一種軟骨提取物及其制備方法和應用技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種軟骨提取物及其制備方法和應用，涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領域。本發(fā)明專利技術(shù)所述軟骨提取物主要含有硫酸軟骨素、氨基葡萄糖和Ⅱ膠原蛋白肽，其中硫酸軟骨素經(jīng)過硫酸軟骨素酶處理后由原來的50000Da降解為3000Da左右，Ⅱ膠原蛋白肽的物質(zhì)分子量在1000Da以下占比達到97%，小分子多肽和低分子量硫酸軟骨素能更好地被人體所吸收利用，更有利于對骨關節(jié)炎的治療作用。的治療作用。的治療作用。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
一種軟骨提取物及其制備方法和應用
[0001]

[0002]本專利技術(shù)屬于生物醫(yī)藥
，具體涉及一種軟骨提取物及其制備方法和應用。

技術(shù)介紹

[0003]骨性關節(jié)炎（Osteoarthritis，OA）是一種嚴重影響患者生活質(zhì)量的關節(jié)退行性疾病，給患者、家庭和社會造成巨大的經(jīng)濟負擔。OA指由多種因素引起關節(jié)軟骨纖維化、皸裂、潰瘍、脫失而導致的，以關節(jié)疼痛為主要癥狀的退行性關節(jié)病，涉及到整個滑膜關節(jié)，包括軟骨、滑膜和軟骨下骨。其主要臨床表現(xiàn)為關節(jié)的疼痛，不僅導致關節(jié)功能受限和患者生活質(zhì)量的下降，也是致老年人行動不便的重要原因。在西方國家55~70歲的人群中，大約70%會受到骨性關節(jié)炎疼痛的影響。
[0004]傳統(tǒng)的硫酸軟骨素分子量較大，不容易透過細胞膜，在應用過程中存在生物利用率低的問題。有研究表明分子量為3000D~5300D的硫酸軟骨素，其藥理活性最佳。近幾年，低分子量的硫酸軟骨素因其具有黏度小、易吸收且具有較高的生物活性，在制藥領域的應用越來越重要，人們對其在食品、藥品、化妝品、化工等領域的應用也越發(fā)關注。目前國內(nèi)對此研究較少，特別是低分子量硫酸軟骨素的研究更是少之又少。

