fā)酵物中的有效成分，采用反相色譜方法純化，得到白色粉末狀的環(huán)色
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亮肽。3.根據(jù)權利要求2所述制備方法，其特征在于：所述步驟（1）的具體操作如下：（1.1）一級斜面種子培養(yǎng)將蛙糞霉菌株接種于土豆瓊脂PDA斜面培養(yǎng)基，每支試管接種1～3接種環(huán)原始菌種，于25～36℃恒溫、培養(yǎng)4～8d，得到一級菌種；（1.2）二級液體種子培養(yǎng)將一級菌種接種至液體搖瓶培養(yǎng)基培養(yǎng)；在大于等于100 ml三角瓶中加入30～50%三角瓶體積的液體培養(yǎng)基，每個三角瓶接種1～3支斜面菌種，在全溫振蕩培養(yǎng)箱中，溫度25～36℃、轉速150～250 rpm條件下，培養(yǎng)3～7d，即得到二級菌種；液體搖瓶培養(yǎng)基由葡萄糖25.0～50.0 g/L、麥芽提取物10.0～30.0 g/L、蛋白胨2.0～6.0 g/L、酵母浸出粉1.0～4.0 g/L、氯化鉀0.3～2.0 g/L、七水硫酸鎂0.3～2.0 g/L、磷酸二氫鉀0.3～2.0 g/L和水混合均勻制成；
（1.3）三級液體種子培養(yǎng)將二級菌種接種到大于等于5L的發(fā)酵罐，裝液量為罐體積的50～80%，接種量3～10%；在通氣量按體積比1L:1～2L...

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：何亞瓊，
申請(專利權)人：皖北衛(wèi)生職業(yè)學院，
類型：發(fā)明
國別省市：