一種降低肝素鈉中硫酸皮膚素含量的方法技術

本發明專利技術涉及肝素鈉的精制工藝，尤其涉及一種降低肝素鈉中硫酸皮膚素含量的方法。所述方法包括：將待處理的肝素鈉溶解、并將得到的肝素鈉溶解液進行酶解，離心后取上清液進行堿化處理，再次離心后取上清液進行梯度層析；其中，在進行梯度層析時，采用陰離子層析柱，依次使用3

【技術實現步驟摘要】
一種降低肝素鈉中硫酸皮膚素含量的方法


[0001]本專利技術涉及肝素鈉的精制工藝，尤其涉及一種降低肝素鈉中硫酸皮膚素含量的方法。

技術介紹

[0002]肝素鈉(heparin sodium)為抗凝血藥，是一種粘多糖類物質，由豬、牛、羊的腸黏膜中提取的硫酸氨基葡萄糖鈉鹽，在人體內由肥大細胞分泌，自然存在于血液中。肝素鈉具有防止血小板集聚和破壞、抑制纖維蛋白原轉變成纖維蛋白單體、抑制凝血活素的形成和對抗已形成的凝血活素、阻止凝血酶原轉變成凝血酶和對抗凝血酶等作用。肝素鈉在體內體外均能延緩或阻止血液凝固。目前，肝素鈉最常見的原料來源便是豬小腸，通過刮取小腸粘膜、酶解、吸附、層析等步驟制備粗品肝素鈉；然而，粗品肝素鈉需要進一步精制才能應用于臨床患者。
[0003]目前，肝素鈉的精制工藝主要分為兩類：鹽解
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樹脂吸附法和酶解
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樹脂吸附法，其中硫酸皮膚素是其主要的雜質。CN110713558A公開了一種肝素鈉的提取工藝，包括如下步驟：原料處理、加熱酶解、冷卻吸附、洗脫、沉淀、脫水干燥；然而，上述工藝提取得到的肝素鈉存在硫酸皮膚素含量過高的問題。而根據其他專利文件及文獻中肝素鈉精制的方式進行肝素鈉生產，結果發現，其硫酸皮膚素雖然合格但含量接近合格線2.0％。CN201410396942.6公開了一種控制肝素鈉原料中硫酸皮膚素和硫酸軟骨素總含量的方法，采用2次氯化鈉鹽解、過氧化叔丁醇氧化、異丙醇沉淀可以有效的去除肝素鈉原料中的硫酸皮膚素和硫酸軟骨素并可以將其總含量降至0.1％以下；但上述方法并沒有兼顧去除核酸需求，以至于會出現核酸不合格的問題。在保障肝素鈉原料中各項雜質含量均符合藥典標準的基礎上，盡可能的降低硫酸皮膚素的含量，其更具有實際生產意義。
[0004]鑒于此，特提出本專利技術。

