本發(fā)明專利技術(shù)涉及外泌體鑒定技術(shù)領(lǐng)域，具體提供一種外泌體識(shí)別裝置及方法。所述外泌體識(shí)別裝置包括基底，所述基底上有加樣區(qū)，所述加樣區(qū)包括進(jìn)液通道，游離抗體區(qū)，用于容納抗體，并且所述加樣區(qū)通過(guò)流道與所述游離抗體區(qū)的進(jìn)液口相連通；固定抗體區(qū)，固定有磁性納米顆粒表面印跡外泌體材料；所述固定抗體區(qū)的出液口通過(guò)所述流道與所述質(zhì)控抗體區(qū)的進(jìn)液口相連通；所述質(zhì)控抗體區(qū)的出液口通過(guò)流道與所述廢液區(qū)的進(jìn)液口相連通。本發(fā)明專利技術(shù)的目的在于提出一種檢測(cè)快捷、樣本需要量少并且設(shè)備小的外泌體識(shí)別裝置及方法。別裝置及方法。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種外泌體識(shí)別裝置及方法
[0001]本專利技術(shù)涉及外泌體鑒定
，具體提供一種外泌體識(shí)別裝置及方法。
技術(shù)介紹
[0002]這里的陳述僅提供與本專利技術(shù)有關(guān)的背景信息，而不必然構(gòu)成現(xiàn)有技術(shù)。
[0003]外泌體，一種直徑約30
?
100nm的雙層膜囊泡狀結(jié)構(gòu)小體，可由機(jī)體內(nèi)多種細(xì)胞主動(dòng)分泌產(chǎn)生，廣泛分布于各種體液中。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能，使得它具有許多潛在的應(yīng)用價(jià)值，作為新一代的生物標(biāo)志物和治療載體，將在基礎(chǔ)研究，臨床診斷治療以及藥物輸送中將會(huì)發(fā)揮巨大的優(yōu)勢(shì)。因此開展建立高選擇性的腫瘤特異性外泌體分離技術(shù)具有重要意義。已有的離心和超濾等方法選擇性差，而基于生物蛋白抗體的技術(shù)，存在造價(jià)高和穩(wěn)定性差的缺點(diǎn)。
[0004]而外泌體分離提取之后，進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)或者作為治療藥物使用之前，需要質(zhì)量控制，確定我們收集的樣本就是外泌體，且無(wú)來(lái)自細(xì)胞碎片的污染。這樣的外泌體才有作為疾病標(biāo)志物的價(jià)值，這樣的外泌體用于外泌體治療才能保證有效性和安全性。質(zhì)量控制常規(guī)的方法包括納米顆粒跟蹤分析(NTA)、動(dòng)態(tài)光散射、透射電鏡、免疫電鏡、WesternBlot、免疫流式、ELISA等方法。NTA和動(dòng)態(tài)光散射相對(duì)而言較簡(jiǎn)單，但僅僅評(píng)估了粒徑大小分布情況，對(duì)于外泌體鑒定的意義有限，且需要復(fù)雜的儀器設(shè)備，從實(shí)驗(yàn)室推廣到臨床使用較為困難。透射電鏡可以觀察外泌體形態(tài)，是一種相對(duì)較好的鑒定方法，但是費(fèi)時(shí)費(fèi)力，而且依賴大型儀器(電子顯微鏡)，也很難完成從實(shí)驗(yàn)室向臨床的推廣。
[0005]分子印跡技術(shù)是20世紀(jì)末出現(xiàn)的一種高選擇性分離技術(shù),其基本思想是源于人們對(duì)抗體
?
