本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種胚胎癌性細胞在制備3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)中的應(yīng)用、制備方法及3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)，涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明專利技術(shù)的發(fā)明專利技術(shù)人通過實驗發(fā)現(xiàn)，胚胎癌性細胞在分化過程中會分泌高含量的可溶性基底膜混合物，該基底膜混合物在室溫下，可自動聚集產(chǎn)生類似于哺乳動物細胞基底膜的生物活性基質(zhì)材料，從而用于制備可滿足不同需求的3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)。并且，可以根據(jù)后續(xù)培養(yǎng)需求選擇同源的胚胎癌性細胞制備3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)，有效避免因動物異源蛋白和病原體污染造成的細胞生長抑制，制作繁瑣等問題。制作繁瑣等問題。制作繁瑣等問題。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
胚胎癌性細胞在制備3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)中的應(yīng)用、制備方法及3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)
[0001]本專利技術(shù)涉及生物
，尤其是涉及一種胚胎癌性細胞在制備3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)中的應(yīng)用、制備方法及3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)。
技術(shù)介紹
[0002]與2D細胞培養(yǎng)相比，3D培養(yǎng)的細胞表現(xiàn)出更高程度的細胞間相互作用，具有更多生理相關(guān)的形態(tài)，能更好地再現(xiàn)高階組織過程。近幾年干細胞和3D細胞培養(yǎng)系統(tǒng)正逐漸成為再生醫(yī)學、藥物開發(fā)、毒理學和癌癥研究的關(guān)鍵模型，在基礎(chǔ)研究和轉(zhuǎn)化醫(yī)學應(yīng)用中具有重要意義，在再生醫(yī)學、疾病模型、個性化藥物篩選、精準醫(yī)學等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0003]目前市場主打產(chǎn)品如BD公司的Matrigel基底膜提取物是將腫瘤肉瘤經(jīng)過分離純化方法獲得。雖然BD基底膜可支持細胞層，還能在組織形成中影響細胞的粘附、遷移、增值和分化，但這種基底膜為異源產(chǎn)物，容易造成因動物異源蛋白和病原體污染造成的細胞生長抑制等其他不利影響，并存在產(chǎn)品批次之間的差異。有鑒于此，特提出本專利技術(shù)。
技術(shù)實現(xiàn)思路
[0004]本專利技術(shù)的第一個目的在于提供胚胎癌性細胞在制備3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)中的應(yīng)用，以至少緩解現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。
[0005]本專利技術(shù)的第二個目的在于提供一種3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)的制備方法。
[0006]本專利技術(shù)的第三個目的在于提供上述的制備方法制備得到的3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)。
[0007]本專利技術(shù)提供了胚胎癌性細胞在制備3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)中的應(yīng)用。
[0008]進一步地，所述胚胎癌性細胞為小鼠畸胎瘤細胞。
[0009]本專利技術(shù)還提供了一種3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)的制備方法，包括使用硫酸銨沉淀胚胎癌性細胞的細胞培養(yǎng)液，將得到的沉淀經(jīng)尿素復溶后，取上清進行透析復性，得到所述3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)。
[0010]進一步地，所述胚胎癌性細胞為單細胞或細胞株，優(yōu)選為小鼠畸胎瘤細胞株。
[0011]進一步地，使用無血清的細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)胚胎癌性細胞，優(yōu)選使用無血清的DMEM培養(yǎng)液；
[0012]優(yōu)選地，所述培養(yǎng)的時間為18～24小時。
[0013]進一步地，所述硫酸銨沉淀包括在10～30％wt/vol硫酸銨溶液中混合8～14小時，優(yōu)選在20％wt/vol硫酸銨溶液中混合12小時；
[0014]優(yōu)選地，所述混合的溫度為4℃；
[0015]優(yōu)選地，去除胚胎癌性細胞的細胞培養(yǎng)液中的細胞碎片后，再進行硫酸銨沉淀。
[0016]進一步地，所述尿素復溶包括將得到的沉淀溶解在含有2～4M尿素和20～150mM NaCl的Tris
?
HCl緩沖液中混合8～14小時，優(yōu)選將得到的沉淀溶解在含有2M尿素和50mM NaCl的Tris
?
HCl緩沖液中混合12小時；
[0017]優(yōu)選地，所述Tris
?
HCl緩沖液的濃度為10～100mM，pH為7.4，優(yōu)選濃度為50mM；
[0018]優(yōu)選地，將得到的沉淀濃縮后再進行尿素復溶。
[0019]進一步地，所述透析復性包括依次進行的一次透析、二次透析和三次透析；
[0020]優(yōu)選地，使用透析袋進行透析。
[0021]進一步地，所述一次透析包括在4℃透析8～14小時；
[0022]可選地，所述二次透析包括在含有20～150mM NaCl的Tris
?
HCl緩沖液中透析8～14小時，優(yōu)選含有50mM NaCl；
[0023]優(yōu)選地，所述Tris
?
