用于治療出血性中風后不良繼發性神經學后果的觸珠蛋白制造技術

本發明專利技術一般涉及治療或預防伴隨血管外紅細胞溶解和無細胞血紅蛋白(Hb)釋放進入腦脊液(CSF)的出血性中風后受試者的不良繼發性神經學后果的方法，包括使有此需要的受試者CSF暴露于治療有效量的觸珠蛋白(Hp)并持續足以允許Hp或其功能類似物與無細胞Hb形成復合物的時間段，且由此中和無細胞Hb。本發明專利技術的方面還涉及包含Hp的人工CSF的組合物和試劑盒。還涉及包含Hp的人工CSF的組合物和試劑盒。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】用于治療出血性中風后不良繼發性神經學后果的觸珠蛋白


[0001]本專利技術通常涉及用于治療和/或預防受試者在出血性中風(haemorrhagic stroke)進入腦脊液(CSF)隔室之后，特別是在蛛網膜下腔出血(SAH)之后的不良繼發性神經學后果(neurolgical outcome)的方法和組合物。

技術介紹

[0002]本說明書中引用的所有參考文獻、包括任何專利或專利申請通過引用并入本文，以便能夠充分理解本專利技術。盡管如此，但是這些參考文獻不應被視為構成本領域、澳大利亞或任何其他國家的公知常識的這些文獻組成部分之一的承認。
[0003]出血性中風涉及腦內部或表面的血管破裂，出血進入周圍組織。出血性中風的實例包括：i)腦內出血(本文稱作ICH)，它涉及大腦中的血管破裂；ii)腦室出血(本文稱作IVH)，其為出血進入腦室系統；和iii)蛛網膜下腔出血(本文稱作SAH)，它涉及大腦與覆蓋大腦的組織之間的空間稱作蛛網膜下腔出血。大多數情況下，SAH由爆裂性神經瘤(本文稱作aSAH)引起。SAH的其他原因包括頭部損傷、出血性疾病和使用血液稀釋劑。
[0004]約30％的IVH主要局限于受試者的腦室系統，且典型地由腦室內(intraventricular)創傷、動脈瘤、血管畸形或腫瘤引起，尤其是脈絡叢。其余70％實際上是繼發性的，是由于現有出血(無論是腦實質內(intraparenchymal)出血還是SAH出血)的擴大所致。已經發現IVH出現在35％的中度至重度創傷性腦損傷中。因此，如果沒有廣泛的相關損害，則IVH通常不會發生。
[0005]動脈瘤性蛛網膜下腔出血(aSAH)是SAH最常見的病因，并且與最高的死亡率和長期神經功能失能(disability)相關
1,2
。盡管在動脈瘤修復和神經重癥監護方面取得了進展，但歐洲的中位住院病死率為44.4％，美國為32.2％3。35％的幸存者報告出血事件發生后1年總體生活質量較差，83
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94％無法恢復工作4?6。在美國因顱內動脈瘤破裂導致的aSAH的發病率估計為每10000人1例，每年約產生27000例新病例。此外，aSAH在女性中比男性更常見(2:1)；發病率最高的是55至60歲的人。
[0006]盡管在過去幾十年中，在處置出血性中風患者方面有所改進并且隨著死亡人數降低，但是該人群的殘疾(disability)和死亡率仍然很高。腦損傷可在SAH后的第一天立即發生。這種早期腦損傷可以歸因于對大腦的物理影響例如顱內壓升高、疝氣、腦內出血、腦室內出血和腦積水。隨后出現了不良繼發性神經學后果，包括血管造影腦血管痙攣(ACV)，在更嚴重的情況下，可導致遲發性腦缺血(DCI)和腦梗死。發生遲發性缺血性神經功能缺損(DIND)的不良繼發神經學后果典型地在初次出血或出血后的第4天至第14天發生，并且是這些患者殘疾和死亡的主要原因。DIND是一種獨特的腦缺血綜合征。頭痛、腦膜炎和體溫增加典型地伴隨著意識的波動性下降和局灶性(focal)神經癥狀的出現。臨床DIND可以通過延遲意識下降至少兩個格拉斯哥昏迷量表(GCS)水平和/或新的局灶性神經功能缺損來定義。可在術后、臨床惡化時以及監測期后進行連續CT掃描，以篩查遲發性梗死。這可以通過選定病例的MRI進行補充。DIND的發病機制僅部分了解，但被廣泛認為是多因素的7。例如，
神經炎癥在損傷擴展和腦損傷中起著關鍵作用。紅細胞分解產物可導致炎癥細胞因子的釋放，從而觸發血管痙攣和組織損傷8。外周免疫細胞在受損組織中被募集和激活。這些細胞可以進入腦實質并釋放炎性細胞因子9。此外，固有的toll
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樣受體在梗死后上調，導致廣泛的神經炎癥。神經炎癥也與SAH后發生不良繼發性后果有關
10
。發生腦血管痙攣(CV)的血管的白細胞粘附能力增加，導致遲發性神經功能惡化
15
。
[0007]炎癥、腦微血栓形成、皮質彌漫性缺血、血腦屏障破壞和遲發性腦缺血(DCI)也可能導致腦損傷。
[0008]令人遺憾地，目前還沒有針對這些過程的藥物治療在出血性中風中顯示出功效。腸內尼莫地平和血管內治療aSAH中的罪魁禍首動脈瘤仍然是唯一的治療選擇，有隨機臨床試驗的證據支持，以改善患者的后果。因此，對于治療和/或防止出血性中風后患者出現不良繼發性神經學后果的特殊療法的需求是迫切的和尚未得到滿足的。