抗原專一性的認(rèn)識(shí),利用具有分子識(shí)別能力的聚合物材料——分子印跡聚合物來(lái)分離、篩選、純化化合物的一種仿生技術(shù)。分子印跡聚合物有著卓越的分子識(shí)別性能和穩(wěn)定性，在許多方面得到了廣泛的應(yīng)用，但是將分子印跡技術(shù)應(yīng)用于外泌體分離和檢測(cè)還未有相關(guān)報(bào)道。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
[0006]本專利技術(shù)的目的在于提出一種檢測(cè)快捷、樣本需要量少并且設(shè)備小的外泌體識(shí)別裝置及方法。
[0007]本專利技術(shù)提供一種外泌體識(shí)別裝置，其特征在于，包括基底，所述基底上有加樣區(qū)，游離抗體區(qū)，固定抗體區(qū)，質(zhì)控抗體區(qū)和廢液區(qū)；
[0008]所述加樣區(qū)包括進(jìn)液通道；
[0009]所述游離抗體區(qū)，用于容納抗體，并且所述加樣區(qū)通過(guò)流道與所述游離抗體區(qū)的進(jìn)液口相連通；
[0010]所述固定抗體區(qū)，固定有磁性納米顆粒表面印跡外泌體材料；固定抗體區(qū)的出液口通過(guò)流道與所述質(zhì)控抗體區(qū)的進(jìn)液口相連通；
[0011]所述質(zhì)控抗體區(qū)的出液口通過(guò)流道與所述廢液區(qū)的進(jìn)液口相連通。
[0012]優(yōu)選的，所述磁性納米顆粒表面印跡外泌體材料為磁性納米粒子與印跡外泌體蛋白結(jié)合的材料。
[0013]優(yōu)選的，所述磁性納米粒子為四氧化三鐵。
[0014]優(yōu)選的，所述印跡外泌體蛋白通過(guò)如下步驟制備：配制分離膠和濃縮膠，對(duì)濃縮膠進(jìn)行電泳和分離，轉(zhuǎn)模，即得。
[0015]優(yōu)選的，轉(zhuǎn)模后配制EC顯影液，提前打開凝膠成像儀，EC反應(yīng)液滴加到目的條帶處，用凝膠成像系統(tǒng)檢測(cè)目的條帶。
[0016]本專利技術(shù)所述流道、所述游離抗體區(qū)、所述固定抗體區(qū)和所述質(zhì)控抗體區(qū)的底面均為親水底面；所述流道、所述游離抗體區(qū)、所述固定抗體區(qū)和所述質(zhì)控抗體區(qū)的側(cè)壁均為疏水側(cè)壁。
[0017]優(yōu)選的，所述親水底面為親水材料制作的底面，包括濾紙；所述疏水側(cè)壁為疏水材料制作的側(cè)壁，包括蠟。
[0018]本專利技術(shù)還提供一種外泌體識(shí)別方法，所述外泌體識(shí)別方法在外泌體識(shí)別裝置中進(jìn)行，包括如下步驟：
[0019]步驟1：裝配外泌體鑒定裝置,向所述外泌體鑒定裝置內(nèi)配置相應(yīng)的抗體；
[0020]步驟2：根據(jù)每條臂的檢測(cè)指標(biāo)選擇抗體；
[0021]步驟3：將外泌體樣本與裂解液混合，得到混合液；
[0022]步驟4：將混合液注入加樣區(qū)；
[0023]步驟5：等待檢測(cè)反應(yīng)，觀察檢測(cè)現(xiàn)象。
[0024]優(yōu)選的，在所述步驟1中，所述抗體為性納米顆粒表面印跡外泌體材料。
[0025]上述技術(shù)方案中的一個(gè)或一些技術(shù)方案具有如下優(yōu)點(diǎn)或有益效果：
[0026]1)本專利技術(shù)將適配體技術(shù)與分子印跡技術(shù)結(jié)合，合成了蛋白分子印跡材料，并對(duì)材料的吸附量，吸附動(dòng)力學(xué)，吸附等溫線以及吸附選擇性性能進(jìn)行了評(píng)價(jià)，結(jié)果表明結(jié)合適配體核酸擴(kuò)增的分子印跡的吸附動(dòng)力學(xué)，吸附等溫線不同于普通印跡材料，展現(xiàn)了優(yōu)異的結(jié)合與識(shí)別性能，適合用于外泌體識(shí)別。
[0027]2)本專利技術(shù)將適配體以及核酸擴(kuò)增技術(shù)與分子印跡技術(shù)結(jié)合，研究制備外泌體分子印跡材料，可以實(shí)現(xiàn)外泌體的識(shí)別和俘獲。
[0028]3)本專利技術(shù)將蛋白分子印跡材料引入微流控芯片，應(yīng)用于癌癥病人血樣中癌細(xì)胞來(lái)源外泌體的捕獲，并通過(guò)后續(xù)對(duì)腫瘤細(xì)胞來(lái)源外泌體的內(nèi)含突變核酸片段的檢測(cè)，為構(gòu)建基于外泌體的微流控芯片癌癥液體活檢體外診斷系統(tǒng)奠定基礎(chǔ)。
附圖說(shuō)明
[0029]構(gòu)成本專利技術(shù)一部分的說(shuō)明書附圖用來(lái)提供對(duì)本專利技術(shù)的進(jìn)一步理解，本專利技術(shù)的示意性實(shí)施例及其說(shuō)明用于解釋本專利技術(shù)，并不構(gòu)成對(duì)本專利技術(shù)的不當(dāng)限定。
[0030]圖1為本專利技術(shù)實(shí)施例所述的外泌體識(shí)別裝置示意圖。
[0031]其中：1.基底；2.加樣區(qū)；3.游離抗體區(qū)；4.固定抗體區(qū)；5.質(zhì)控抗體區(qū)；6.廢液區(qū)。
具體實(shí)施方式
[0032]下面將對(duì)本專利技術(shù)實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施
例僅是本專利技術(shù)的一部分實(shí)施例，而不是全部實(shí)施例。基于本專利技術(shù)的實(shí)施例，本領(lǐng)域技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其它實(shí)施例，都屬于本專利技術(shù)保護(hù)的范圍。
[0033]實(shí)施例1
[0034]本實(shí)施例制備一種印跡外泌體蛋白，包括如下步驟：
[0035](1)配制濃縮膠和分離膠
[0036](1.1)配制SDS
?
