本發明專利技術涉及一種適用于工業化生產的高純度乳酸鏈球菌素制備工藝，包括：培養結束后含菌體的發酵液的前處理得到含有乳酸鏈球菌素的濾液；濾液經過濃縮得到一次濃縮液；濃縮液進行脫色除雜處理得到脫色液；脫色液經過二次濃縮得到二次濃縮液；在二次濃縮液中加入有機溶劑，經過攪拌、靜置、分離，等得到乳酸鏈球菌素濕品，經干燥后得到含量98％以上的乳酸鏈球菌素產品。利用本工藝能得到高純度的乳酸鏈球菌素產品，且有機溶劑可回收利用，該工藝不產生高鹽廢水，工藝簡單、提取收率高，可適用于工業化生產。業化生產。業化生產。
【技術實現步驟摘要】
一種適用于工業化生產的高純度乳酸鏈球菌素制備工藝
[0001]本專利技術涉及一種天然食品防腐劑的制備方法，具體地說，涉及一種高純度乳酸鏈球菌素的制備方法。
技術介紹
[0002]乳酸鏈球菌素，又稱乳鏈菌肽、乳球菌肽，英文名稱Nisin，是一種能有效抑制大部分革蘭氏陽性菌的一類羊毛硫抗生素。乳酸鏈球菌素是一種天然的抗菌肽，廣泛應用于肉制品、乳制品、海產品、植物蛋白飲品、烘焙食品、方便食品、腌制菜等食品的加工、保藏中。基于Nisin的理化性質及其代謝特征，也可用于某些動物和人為疾病的治療中。但由于Nisin純化過程的復雜性，導致市面上Nisin產品的純度普遍較低。
[0003]專利CN201010130602.0公布了一種高純度乳酸鏈球菌素的制備方法，具體地公布了發酵培養物的預處理與固液分離、通過調節pH至6.0
?
8.0將乳酸鏈球菌素從濾液轉移至萃取相中第一次萃取、萃取相至少三次的洗滌萃取、通過調節pH2.0
?
3.0將乳酸鏈球菌素從萃取相中轉移至水相中、真空濃縮、噴霧干燥，獲得純度70％以上粉末狀的乳酸鏈球菌素，瓊脂擴散法測定的效價位28000IU/mg以上。該工藝反復萃取、洗滌，流程復雜，不適用于大規模工業化生產。
[0004]專利CN200910152930.8公布了一種高純度乳酸鏈球菌素的制備方法，具體地公布了乳酸鏈球菌素粗粉的溶解、加入食用鹽使其飽和并攪拌靜置得到乳酸鏈球菌素層、乙醇再次溶解、離心分離干燥而成，所得產品純度達到98％以上。該工藝是以乳酸鏈球菌素粗粉為基礎，經過兩次溶解、分離，有機溶劑使用量大，且未從發酵源頭開始說明如何得到純品。
技術實現思路
[0005]為了解決上述現有技術中存在的問題，本專利技術提供了一種可連續化生產、且不產生高鹽廢水的乳酸鏈球菌素制備方法。
[0006]本專利技術采用的技術方案如下：
[0007]1)發酵液前處理，將發酵液經過系列處理，得到含有乳酸鏈球菌素的澄清溶液；
[0008]2)澄清的乳酸鏈球菌素溶液經過濃縮得到一次濃縮液；
[0009]3)一次濃縮液加入定量的活性炭，攪拌、過濾，得到脫色液；
[0010]4)將脫色液進一步濃縮，得到二次濃縮液；
[0011]5)根據二次濃縮液體積，定量加入有機溶劑，并攪拌、靜置；
[0012]6)待二次濃縮液分層后，將下層沉淀離心分離，干燥后得到高純度的乳酸鏈球菌素純品。
[0013]所述的發酵液前處理，是指將發酵液經過調節pH值、加熱、過濾，得到含有乳酸鏈球菌素的澄清溶液；或經過過濾、調節pH值、加熱、過濾，得到含有乳酸鏈球菌素的澄清溶液。
[0014]所述的調節pH值是指加入鹽酸、草酸或醋酸，將發酵液pH調節至1.5
?
2.5，優選鹽
酸。
[0015]所述的有機溶劑選自甲醇、乙醇、丙酮，優選乙醇。
[0016]所述的活性炭，優化木質粉末狀活性炭。
[0017]步驟1)中所述的加熱是指將發酵液通過連續加熱的方式，將發酵液加熱至80
?
90℃，并維持5
?
10min；過濾是指板框過濾、陶瓷膜過濾的一種或兩種。
[0018]所述步驟2)中的濃縮是指，樹脂濃縮、陶瓷膜濃縮、超濾膜濃縮、納濾膜濃縮中的一種或幾種，優選樹脂濃縮、陶瓷膜濃縮。
[0019]所述步驟3)中活性炭的添加量為濃縮液體積的0.01
?
0.06％(m/v)，攪拌時間為10
?
40min。
[0020]所述步驟4)中二次濃縮步驟是指，真空濃縮、泡沫濃縮、超濾濃縮、納濾濃縮等的一種或幾種，優選真空濃縮、納濾濃縮。
[0021]所述步驟5)中濃根據縮液體積，添加有機溶劑，使得最終有機溶劑濃度達到40
?
