本發明專利技術提供了一種具有增肌作用的豌豆肽及其制備方法、藥物和應用，屬于多肽技術領域。本發明專利技術通過酶解豌豆蛋白，分離得到5條具有明顯增肌作用的多肽。在體外衰老骨骼肌細胞試驗，通過分析對骨骼肌細胞增殖分化、細胞凋亡自噬以及蛋白質合成和降解相關的調控通路的基因表達水平的變化，同時展開動物試驗對其增肌效果及其機制進行研究，表明5條多肽序列具有顯著增肌效果，有望開發為新型治療或預防肌少癥的多肽類藥物。少癥的多肽類藥物。少癥的多肽類藥物。
【技術實現步驟摘要】
一種具有增肌作用的豌豆肽及其制備方法、藥物和應用
[0001]本專利技術屬于多肽
，具體涉及一種具有增肌作用的豌豆肽及其制備方法、藥物和應用。
技術介紹
[0002]肌肉減少癥，是指因持續骨骼肌量流失、強度和功能下降而引起的綜合癥。骨骼肌是人體運動系統的動力，肌肉的衰老和萎縮是人體衰老的重要標志，非常容易引起骨折以及關節損傷等問題。肌少癥是一種和年齡衰老相關的疾病，隨著年齡的增加，活動量的減少，人的肌肉含量和強度會逐漸的衰減，而機體的肌肉并不能夠維持平衡力和敏捷度，必然會造成行動力減弱，使身體變得行動遲緩，平衡感差，更容易摔倒。因此，肌少癥會增加老年人的住院率及醫療花費，嚴重影響老年人的生活質量，甚至縮短老年人的壽命。
[0003]目前預防和治療肌少癥主要分為以下三個方面：（1）采用運動療法確切的可以保持甚至是增加肌肉強度和肌肉含量；（2）采用藥物進行干預治療，但是，目前國內還沒有針對肌肉癥的藥物上市，很多所謂的具有防治極少癥功能的藥物大多是激素，利弊尚不能完全搞清楚。（3）營養干預治療，大多數老年人的飲食結構都存在熱量、鈣質、蛋白質和維生素D等攝入不足。那么平衡的膳食，豐富的營養，尤其是蛋白質之類的食物，就應該多吃。蛋白質、碳水化合物等營養物質攝入缺乏會增加少肌癥的患病率。此外，營養吸收狀況差，胃腸道疾病，或者多重用藥等導致少食少餐，營養過剩等都對少肌癥的進展起著“推波助瀾”的作用。衰老過程引發的消化系統退化致使吞入的食物中的營養物得不到有效吸收利用，長期營養物缺乏狀態降低了老年人的活動供能，同時存在肌肉蛋白降解遠大于合成能力，肌組織調控負平衡，肌肉負擔加劇，惡性循環致使少肌癥產生。補充蛋白質等營養素可有效預防和治療少肌癥帶來的肌肉數量和肌肉功能方面的病理改變，改變患者臨床結局。小分子低聚肽具有致敏性低、易吸收、吸收速率快等特點，且氨基酸含量豐富，可促進肌肉蛋白合成，有效防治少肌癥發生進展。
[0004]豌豆中含有豐富的蛋白質，含有9種人體必須氨基酸，且支鏈氨基酸含量豐富，支鏈氨基酸可以促進胰島素和生長激素的釋放，加快肌肉對糖分的利用。然而目前，還未明確豌豆中具有增肌作用的蛋白肽的種類，限制了防治肌少癥的肽類藥物的開發。
技術實現思路
[0005]有鑒于此，本專利技術的目的在于提供一種具有增肌作用的豌豆肽及其制備方法和應用。
[0006]本專利技術提供了一種具有增肌作用的豌豆肽，包括以下一種或幾種多肽：氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的PP1、氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的PP2、氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的PP3、氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的PP4和氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示的PP5。
[0007]優選的，包括PP2或PP2與以下一種或幾種多肽形成的混合物：PP1、PP3、PP4和PP5。
[0008]本專利技術提供了所述豌豆肽的制備方法，包括以下步驟：1）將豌豆蛋白在堿性蛋白酶的作用下酶解，得到第一酶解液；2）將所述第一酶解液在木瓜蛋白酶和纖維素酶共同作用下酶解，得到第二酶解液；3）將所述第二酶解液滅酶后過3000Da陶瓷膜，所得透過液過1KDa有機膜，收集有機膜膜透過液，得到豌豆肽；4）將所述豌豆肽經凝膠色譜層析，收集12~18min的組分S2；5）將所述組分S2經制備型液相色譜分離純化，收集55~63min的組分W5；6）將所述組分W5進行分析型液相色譜分離純化，分別在14.444min、18.110min、20.906min、22.973min、24.462min收集到5個多肽片段，依次為PP1、PP2、PP3、PP4和PP5。
[0009]優選的，步驟4）中凝膠色譜層析的條件如下：洗脫液為超純水；洗脫時間2h；洗脫速度：2.5mL/min；色譜柱規格為600 mm
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25 mm，種類為Sephadex G50色譜柱；檢測波長：214nm。
[0010]優選的，步驟5）中制備型液相色譜分離純化的條件如下：制備型液相色譜柱的規格550mm
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40μm，粒度20μm，流速為15mL/min，流動相A為體積濃度0.1%三氟乙酸水溶液，流動相B為體積濃度0.1%三氟乙酸乙腈溶液；梯度洗脫，洗脫程序如下：洗脫時間0~10min，流動相A的體積百分含量為100%~90%，流動相B的體積百分含量為0~10%；洗脫時間10~20min，流動相A的體積百分含量為90%~50%，流動相B的體積百分含量為10%~50%；洗脫時間20min~60min，流動相A的體積百分含量為50%~10%，流動相B的體積百分含量為50%~90%；洗脫時間60min~65min，流動相A的體積百分含量為10%~95%，流動相B的體積百分含量為90%~5%。
[0011]優選的，步驟6）中分析型液相色譜分離純化的條件為Gemini