技術(shù)實現(xiàn)思路

[0005]有鑒于此，本專利技術(shù)的目的在于提供一種軟骨提取物及其制備方法和應用，利用兩步酶解法，制備得到由低分子量硫酸軟骨素和低分子多肽組成的軟骨提取物，在食品及醫(yī)藥領域中具有廣闊的應用前景。
[0006]為了實現(xiàn)上述專利技術(shù)目的，本專利技術(shù)提供以下技術(shù)方案：本專利技術(shù)提供了一種軟骨提取物，所述軟骨提取物包括硫酸軟骨素、氨基葡萄糖和Ⅱ膠原蛋白肽；分子量低于1000D的Ⅱ膠原蛋白肽質(zhì)量為所述Ⅱ膠原蛋白肽總質(zhì)量的97%，硫酸軟骨素的分子量為3000Da~3500Da；氨基葡萄糖在所述軟骨提取物中的質(zhì)量百分含量為12~17%；分子量為3000Da~3500Da的硫酸軟骨素在所述軟骨提取物中的質(zhì)量百分含量為25~30%。
[0007]優(yōu)選的，分子量低于500D的Ⅱ膠原蛋白肽質(zhì)量為所述Ⅱ膠原蛋白肽總質(zhì)量的85%。
[0008]本專利技術(shù)還提供了從上述軟骨提取物中分離得到的抑制軟骨細胞凋亡的活性肽，所述活性肽的序列如SEQ ID NO.1所示和SEQ ID NO.2所示。
[0009]本專利技術(shù)還提供了上述軟骨提取物的制備方法，包括以下步驟：（1）將軟骨與木瓜蛋白酶混合進行第一酶解，得第一酶解液；（2）將所述第一酶解液與硫酸軟骨素酶混合進行第二酶解，得軟骨提取物溶液。
[0010]優(yōu)選的，步驟（1）所述木瓜蛋白酶的質(zhì)量為所述軟骨質(zhì)量的0.5~1%。
[0011]優(yōu)選的，步驟（1）所述第一酶解的溫度為50~55℃，時間為3~4h，pH值為6.5~6.8。
[0012]優(yōu)選的，步驟（2）中所述硫酸軟骨素酶的加酶量為12~15U/g。
[0013]優(yōu)選的，步驟（2）所述第二酶解的溫度為37℃，時間為4h，pH值為7.0~7.2。
[0014]優(yōu)選的，步驟（2）得到所述軟骨提取物溶液后，還包括純化和獲取干品。
[0015]本專利技術(shù)還提供了利用上述軟骨提取物或上述活性肽在制備治療骨關節(jié)炎的藥物中的應用。
[0016]本專利技術(shù)還提供了一種治療骨關節(jié)炎的藥物，所述藥物以上述軟骨提取物或上述活性肽為有效成分。
[0017]有益效果：本專利技術(shù)提供了一種軟骨提取物，其內(nèi)包含有17~21%（m/m）的氨基葡萄糖和20~35%（m/m）的硫酸軟骨素，并且硫酸軟骨素和Ⅱ膠原蛋白肽的分子量低，能更好地被人體所吸收利用，更有利于對骨關節(jié)炎的治療作用。本專利技術(shù)實施例中，經(jīng)口給予大鼠膝關節(jié)炎模型低分子量軟骨提取物樣品后，大鼠炎癥因子降低，血鈣升高，骨密度增加，膝關節(jié)間隙變窄，脛骨皮質(zhì)厚度骨小梁面積百分比增加，說明骨的內(nèi)部結(jié)構(gòu)得到明顯改善，尤其以復方高劑量改善效果最佳，所以可將本專利技術(shù)提取得到的軟骨提取物用于治療骨關節(jié)炎。
[0018]本專利技術(shù)還提供了上述軟骨提取物的制備方法，包括兩步酶解，對軟骨依次用木瓜蛋白酶和硫酸軟骨素酶進行酶解，即可得到軟骨提取物溶液，經(jīng)純化和干燥后，即可得到低分子量的軟骨提取物。在所述軟骨提取物中，97%（m/m）的Ⅱ膠原蛋白肽分子量在1000D以下，且85%的Ⅱ膠原蛋白肽分子量在500D以下，小分子多肽占比較高能更好地被人體所吸收利用，更有利于對骨關節(jié)炎的治療作用。
附圖說明
[0019]圖1為硫酸軟骨素含量測定的液相譜圖；圖2為氨基葡萄糖含量測定的液相譜圖；圖3為普通硫酸軟骨素分子量分布圖；圖4為軟骨提取物中硫酸軟骨素的分子量分布圖；圖5為軟骨提取物中的硫酸軟骨素紅外光譜譜圖；圖6為軟骨提取物中多肽的分子量分布圖；圖7為軟骨提取物的氨基酸分布圖；圖8為活性肽1號的二級質(zhì)譜圖；圖9為活性肽2號的二級質(zhì)譜圖；圖10為大鼠膝骨關節(jié)造模現(xiàn)場圖；圖11為動物跑臺效果圖；圖12為實驗大鼠股骨骨密度測定結(jié)果圖；圖13為實驗大鼠Micro
?
CT掃描結(jié)果圖；圖14為實驗大鼠X射線掃描結(jié)果圖；圖15為實驗大鼠軟骨關節(jié)三維重建及相關指標檢測結(jié)果圖；圖16為實驗大鼠股骨皮質(zhì)厚度病理學檢查（HE染色法，10
×
）；圖17為實驗大鼠股骨骨小梁面積百分比病理學檢查（HE染色法，10
×
）。
具體實施方式
[0020]本專利技術(shù)提供了一種軟骨提取物，其特征在于，所述軟骨提取物包括硫酸軟骨素、氨基葡萄糖和Ⅱ膠原蛋白肽；分子量低于1000D的Ⅱ膠原蛋白肽質(zhì)量為所述Ⅱ膠原蛋白肽總質(zhì)量的97%，硫酸軟骨素的分子量為3000Da~3500Da；氨基葡萄糖在所述軟骨提取物中的質(zhì)量百分含量為12~17%；分子量為3000Da~3500Da的硫酸軟骨素在所述軟骨提取物中的質(zhì)量百分含量為25~30%。
[0021]在本專利技術(shù)中，97%的Ⅱ膠原蛋白肽分子量低于1000D，85%的Ⅱ膠原蛋白肽分子量低于500D。本專利技術(shù)所述軟骨提取物中優(yōu)選還包括礦物質(zhì)，且所述礦物質(zhì)優(yōu)選包括：鈣5558mg/kg、鎂1773mg/kg、鐵220mg/kg、鋅20mg/kg、硒5.2mg/kg。
[0022]本專利技術(shù)還提供了從上述軟骨提取物中分離得到的抑制軟骨細胞凋亡的活性肽，所述活性肽的序列如SEQ ID NO.1所示和SEQ ID NO.2所示。
[0023]本專利技術(shù)所述活性肽的序列如SEQ ID NO.1所示（Ala
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Pro
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Asp
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Asp
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Val
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His
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Glu，APDDVHPPE，活性肽1號）和SEQ ID NO.2所示（Lys
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Lys，KPA本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】

【技術(shù)特征摘要】
1.一種軟骨提取物，其特征在于，所述軟骨提取物包括硫酸軟骨素、氨基葡萄糖和Ⅱ膠原蛋白肽；分子量低于1000D的Ⅱ膠原蛋白肽質(zhì)量為所述Ⅱ膠原蛋白肽總質(zhì)量的97%，硫酸軟骨素的分子量為3000Da~3500Da；氨基葡萄糖在所述軟骨提取物中的質(zhì)量百分含量為12~17%；分子量為3000Da~3500Da的硫酸軟骨素在所述軟骨提取物中的質(zhì)量百分含量為25~30%。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述軟骨提取物，其特征在于，分子量低于500D的Ⅱ膠原蛋白肽質(zhì)量為所述Ⅱ膠原蛋白肽總質(zhì)量的85%。3.從權(quán)利要求1或2所述軟骨提取物中分離得到的抑制軟骨細胞凋亡的活性肽，其特征在于，所述活性肽的序列如SEQ ID NO.1所示和SEQ ID NO.2所示。4.權(quán)利要求1或2所述軟骨提取物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：（1）將軟骨與木瓜蛋白酶混合進行第一酶解，得第...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張釗，張九勛，張學軍，李庚，譚碧蛟，張西平，魏瑋，周西高，
申請(專利權(quán))人：中食都慶山東生物技術(shù)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：