50％。
[0022]所述步驟5)中濃縮液與有機溶劑在特定的容器內進行攪拌、靜置，所述特定容器指錐形容器，且側壁不同位置設置有液體出口。
[0023]所述步驟5)中靜置時間為18
?
36h。
[0024]所述步驟6)具體操作為：先將上層清液從側壁液體排出口排出，僅離心下層沉降物。
[0025]所述步驟6)中干燥采用隔水式真空干燥箱，溫度為40
?
60℃，或采用冷凍干燥方式。
[0026]本專利技術的效果及優點：通過此方法制備的乳酸鏈球菌素純度在98％以上，以瓊脂擴散法測定的效價為39200IU/mg以上。整個制備過程可連續化操作，且沉降后的有機溶劑可回收利用；制備工藝不使用氯化鈉，不產生高鹽廢水。
附圖說明
[0027]圖1為本專利技術中容器的結構示意圖；
[0028]1、攪拌電機；2、罐體；3、溢流口1；4、溢流口2；5、溢流口3；6、攪拌槳；7排污閥。
具體實施方式
[0029]為了更好地理解本專利技術，下面結合實施例進一步闡明本專利技術的內容，但本專利技術的內容不僅僅局限于下面的實施例。
[0030]實施例1
[0031]取乳酸鏈球菌素發酵液，用鹽酸調節發酵液pH至1.8
?
.2.0，升溫至85℃，維持10min后將料液迅速降溫至50℃左右，并添加助濾劑進行板框過濾，得到濾液。濾液經大孔吸附樹脂吸附、解析后得到濃縮液，濃縮液加入0.02％活性炭脫色過濾得到脫色液，脫色液經真空濃縮得到濃縮液，在濃縮液中加入丙酮，使丙酮濃度達到45％，攪拌1h后靜置24h出現分層，將上層清液排出并回收丙酮，下層沉降物經離心得到濕乳酸鏈球菌素，并經99％丙酮淋洗后至于50℃真空干燥箱干燥，得到乳酸鏈球菌素產品，經瓊脂擴散法測定效價為39211IU/mg，即純度為98.03％的乳酸鏈球菌素產品。
[0032]實施例2
[0033]取乳酸鏈球菌素發酵液，先經陶瓷膜過濾，得到濃縮液，將濃縮液加鹽酸調節pH至2.0，通過連續加熱方式，將溫度上升至82℃，并維持5min后過板框，經板框過濾得到濾液，濾液經過超濾膜進一步濃縮后加入活性炭脫色除雜，得到脫色液，將脫色液進一步通過超濾膜濃縮、納濾膜濃縮，得到濃縮液，根據濃縮液體積加入乙醇，使乙醇濃度達到50％，攪拌1h后靜置36h出現分層，將上層清液排出并回收乙醇，下層沉降物經離心得到濕乳酸鏈球菌素，并經99％乙醇淋洗后至于50℃真空干燥箱干燥，得到乳酸鏈球菌素產品，經瓊脂擴散法測定效價為39854IU/mg，即純度為99.64％的乳酸鏈球菌素產品。
本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
1.一種適用于工業化生產的高純度乳酸鏈球菌素制備工藝，其特征在于，包含以下步驟：1)發酵液前處理：將發酵液經過調節pH值、加熱、過濾，得到含有乳酸鏈球菌素的澄清溶液；或經過過濾、調節pH值、加熱、過濾，得到含有乳酸鏈球菌素的澄清溶液；2)澄清的乳酸鏈球菌素溶液經過濃縮得到一次濃縮液；3)一次濃縮液加入定量的活性炭，攪拌、過濾，得到脫色液；4)將脫色液進一步濃縮，得到二次濃縮液；5)根據二次濃縮液體積，定量加入有機溶劑，并攪拌、靜置；6)待二次濃縮液分層后，將下層沉淀離心分離，干燥后得到高純度的乳酸鏈球菌素純品。2.根據權利要求1所述的一種適用于工業化生產的高純度乳酸鏈球菌素制備工藝，其特征在于，調節pH值是指加入鹽酸、草酸或醋酸，將發酵液pH調節至1.5
?
2.5；加熱是指將發酵液通過連續加熱的方式，將發酵液加熱至80
?
90℃，并維持5
?
10min；過濾是指采用板框過濾、陶瓷膜過濾中的的一種或兩種。3.根據權利要求1所述的一種適用于工業化生產的高純度乳酸鏈球菌素制備工藝，其特征在于，所述步驟2)中的濃縮為采用樹脂濃縮、陶瓷膜濃縮、超濾膜濃縮、納濾膜濃縮中的一種或幾種。4.根據權利要求1所述的一種適用于工業化生產的高純度乳酸鏈球菌素制備工藝，其特征在于，所述步驟3)中活性炭的添加量為一次濃縮液體積的0.01
【專利技術屬性】
技術研發人員：李紅歌，郭沖，郭華泰，
申請(專利權)人：河北圣雪大成制藥有限責任公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。