PAGE濃縮膠(5％)，用洗潔精將玻璃板反復(fù)洗干凈，噴上乙醇，自然晾干，保證板上晾干后無(wú)水漬。用夾板夾住玻璃板后，用封口膜在板底部做一個(gè)封口處理，確保不漏液。先配制好未加TEMED的濃縮膠，把異丙醇倒掉，干凈濾紙吸去殘余溶劑，濃縮膠加TEMED后加到兩塊玻璃板夾層中，插入干凈的梳子。如果有氣泡，把梳子拔出來(lái)，再加適當(dāng)?shù)臐饪s膠，確保無(wú)氣泡產(chǎn)生。放置30min左右濃縮膠凝固，可放置1
?
2h后使用，待膠內(nèi)部孔成型穩(wěn)定后使用，效果更好。也可放4℃過(guò)夜，第二天再用。
[0037](1.2)配制SDS
?
PAGE分離膠(10％)，方法同步驟(1.1)。
[0038](2)SDS凝膠電泳
[0039](2.1)取30uL外泌體溶液，加10uL巰基乙醇4
×
上樣緩沖液，于沸水中煮7
?
10min，可放冰箱
?
20℃保存?zhèn)溆谩?br/>[0040](2.2)配制1
×...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
【技術(shù)特征摘要】
1.一種外泌體識(shí)別裝置，其特征在于，包括基底，所述基底上有加樣區(qū)，游離抗體區(qū)，固定抗體區(qū)，質(zhì)控抗體區(qū)和廢液區(qū)；所述加樣區(qū)包括進(jìn)液通道；所述游離抗體區(qū)，用于容納抗體，并且所述加樣區(qū)通過(guò)流道與所述游離抗體區(qū)的進(jìn)液口相連通；所述固定抗體區(qū)，固定有磁性納米顆粒表面印跡外泌體材料；固定抗體區(qū)的出液口通過(guò)流道與所述質(zhì)控抗體區(qū)的進(jìn)液口相連通；所述質(zhì)控抗體區(qū)的出液口通過(guò)流道與所述廢液區(qū)的進(jìn)液口相連通。2.如權(quán)利要求1所述的外泌體識(shí)別裝置，其特征在于，所述磁性納米顆粒表面印跡外泌體材料為磁性納米粒子與印跡外泌體蛋白結(jié)合的材料。3.如權(quán)利要求2所述的外泌體識(shí)別裝置，其特征在于，所述磁性納米粒子為四氧化三鐵。4.如權(quán)利要求2所述的外泌體識(shí)別裝置，其特征在于，所述印跡外泌體蛋白通過(guò)如下步驟制備：配制分離膠和濃縮膠，對(duì)濃縮膠進(jìn)行電泳和分離，轉(zhuǎn)模，即得。5.如權(quán)利要求4所述的外泌體識(shí)別裝置，其特征在于，所述步驟在轉(zhuǎn)模后配制EC顯影液，提前打開凝膠成像儀，EC反應(yīng)液滴加...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：胡海峰，王健，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：國(guó)藥集團(tuán)健康產(chǎn)業(yè)研究院有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
還沒(méi)有人留言評(píng)論。發(fā)表了對(duì)其他瀏覽者有用的留言會(huì)獲得科技券。