HCl緩沖液的濃度為10～100mM，pH為7.4，優(yōu)選濃度為50mM；
[0024]可選地，所述三次透析包括在DMEM溶液中透析，所述透析的溫度為4℃。
[0025]另外，本專利技術(shù)還提供了上述的制備方法制備得到的3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)。
[0026]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)至少具有如下有益效果：
[0027]本專利技術(shù)的專利技術(shù)人通過實驗發(fā)現(xiàn)，胚胎癌性細胞在分化過程中會分泌高含量的可溶性基底膜混合物，其主要成分包括：層黏連蛋白、膠原IV等，同時含轉(zhuǎn)化生長因子
?
b、成纖維細胞生長因子、組織纖維酶原活化因子等。該基底膜混合物在室溫下，可自動聚集產(chǎn)生類似于哺乳動物細胞基底膜的生物活性基質(zhì)材料，從而用于制備可滿足不同需求的3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)。并且，可以根據(jù)后續(xù)培養(yǎng)需求選擇同源的胚胎癌性細胞制備3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)，有效避免因動物異源蛋白和病原體污染造成的細胞生長抑制，制作繁瑣等問題。
[0028]本專利技術(shù)提供的3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)的制備方法，通過對胚胎癌性細胞的細胞培養(yǎng)液進行硫酸銨沉淀、尿素復溶和透析復性即可得到目標產(chǎn)物，該方法操作簡單、觀察方便且成本低廉。
[0029]基于上述有益效果，本專利技術(shù)提供的3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)可以有效幫助上皮細胞等各類細胞的附著和分化，同時還會影響細胞的蛋白表達水平，支持周圍神經(jīng)再生和上皮細胞分化等，具有質(zhì)量穩(wěn)定、不易降解等優(yōu)點，填補了國內(nèi)外干細胞和3D細胞基底培養(yǎng)物技術(shù)方面的科技和產(chǎn)品空白。
附圖說明
[0030]為了更清楚地說明本專利技術(shù)具體實施方式或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對具體實施方式或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本專利技術(shù)的一些實施方式，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。
[0031]圖1為本專利技術(shù)實驗例1提供的人乳腺細胞MCF
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10A在沒有此專利技術(shù)的3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)(A)和有專利技術(shù)的3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)(B)中生長比較的結(jié)果圖；
[0032]圖2為本專利技術(shù)實驗例2提供的人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)血管形成實驗在沒有此專利技術(shù)的3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)(A)和有專利技術(shù)的3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)(B)中的比較的結(jié)果圖；
[0033]圖3為本專利技術(shù)實驗例3提供的人乳腺癌細胞(MDA
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MB
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231)在沒有此專利技術(shù)的3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)(A)和有本專利技術(shù)的3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)(B)中球體spheroid生長比較的結(jié)果圖；
[0034]圖4為本專利技術(shù)實驗例4提供的聚丙烯酰胺凝膠電泳分析本專利技術(shù)3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)以及其他同類產(chǎn)品的結(jié)果圖。
具體實施方式
[0035]除非本文另有定義，連同本專利技術(shù)使用的科學和技術(shù)術(shù)語應(yīng)具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的含義。術(shù)語的含義和范圍應(yīng)當清晰，然而，在任何潛在不明確性的情況下，本文提供的定義優(yōu)先于任何字典或外來定義。在本申請中，除非另有說明，“或”的使用意味著“和/或”。此外，術(shù)語“包括”及其他形式的使用是非限制性的。
[0036]一般地，連同本文描述的細胞和組織培養(yǎng)、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學以及蛋白和核酸化學和雜交使用的命名法和其技術(shù)是本領(lǐng)域眾所周知和通常使用的那些。除非另有說明，本專利技術(shù)的方法和技術(shù)一般根據(jù)本領(lǐng)域眾所周知，且如各種一般和更具體的參考文獻中所述的常規(guī)方法來進行，所述參考文獻在本說明書自始至終引用和討論。酶促反應(yīng)和本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
【技術(shù)特征摘要】
1.胚胎癌性細胞在制備3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)中的應(yīng)用。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述胚胎癌性細胞為小鼠畸胎瘤細胞。3.一種3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)的制備方法，其特征在于，包括使用硫酸銨沉淀胚胎癌性細胞的細胞培養(yǎng)液，將得到的沉淀經(jīng)尿素復溶后，取上清進行透析復性，得到所述3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述胚胎癌性細胞為細胞株，優(yōu)選為小鼠畸胎瘤細胞株。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，使用無血清的細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)胚胎癌性細胞，優(yōu)選使用無血清的DMEM培養(yǎng)液；優(yōu)選地，所述培養(yǎng)的時間為18～24小時。6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述硫酸銨沉淀包括在10～30％wt/vol硫酸銨溶液中混合8～14小時，優(yōu)選在20％wt/vol硫酸銨溶液中混合12小時；優(yōu)選地，所述混合的溫度為4℃；優(yōu)選地，去除胚胎癌性細胞的細胞培養(yǎng)液中的細胞碎片后，再進行硫酸銨沉淀。7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述尿素復溶包括將得到的沉淀溶解在含有2～4M尿素和20～150mM NaCl的Tris
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HCl...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：權(quán)利要求書一頁說明書七頁附圖二頁，
申請(專利權(quán))人：徐海，
類型：發(fā)明
國別省市：
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