用于提高針對液體樣本的核酸提取量的方法技術

本公開涉及制備凍干型核酸提取試劑的方法，其包括以下步驟：對液體核酸提取試劑進行凍干處理，以獲得所述凍干型核酸提取試劑。本公開的方法可有效提高在一次核酸提取中能夠使用的樣本量并改善液體核酸提取試劑的運輸效率和使用便利性。效率和使用便利性。

【技術實現步驟摘要】
用于提高針對液體樣本的核酸提取量的方法


[0001]本公開涉及微生物分子生物學檢測
，更具體涉及用于提高針對液體樣本的核酸提取量的方法。

技術介紹

[0002]臨床液體樣本(比如腦脊液、肺泡灌洗液、血清等)從采樣到寄送到醫學檢驗所進行核酸檢測通常采用干冰運輸或者使用保存液，而大多保存液要求加入量大于等于液體樣本體積(比如保存液用2倍體積，或者等體積)，因此樣本中的核酸相當于被稀釋了。而樣本進行核酸提取時加入裂解液的體積也很大，通常裂解液和其他液體加入的體積超過了樣本的體積(比如裂解液用5倍體積，或者加裂解液等體積，再加1至2倍體積異丙醇)。而手工核酸提取常用的1.5ml離心管，或者自動化提取儀使用的深孔板，要求樣本+保存液(若使用)+裂解液+其他液體(比如異丙醇)的體積小于等于1ml，否則手工提取時操作不便，或者儀器對深孔板混勻過程會溢出液體。近幾年發展的核酸提取擴增檢測一體機，或稱全自動核酸檢測系統，要求在較小的空間完成核酸提取，這樣，樣本+保存液(若使用)+裂解液的體積要求更小(比如只能裝0.2ml)。這種情況下，即使樣本量足夠，比如有5ml、10ml時，由于需要加入大量體積的裂解液，也只能用很少的樣本體積。
[0003]然而，臨床樣本的使用量與其檢測限直接相關。比如樣本中某種細菌的濃度為500個/ml，使用1ml做提取，洗脫體積50微升，若提取效率80％，就能得到80拷貝/微升的核酸濃度。但由于容器體積有限，保存液+裂解液+其他液體又占據了大部分體積，比如保存液要求等體積，裂解液要求2倍體積時，實際使用樣本就只有200微升，保存液為200微升，裂解液為400微升，才能滿足總體積小于1ml；這時，洗脫體積50微升，若提取效率80％，只能得到16拷貝/微升的核酸濃度。
[0004]此外，保存液一般是放在保護管中，用戶需要開蓋加入樣本混合。而保護管中的保護液在運輸過程會顛倒，導致管壁甚至管蓋有液滴。為了避免開蓋時觸碰液滴造成污染，開蓋加樣本前需要用適配保護管的離心機離心后再開蓋，多一步離心的操作。這會導致運輸困難和使用麻煩。并且，裂解液由于液體分裝后不易運輸儲存，通常都是提供一整瓶，用戶做核酸提取前需要每個樣本一個孔的分裝加樣，這樣樣本數目多時使用不便，操作便利性明顯下降。
[0005]因此，非常需要開發一種新的用于提高針對液體樣本的核酸提取量的方法，以有效提高在一次核酸提取中能夠使用的樣本量并改善液體核酸提取試劑(例如裂解液或保存液)的運輸效率和使用便利性。