技術實現思路

[0005]本專利技術的目的在于提供一種降低肝素鈉中硫酸皮膚素含量的方法，該方法可顯著降低肝素鈉中硫酸皮膚素的含量；本專利技術的另一目的在于提供利用該方法制得的肝素鈉。
[0006]具體地，本專利技術提供以下技術方案：
[0007]本專利技術提供一種降低肝素鈉中硫酸皮膚素含量的方法，包括：將待處理的肝素鈉溶解、并將得到的肝素鈉溶解液進行酶解，離心后取上清液進行堿化處理，再次離心后取上清液進行梯度層析；
[0008]其中，在進行梯度層析時，采用陰離子層析柱，依次使用3
±
0.1％的氯化鈉溶液、5
±
0.1％的氯化鈉溶液、7
±
0.1％的氯化鈉溶液、18
±
0.1％的氯化鈉溶液進行洗脫，收集18
±
0.1％的氯化鈉溶液的洗脫液。
[0009]現有技術中，多采用層析的方法將硫酸皮膚素為主的有關物質通過5～9％的氯化鈉溶液從肝素鈉中洗脫出來；然而，若氯化鈉濃度太低，則硫酸皮膚素去除不徹底，有關含
量不合格；若氯化鈉濃度太高則肝素鈉會被洗脫下來。
[0010]本專利技術以降低肝素鈉中硫酸皮膚素含量為研發目的，嘗試了大量的層析工藝，在研發過程中發現，采用梯度層析的方式有望降低肝素鈉中硫酸皮膚素的含量。
[0011]進一步在進行梯度層析過程中，采用陰離子層析柱，并依次使用3
±
0.1％的氯化鈉溶液、5
±
0.1％的氯化鈉溶液、7
±
0.1％的氯化鈉溶液、18
±
0.1％的氯化鈉溶液進行洗脫，可顯著降低肝素鈉中硫酸皮膚素含量。
[0012]具體而言，3
±
0.1％的氯化鈉溶液洗脫的目的是平衡柱子以及去除部分堿化離心后仍殘留的核酸蛋白；硫酸皮膚素主要在5
±
0.1％的氯化鈉溶液洗脫的過程中除去，但根據傳統工藝做法以及其他專利文件的實驗方法，所生產的肝素鈉精品中有關物質含量低于2％但高于1％(甚至接近2％)，一旦經過工藝放大，其有關物質含量便很容易出現不合格的現象；在上述洗脫步驟的基礎上，通過進一步的7
±
0.1％的氯化鈉溶液洗脫，即可以去除殘留的硫酸皮膚素又能避免肝素鈉被洗脫下來；最終使用18
±
0.1％的氯化鈉溶液進行洗脫、并收集18
±
0.1％的氯化鈉溶液的洗脫液，即可顯著降低肝素鈉中硫酸皮膚素含量。
[0013]為了進一步降低肝素鈉中硫酸皮膚素的含量，本專利技術對梯度層析的步驟進行了優化，具體如下：
[0014]作為優選，所述陰離子層析柱的體積為所述肝素鈉溶解液體積的1.5～2.5倍；
[0015]進一步地，當使用3
±
0.1％的氯化鈉溶液洗脫時，洗脫體積為陰離子層析柱體積的1～3倍；
[0016]進一步地，當使用5
±
0.1％的氯化鈉溶液洗脫時，洗脫至流出液醇檢澄清；
[0017]進一步地，當使用7
±
0.1％的氯化鈉溶液洗脫時，洗脫體積為陰離子層析柱體積的1～2倍；
[0018]進一步地，當使用18
±
0.1％的氯化鈉溶液洗脫時，洗脫至流出液醇檢澄清。
[0019]在上述技術方案中，“醇檢澄清”具體指：層析即時流出液用95％的乙醇溶液進行檢測，檢測至無渾濁。
[0020]作為優選，所述方法還包括：對所述洗脫液進行氧化脫色；
[0021]進一步地，所述氧化脫色具體為：將所述洗脫液的pH值調至9.5～10.5，而后加入雙氧水，在室溫條件下攪拌4～8h；
[0022]更進一步地，所述雙氧水的濃度為25～35％；以所述洗脫液的體積為基準，所述雙氧水的添加量為2～4％。
[0023]作為優選，所述方法還包括：將經氧化脫色處理后的洗脫液進行醇沉；
[0024]進一步地，所述醇沉具體為：將經氧化脫色處理后的洗脫液的pH調至6.0～8.0，加入乙醇，在3～5℃下靜置23～25h，而后在3～5℃、3500～4500rpm下離心10～20min；
[0025]更進一步地，所述乙醇的濃度不低于90％；所述乙醇的添加量為經氧化脫色處理后的洗脫液的1～2倍。
[0026]作為優選，采用3
±
0.1％的氯化鈉溶液溶解待處理的肝素鈉；以g/ml計，待處理的肝素鈉：3
±
0.1％的氯化鈉溶液＝1：14～16。
[0027]進一步地，所述溶解在40～50℃下進行。
[0028]作為優選，所述酶解的酶為胰蛋白酶；以g/ml計，胰蛋白酶：肝素鈉溶解液＝1：8000～12000；
[0029]進一步地，所述酶解在pH為7.0～9.0的條件下進行；
[0030]更進一步地，所述酶解的時間為5～8h。
[0031]作為優選，兩次離心均在3～5℃、3500～4500rpm下進行10～20min。
[0032]作為優選，所述堿化處理具體為：將第一次離心后的上清液的pH值調至10.0～13.0，而后在不低于95℃本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種降低肝素鈉中硫酸皮膚素含量的方法，其特征在于，包括：將待處理的肝素鈉溶解、并將得到的肝素鈉溶解液進行酶解，離心后取上清液進行堿化處理，再次離心后取上清液進行梯度層析；其中，在進行梯度層析時，采用陰離子層析柱，依次使用3
±
0.1％的氯化鈉溶液、5
±
0.1％的氯化鈉溶液、7
±
0.1％的氯化鈉溶液、18
±
0.1％的氯化鈉溶液進行洗脫，收集18
±
0.1％的氯化鈉溶液的洗脫液。2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述陰離子層析柱的體積為所述肝素鈉溶解液體積的1.5～2.5倍。3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，使用3
±
0.1％的氯化鈉溶液洗脫，洗脫體積為陰離子層析柱體積的1～3倍；和/或，使用5
±
0.1％的氯化鈉溶液洗脫，洗脫至流出液醇檢澄清；和/或，使用7
±
0.1％的氯化鈉溶液洗脫，洗脫體積為陰離子層析柱體積的1～2倍；和/或，使用18
±
0.1％的氯化鈉溶液洗脫，洗脫至流出液醇檢澄清。4.根據權利要求1～3任一項所述的方法，其特征在于，還包括：對所述洗脫液進行氧化脫色；優選地，所述氧化脫色具體為：將所述洗脫液的pH值調至9.5～10.5，而后加入雙氧水，在室溫條件下攪拌4～8h；更優選地，所述雙氧水的濃度為25～35％；以所述洗脫液的體積為基準，所述雙氧水的添加量為2～4％。5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，還包括：將經氧化脫色處理后的洗脫液進行醇沉；優選地，所述醇沉具體為：將經氧化脫色處理后的洗脫液的pH調至6.0～8.0，加入乙醇，在3～5℃下靜置23～25h，而后在3～5℃、3500～4500rpm下離心10～20min；更優選地，所述乙醇的濃度不低于90％；所述乙醇的添加量為經氧化脫色處理后的洗脫液的1～2倍。6.根據權利要求1～5任一項所述的方法，其特征在于，采用3
±
0.1％的氯化鈉溶液溶解待處理的肝素鈉；以g/ml計，待處理的肝素鈉：3
±
0.1％的氯化鈉溶液＝1：14～16。7.根據權利要求1～6任一項所述的方法，其特征在于，所述酶解的酶為胰蛋白酶；以g/ml計，胰蛋白酶：肝素鈉溶解液＝1：8000～12000；優選地，所述酶解在pH為7.0～9.0的條件下進...

【專利技術屬性】
技術研發人員：李成斌，田丹，宋威，
申請(專利權)人：北京賽而生物藥業有限公司，
類型：發明
國別省市：