一種MIF抑制劑4-IPP在制備治療腦膠質瘤藥物的應用制造技術

本發明專利技術公開了一種MIF抑制劑4

【技術實現步驟摘要】
一種MIF抑制劑4
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IPP在制備治療腦膠質瘤藥物的應用


[0001]本專利技術屬于醫藥
，具體涉及MIF抑制劑4
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IPP在制備治療腦膠質瘤藥物方面的應用。

技術介紹

[0002]腦膠質瘤(Gliomas)是最常見的中樞神經系統原發性惡性腫瘤，其浸潤性生長、易復發、預后不良，是癌癥治療中最具挑戰性疾病之一[1]。腦膠質瘤年發病率約為6/10萬，5年平均生存率低于10％[2]；膠質母細胞瘤(Glioblastoma)是WHOⅣ級膠質瘤，惡性度極高，從診斷到死亡平均時間不到18個月[3]。
[0003]目前，手術切除、化療聯合放療及靶向免疫療法是治療膠質瘤的主要方案。但是，由于術后腫瘤殘留、放療敏感性下降、化療耐藥等原因，膠質瘤患者的平均生存時間并沒有得到實質性改善。巨噬細胞遷移抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor，MIF)是一種具有酶、趨化因子和激素等性質的多能細胞因子[4]，MIF直接參與腫瘤細胞的調節，促進腫瘤生長、轉移、血管新生[5]。研究發現，MIF在前列腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、結腸癌和膠質瘤等多種腫瘤中都有高表達[6
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10]。RT
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PCR定量檢測惡性膠質瘤細胞中MIF mRNA的表達量比正常腦組織高800倍，并且這與總細胞裂解物和分泌的MIF蛋白水平高有關[11]。還有研究發現過表達MIF誘導血管生成，與膠質瘤的分期和轉移擴散相關[4
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5]；MIF表達升高也與膠質母細胞瘤患者腫瘤復發及預后不良有關[12]。因此，MIF可能作為膠質瘤治療的新型靶點。

技術實現思路

[0004]本專利技術的第一目的是為制備治療腦膠質瘤藥物，提供一種MIF抑制劑4
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碘
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苯基嘧啶(4
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IPP)在制備膠質瘤治療藥物中的應用。
[0005]本專利技術的第二目的是提供一種MIF抑制劑4
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IPP在制備膠質瘤細胞增殖抑制藥物中的應用。
[0006]本專利技術的第三目的是提供一種MIF抑制劑4
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IPP在制備腦膠質瘤細胞轉移抑制藥物中的應用。
[0007]與現有技術相比，本專利技術的有益效果如下：本專利技術首次公開了一種MIF抑制劑4
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IPP在制備治療腦膠質瘤的藥物中的應用，本專利技術先在體外實驗采用不同濃度4
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IPP處理U87和U251膠質瘤細胞，使用CCK
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8和克隆形成實驗檢測4
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IPP處理后U87和U251膠質瘤細胞的增殖能力以及克隆形成能力；通過使用Transwell小室進行Migration/Invasion實驗檢測4
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IPP對U87和U251細胞轉移/侵襲的抑制作用。進一步體內實驗采用U87構建雄性裸鼠皮下異位移植腫瘤模型，通過對裸鼠分別進行腹膜內注射PBS組(Control組)及20mg/kg 4
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IPP組(治療組)，觀察MIF抑制劑4
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IPP對膠質瘤的治療作用，計算腫瘤大小、稱重腫瘤質量及計算腫瘤體積。研究結果表明，4
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IPP能夠有效的抑制膠質瘤細胞增殖、克隆形成和轉移，以及治療膠質瘤。
附圖說明
[0008]圖1為實施例1的4
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IPP處理U87細胞的CCK
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8增殖實驗的效果圖；圖2為實施例1的4
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IPP處理U251細胞的CCK
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8增殖實驗的效果圖；圖3為實施例1的4
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IPP處理U87和U251細胞的細胞克隆形成實驗的效果圖；圖4為實施例2的4
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IPP處理U87和U251細胞的Migration實驗和Invasion實驗的效果圖；圖5為實施例3的PBS組及20mg/kg 4
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IPP組的皮下異位移植腫瘤模型的效果圖；
具體實施方式
具體實驗方法和結果如下：實施例1一、實驗方法：
[0009]1、細胞增殖實驗CCK
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8：將一代的U87和U251細胞以2000個/孔數量接種在96孔板中，12小時后分別加入濃度為0.390625μM，0.78125μM，1.5625μM，3.125μM，6.25μM，12.5μM，25μM，50μM，100μM和200μM的4
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IPP溶液。培養24小時后，加入20μL CCK
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8試劑盒37℃孵育2小時后用熒光酶標儀檢測OD值。
[0010]2、克隆形成實驗：取對數生長期的單層培養細胞，胰酶消化并吹打成單個細胞，重懸后進行細胞計數，按照200個/孔的密度鋪到六孔板內，搖板分散細胞，置培養箱過夜。第二天分別加入12.5μM，25μM和50μM的4
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IPP，每周換液2次，培養2～3周。隔日觀察，當培養皿中出現肉眼可見的克隆時，終止培養。棄去上清液，固定后使用結晶紫染色，用肉眼直接計數克隆，或在顯微鏡(低倍鏡)計數大于10個細胞的克隆數。二、實驗結果：
[0011]圖1所示在體外，設置濃度梯度的4
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IPP來處理U87細胞24h后使用CCK
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8試劑檢測其細胞增殖情況，結果顯示4
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IPP可顯著抑制U87的增殖能力。圖2所示在體外，設置濃度梯度的4
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IPP來處理U251細胞24h后使用CCK
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8試劑檢測其細胞增殖情況，結果顯示4
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IPP可顯著抑制U251的增殖能力。基于CCK
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8實驗得到的結果，進一步采用濃度梯度進行克隆實驗，圖3的結果顯示4
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IPP可以有效抑制U87/U251的克隆形成能力。以上結果表明4
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IPP可以有效抑制膠質瘤細胞U87/U251的增殖和克隆形成能力。實施例2一、實驗方法：
[0012]1、Migration和Invasion實驗：Transwell小室(24孔板)用于進行Migration實驗和基質膠包被的Invasion試驗。對于Migration實驗，取200ul細胞懸液(密度2
×
105)加入Transwell小室，500μl含有不同濃度4
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IPP的完全培養基置于下室，培養24小時后收樣。對于侵襲測定，Matrigel基質膠包被上室后鋪設200ul細胞懸液(密度2
×
105)，同時將500μl含有不同濃度4
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IPP的完全培養基添加到下室，培養24小時后收樣。收樣后結晶紫染色，顯微鏡拍照。二、實驗結果：
migrationinhibitory factor antibodies inhibit growth of human prostate cancer本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種如下圖所示的小分子化合物巨噬細胞遷移抑制因子MIF抑制劑4
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IPP在制備治療腦膠質瘤藥物方面的應用。2.一種權利要求1所述的小分子化合物4
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【專利技術屬性】
技術研發人員：杜延茹，鄭琳，
申請(專利權)人：鄭琳，
類型：發明
國別省市：