技術實現思路

[0006]通過將液體核酸提取試劑(例如裂解液或保存液)凍干，可以一方面在凍干時水分去除掉減少液體占用體積，另一方面，可以維持疏松多孔的形態，使得加入樣本后能夠迅速溶解，充分發揮原液體核酸提取試劑的作用，進而解決上述問題。
[0007]根據本公開的第一方面，提供制備凍干型核酸提取試劑的方法，其包括以下步驟：
[0008]對液體核酸提取試劑進行凍干處理，以獲得所述凍干型核酸提取試劑。
[0009]根據本公開的第二方面，提供制備含有凍干型核酸提取試劑的核酸提取裝置的方法，其包括以下步驟：
[0010]將液體核酸提取試劑添加至核酸提取裝置內的容器中；和
[0011]對所述核酸提取裝置進行凍干處理，以獲得所述含有凍干型核酸提取試劑的核酸提取裝置。
[0012]在一種實施方案中，所述液體核酸提取試劑為裂解液或保存液。
[0013]在一種優選實施方案中，所述液體核酸提取試劑不含除水以外的揮發性物質。
[0014]在一種實施方案中，所述除水以外的揮發性物質為揮發性醇和/或揮發性酸。
[0015]在一種實施方案中，所述揮發性醇選自下組中的至少一種：甘油、異丙醇和乙醇；和/或所述揮發性酸為醋酸。
[0016]在一種優選實施方案中，所述液體核酸提取試劑為裂解液，所述裂解液包含：
[0017]5M
?
7M離液鹽；
[0018]10mM
?
100mM緩沖液；
[0019]任選地，(v/v)0.01％
?
1％去垢劑；和
[0020]0mM
?
100mM額外的鹽。
[0021]在一種優選實施方案中，所述離液鹽為5M
?
7M，優選7M鹽酸胍；或
[0022]所述離液鹽為3M
?
5M，優選5M異硫氰酸胍鹽；或
[0023]所述離液鹽為3M
?
5M鹽酸胍和4M
?
6M尿素；或
[0024]所述離液鹽為2M
?
5M異硫氰酸胍和4M
?
6M尿素。
[0025]在一種優選實施方案中，所述緩沖液選自下組中的至少一種：三羥甲基氨基甲烷、檸檬酸、磷酸和苯磺酸。
[0026]在一種優選實施方案中，所述去垢劑選自下組中的至少一種：NP40、吐溫
?
20和Triton X
?
100，優選NP40。
[0027]在一種優選實施方案中，所述額外的鹽選自下組中的至少一種：氯化鈉、氯化鉀、磷酸鈉和磷酸鉀。
[0028]在一種優選實施方案中，所述核酸提取裝置為深孔板或離心管。
[0029]根據本公開的第三方面，提供凍干型核酸提取試劑，其由根據本公開的第一方面所述的方法制備獲得。
[0030]根據本公開的第四方面，提供試劑盒，其包含根據本公開的第三方面所述的凍干型核酸提取試劑。
[0031]根據本公開的第五方面，提供含有凍干型核酸提取試劑的核酸提取裝置，其包含：
[0032]容器；和
[0033]根據本公開的第三方面所述的凍干型核酸提取試劑；
[0034]其中，所述凍干型核酸提取試劑容納于所述容器中。
[0035]根據本公開的第六方面，提供含有凍干型核酸提取試劑的核酸提取裝置，其由根據本公開的第二方面所述的方法制備獲得。
[0036]根據本公開的第七方面，提供保存凍干型核酸提取試劑、試劑盒或含有凍干型核
酸提取試劑的核酸提取裝置的方法，其包括以下步驟：
[0037]將根據本公開的第三方面所述的凍干型核酸提取試劑或根據本公開的第四方面所述的試劑盒或根據本公開的第五方面至第六方面之一所述的含有凍干型核酸提取試劑的核酸提取裝置置于惰性氣體中，優選氮氣中；或
[0038]將根據本公開的第三方面所述的凍干型核酸提取試劑或根據本公開的第四方面所述的試劑盒或根據本公開的第五方面至第六方面之一所述的含有凍干型核酸提取試劑的核酸提取裝置置于真空環境中；和/或
[0039]將根據本公開的第三方面所述的凍干型核酸提取試劑或根據本公開的第四方面所述的試劑盒或根據本公開的第五方面至第六方面之一所述的含有凍干型核酸提取試劑的核酸提取裝置置于0
?
40℃，優選置于0
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10℃，更優選置于0
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本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.制備凍干型核酸提取試劑的方法，其包括以下步驟：對液體核酸提取試劑進行凍干處理，以獲得所述凍干型核酸提取試劑。2.制備含有凍干型核酸提取試劑的核酸提取裝置的方法，其包括以下步驟：將液體核酸提取試劑添加至核酸提取裝置內的容器中；和對所述核酸提取裝置進行凍干處理，以獲得所述含有凍干型核酸提取試劑的核酸提取裝置。3.根據權利要求1或2所述的方法，其中所述液體核酸提取試劑為裂解液或保存液。4.根據權利要求1或2所述的方法，其中所述液體核酸提取試劑不含除水以外的揮發性物質。5.根據權利要求4所述的方法，其中所述除水以外的揮發性物質為揮發性醇和/或揮發性酸。6.根據權利要求5所述的方法，其中所述揮發性醇選自下組中的至少一種：甘油、異丙醇和乙醇；和/或所述揮發性酸為醋酸。7.根據權利要求1或2所述的方法，其中所述液體核酸提取試劑為裂解液，所述裂解液包含：5M
?
7M離液鹽；10mM
?
100mM緩沖液；任選地，0.01％
?
1％(v/v)去垢劑；和0mM
?
100mM額外的鹽。8.根據權利要求7所述的方法，其中所述離液鹽為5M
?
7M，優選7M鹽酸胍；或所述離液鹽為3M
?
5M，優選5M異硫氰酸胍鹽；或所述離液鹽為3M
?
5M鹽酸胍和4M
?
6M尿素；或所述離液鹽為2M
?
5M異硫氰酸胍和4M
?
6M尿素。9.根據權利要求7所述的方法，其中所述緩沖液選自下組中的至少一種：三羥甲基氨基甲烷、檸檬酸、磷酸和苯磺酸，優選三羥甲基氨基甲烷。10.根據權利要求7所述的方法，其中所述去垢劑選自下組中的至少一種：NP40、吐溫
?
20和Triton X
?
100，優選NP40。11.根據權利要求7所述的方法，其中所述額外的鹽選自下組中的至少一種：氯化鈉、氯化鉀、磷酸鈉和磷酸鉀。12.根據權利要求2所述的方法，其中所述核酸提取裝置為深孔板或離心管。13.凍干型核酸提取試劑，其由根據權利要求1所述的方法制備獲得。14.試劑盒，其包含根據權利要求13所述的凍干型核酸提取試劑。15.含有凍干型核酸提取試劑的核...

【專利技術屬性】
技術研發人員：李川，舒小婷，
申請(專利權)人：歐蒙醫學診斷中國有限公司，
類型：發明
國別省市：