技術實現思路

[0009]在本專利技術的一個方面，提供了治療或預防出血性中風伴隨血管外紅細胞溶解和無細胞(cell
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free)血紅蛋白(Hb)釋放進入腦脊液(CSF)后的受試者中的不良繼發性神經學后果的方法，所述方法包括使由此需要的受試者的CSF暴露于治療有效量的觸珠蛋白(Hp)并持續使Hp與無細胞Hb形成復合物的足夠時間段，且由此中和無細胞Hb。
[0010]在本專利技術的另一個方面，提供了藥物組合物，其用于按照本文所述的方法治療或預防受試者腦室內出血后的不良繼發性神經學后果，所述組合物包含治療有效量的觸珠蛋白(Hp)和藥學上可接受的載體。
[0011]在本專利技術的另一個方面，提供了藥物組合物，其用于按照本文所述的方法治療或預防受試者腦室內出血后的不良繼發性神經學后果，所述組合物包含治療有效量的觸珠蛋白(Hp)和藥學上可接受的載體。
[0012]在本專利技術的另一個方面，提供了治療有效量的觸珠蛋白(Hp)在制備用于按照本文所述的方法治療或預防受試者腦室內出血后的不良繼發性神經學后果的藥物中的用途。
[0013]在本專利技術的另一個方面，提供了包含如本文所述的人工CSF或如本文所述的組合物的試劑盒。
附圖說明
[0014]圖1為通過斜坡方法(transclival approach)從新鮮屠宰的豬中分離豬基底動脈的示例性的實例。在解剖顯微鏡下制備每只動物5
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6個血管環(長度為2mm)，同時避免大量機械血管操作。
[0015]圖2顯示實驗裝置的方案和術中攝影，其中腦室外引流(external ventricular drain)(EVD)進入左側側腦室的額角，在右側額葉(right frontal)白質中植入神經監測探頭和枕下脊髓針。
[0016]圖3顯示來自數字減影血管造影(DSA)的血管直徑的半自動量化。左圖和右上方的嵌體顯示了大腦前動脈(ACA)、大腦中動脈(MCA)、頸內動脈(ICA)的池部(cisternal part)和基底動脈中感興趣的線性區域(ROI)的示例性選擇(BA)。這些是在ACA、cICA和BA的直線段中自動設置的，間隔為0.5mm(5個)，并在MCA的曲線段(3個)中手動設置。對于所有的ROI，
血管直徑根據Fischer等人2010(右下)先前描述的橫截面(右中)的強度分布計算，并對相應血管的所有ROI取平均值。
[0017]圖4顯示無細胞Hb在使用分離的豬基底動脈的血管功能實驗中的作用。A，在向緩沖液中加入MAHMA NONOate(60nM本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】1.治療或預防出血性中風伴隨血管外紅細胞溶解和釋放無細胞血紅蛋白(Hb)進入腦脊液(CSF)后的受試者中的不良繼發性神經學后果的方法，所述方法包括使此有需要的受試者的腦脊液暴露于治療有效量的觸珠蛋白(Hp)并持續足以使Hp與無細胞Hb形成復合物的時間段，且由此中和無細胞Hb。2.權利要求1的方法，其中所述出血性中風為自發性出血或創傷性出血。3.權利要求1或權利要求2的方法，其中所述出血性中風為腦室內出血或蛛網膜下腔出血。4.權利要求3的方法，其中所述蛛網膜下腔出血為動脈瘤性蛛網膜下腔出血。5.權利要求1
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4中任一項的方法，其中所述不良繼發性神經學后果選自遲發性缺血性神經功能缺損(DIND)、遲發性腦缺血(DCI)、神經毒性、炎癥、一氧化氮耗盡、氧化性組織損傷、腦血管痙攣、腦血管反應性和水腫。6.權利要求5的方法，其中所述不良繼發性神經學后果為腦血管痙攣。7.權利要求5的方法，其中所述不良繼發性神經學后果為遲發性缺血性神經功能缺損。8.權利要求5的方法，其中所述不良繼發性神經學后果為遲發性腦缺血。9.權利要求1
?
8中任一項的方法，其中所述不良繼發性神經學后果為腦實質內不良繼發性神經學后果。10.權利要求1
?
9中任一項的方法，包括在出血發作后約21天內使CSF暴露于Hp或其功能類似物。11.權利要求10的方法，包括在出血發作后約2天
?
約4天使CSF暴露于Hp。12.權利要求10的方法，包括在出血發作后約5天
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約14天使CSF暴露于Hp。13.權利要求1
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12中任一項的方法，包括向受試者顱內施用Hp。14.權利要求1
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12中任一項的方法，包括向受試者鞘內施用Hp。15.權利要求14的方法，其中將Hp鞘內施用進入椎管。16.權利要求14的方法，其中將Hp鞘內施用進入蛛網膜下腔。17.權利要求1