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NX 10μm C18 100A，4.6
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250mm，流速為15mL/min，流動相A為體積濃度0.1%三氟乙酸的水溶液，流動相B為0.1%三氟乙酸的乙腈溶液；流速1.0mL/min，進樣量10μL，吸光度220nm；梯度洗脫，洗脫程序如下：洗脫時間0~5min，流動相A的體積百分含量由95%下降至90%，流動相B的體積百分含量由5%上升至10%；洗脫時間5min~55 min，流動相A的體積百分含量由90%下降至15%，流動相B的體積百分含量由10%上升至85%；洗脫時間55min~60min，流動相A的體積百分含量由15%上升至95%，流動相B的體積百分含量為85%下降至5%。
[0012]本專利技術提供了所述豌豆肽或所述制備方法制備得到的豌豆肽在制備預防和/或治療少肌癥的藥物中的應用。
[0013]優選的，所述藥物具有促進成肌細胞增殖、激活成肌細胞中生長和增殖信號通路、提高雄性機體睪酮水平、提高骨骼肌再生調控因子表達、提高骨骼肌線粒體中ATP酶活性、激活胰島素信號通路的藥效。
[0014]本專利技術提供了一種預防和/或治療少肌癥的藥物，活性成分包括所述豌豆肽或所
述制備方法制備得到的豌豆肽。
[0015]優選的，所述藥物的劑型為口服劑。
[0016]本專利技術提供的具有增肌作用的豌豆肽，包括以下一種或幾種多肽：氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的PP1、氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的PP2、氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的PP3、氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的PP4和氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示的PP5。本專利技術通過體外衰老骨骼肌細胞試驗，通過分析對骨骼肌細胞增殖分化、細胞凋亡自噬以及蛋白質合成和降解相關的調控通路的基因表達水平的變化，從豌豆肽中篩分得到5條具有修復衰老肌肉的寡肽序列，通過展開動物試驗對其增肌效果及其機制進行研究，結果表明5條多肽序列具有顯著增肌效果，有望開發為新型治療或預防肌少癥的多肽類藥物。而且豌豆肽具有分子量小，易吸收，支鏈氨基酸含量多的特點，具有食用安本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
1.一種具有增肌作用的豌豆肽，其特征在于，包括以下一種或幾種多肽：氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的PP1、氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的PP2、氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的PP3、氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的PP4和氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示的PP5。2.權利要求1所述豌豆肽的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：1）將豌豆蛋白在堿性蛋白酶的作用下酶解，得到第一酶解液；2）將所述第一酶解液在木瓜蛋白酶和纖維素酶共同作用下酶解，得到第二酶解液；3）將所述第二酶解液滅酶后過3000Da陶瓷膜，得到的透過液過1KDa有機膜，收集有機膜膜透過液，得到豌豆肽；4）將所述豌豆肽經凝膠色譜層析，收集12~18min的組分S2；5）將所述組分S2經制備型液相色譜分離純化，收集55~63min的組分W5；6）將所述組分W5進行分析型液相色譜分離純化，分別在14.444min、18.110min、20.906min、22.973min、24.462min收集到5個多肽片段，依次為PP1、PP2、PP3、PP4和PP5。3.根據權利要求2所述制備方法，其特征在于，步驟4）中凝膠色譜層析的條件如下：洗脫液為超純水；洗脫時間2h；洗脫速度：2.5mL/min；色譜柱規格為600 mm
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25 mm，種類為Sephadex G50色譜柱；檢測波長：214nm。4.根據權利要求2所述制備方法，其特征在于，步驟5）中制備型液相色譜分離純化的條件如下：制備型液相色譜柱的規格550mm
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40μm，粒度20μm，流速為15mL/min，流動相A為體積濃度0.1%三氟乙酸水溶液，流動相B為體積濃度0.1%三氟乙酸乙腈溶液；梯度洗脫，洗脫程序如下：洗脫時間0~10min，流動相A的體積百分含量為100%~90%，流動相B的體積百分含量為0~10%；洗脫時間10~20min，流動相A的體...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張釗，張九勛，張政，李杰，魏瑋，張西平，裴中立，谷帥，牛立柱，
申請(專利權)人：中食都慶山東生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：
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