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12中任一項的方法，包括向受試者腦室內施用治療有效量的Hp。18.權利要求13
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17中任一項的方法，其中CSF暴露于治療有效量的Hp的時間段至少為約2分鐘。19.權利要求18的方法，其中CSF暴露于治療有效量的Hp的時間段至少為約2分鐘
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約45分鐘。20.權利要求18的方法，其中CSF暴露于治療有效量的Hp的時間段至少為約2分鐘
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約20分鐘。21.權利要求18的方法，其中CSF暴露于治療有效量的Hp的時間段至少為約4分鐘
?
約10分鐘。22.權利要求1
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21中任一項的方法，其中Hp的治療有效量至少與出血后受試者CSF中無細胞Hb的濃度等摩爾量。23.權利要求22的方法，還包括：(i)在出血后和使CSF暴露于Hp之前從受試者獲得CSF樣品；(ii)測量步驟(i)中獲得的CSF樣品中無細胞Hb的量；和(iii)基于來自步驟(ii)的無細胞Hb的濃度確定至少等摩爾量的Hp。24.權利要求1
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23中任一項的方法，其中治療有效量的Hp為約2μM
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約20mM。
25.權利要求24的方法，其中治療有效量的Hp為約2μM
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約300μM。26.權利要求24的方法，其中治療有效量的Hp為約5μM
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約50μM。27.權利要求24的方法，其中治療有效量的Hp為約10μM
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約30μM。28.權利要求1
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27中任一項的方法，還包括取出在CSF中形成的Hp:無細胞HB復合物。29.權利要求1
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28中任一項的方法，包括使CSF暴露于體外治療有效量的Hp。30.權利要求29的方法，包括：(i)在出血后從受試者的CSF隔室獲得CSF樣品；(ii)向步驟(i)的CSF樣品中加入Hp以獲得富含Hp的CSF樣品；(iii)向受試者施用富含Hp的CSF樣品，由此受試者的CSF隔室暴露于治療有效量的Hp一定時間段，足以使Hp與受試者的CSF隔室中的無細胞Hb形成復合物；和(iv)任選地重復步驟(i)
?
(iii)。31.權利要求29的方法，包括：(i)在出血后從受試者的CSF隔室中取出一定體積的CSF；(ii)提供包含Hp的人工CSF；(iii)向受試者施用(ii)的人工CSF，由此使受試者的CSF隔室暴露于治療有效量的Hp一定時間段，足以使Hp與受試者的CSF隔室中的無細胞Hb形成復合物；和(iv)任選地重復步驟(i)
?
(iii)。32.權利要求29的方法，包括：(i)在出血后從受試者獲得CSF；(ii)在允許Hp或其功能類似物與CSF中的無細胞Hb形成復合物的條件下使來自步驟(i)中的CSF暴露于Hp；(iii)在步驟(ii)之后從CSF中提取Hp:無細胞Hb復合物以獲得與來自步驟(i)的CSF相比時具有較低量的無細胞Hb的Hb減少的CSF；(iv)任選地重復步驟(ii)
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(iii)，獲得基本上不含無細胞Hb的Hb
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減少的CSF；和(v)將得自步驟(iii)或步驟(iv)的Hb減少的CSF施用于受試者的CSF隔室。33.權利要求32的方法，還包括在步驟(vi)之前向Hb
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減少的CSF中加入治療有效量的Hp。34.權利要求32或權利要求33的方法，其中將Hp固定在底物上。35.權利要求34的方法，其中所述底物為親和色譜樹脂...

【專利技術屬性】
技術研發人員：M，
申請(專利權)人：瑞士杰特貝林生物制品有限公司，
類型：發明
國別省市：