本實用新型專利技術(shù)公開了一種應(yīng)用HRM篩查紅系轉(zhuǎn)錄因子EKLF基因突變的檢測試劑盒，包括：盒體，盒體設(shè)有收容腔；蓋體，用于封蓋盒體，能夠相對盒體打開與關(guān)閉；緩沖架，收容于收容腔內(nèi)，且盒體的高度高于緩沖架的高度，緩沖架形成3個高度各不相同放置區(qū)，分別為第一放置區(qū)、第二放置區(qū)和第三放置區(qū)，第一放置區(qū)、第二放置區(qū)和第三放置區(qū)分別用于放置上下游引物對試劑管、PCR反應(yīng)預(yù)混液試劑管和陰性質(zhì)控品試劑管。本實用新型專利技術(shù)的應(yīng)用HRM篩查紅系轉(zhuǎn)錄因子EKLF基因突變的檢測試劑盒具有方便進行檢測的優(yōu)點。突變的檢測試劑盒具有方便進行檢測的優(yōu)點。突變的檢測試劑盒具有方便進行檢測的優(yōu)點。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
一種應(yīng)用HRM篩查紅系轉(zhuǎn)錄因子EKLF基因突變的檢測試劑盒
[0001]本技術(shù)涉及生物檢測
，尤其涉及一種應(yīng)用HRM篩查紅系轉(zhuǎn)錄因子EKLF 基因突變的檢測試劑盒。
技術(shù)介紹
[0002]紅系轉(zhuǎn)錄因子EKLF/KLF1最早由美國西奈山醫(yī)學(xué)院科學(xué)家Bieker發(fā)現(xiàn)，它通過特異性的識別結(jié)合保守的DNA序列啟動下游基因的轉(zhuǎn)錄從而調(diào)節(jié)紅細胞一系列的生長發(fā)育過程。 EKLF基因(NC_000019.10)位于19p13.2，全長2781bp，包含有三個外顯子、兩個內(nèi)含子以及蛋白由2個功能域組成，一個位于N端，是由脯氨酸富集的轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域；另一個位于 C端，是結(jié)合保守DNA序列的鋅指結(jié)構(gòu)域。研究顯示EKLF基因顯性突變或雙重突變可導(dǎo)致一系列血液病表型，而EKLF基因單等位基因的突變可以導(dǎo)致一系列的良性表型，如胎兒血紅蛋白HbF和成人血紅蛋白A2(HbA2)升高等，進而對β
?
地中海貧血臨床表型產(chǎn)生表型修飾作用。
[0003]篩查基因未知突變的方法主要有變性高效液相色譜(DHPLC)、單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)、 Sanger測序法(金標準)以及下一代測序等方法。但是這些檢測方法存在操作步驟繁瑣，檢測周期長，檢測成本較高等缺點。
[0004]高分辨率熔解曲線(High resolution melting analysis，HRM)技術(shù)是一種可以實現(xiàn)高通量并獲得可靠結(jié)果的突變掃描和基因分型的遺傳分析方法。HRM篩查突變的主要原理是根據(jù)不同核酸分子的片段長短、GC含量、堿基互補配對存在差異性，使得PCR產(chǎn)物在加熱變性時，即使單個堿基的變化足以影響片段使解鏈溫度(Tm值)存在差異，雙鏈DNA分子同時形成獨特的熔解曲線的形狀和位置，從而根據(jù)熔解曲線的不同來對樣品進行區(qū)分，最終對篩查出的突變的陽性樣本進行Sanger測序確認。
[0005]因此應(yīng)用HRM篩查EKLF基因突變具有重要的應(yīng)用價值，目前篩查方法最常見是Sanger 測序法。然而由于該實驗需要分步進行，所需配備試劑復(fù)雜，耗時耗力，經(jīng)濟成本高，不適用于大規(guī)模人群篩查，因此有必要設(shè)計一種適用大規(guī)模人群篩查EKLF基因突變的檢測試劑盒。
技術(shù)實現(xiàn)思路
[0006]本技術(shù)旨在至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。為此，本技術(shù)提出一種應(yīng)用HRM篩查紅系轉(zhuǎn)錄因子EKLF基因突變的檢測試劑盒，能夠方便實施檢測。
[0007]根據(jù)本技術(shù)的第一方面實施例的應(yīng)用HRM篩查紅系轉(zhuǎn)錄因子EKLF基因突變的檢測試劑盒，包括：盒體，所述盒體設(shè)有收容腔；蓋體，用于封蓋所述盒體，能夠相對所述盒體打開與關(guān)閉；緩沖架，收容于所述收容腔內(nèi)，且所述盒體的高度高于所述緩沖架的高度，所述緩沖架形成3個高度各不相同放置區(qū)，分別為第一放置區(qū)、第二放置區(qū)和第三放置區(qū)，所述第一放置區(qū)、所述第二放置區(qū)和所述第三放置區(qū)分別用于放置上下游引物對試劑管、PCR 反應(yīng)預(yù)混液試劑管和陰性質(zhì)控品試劑管。
[0008]根據(jù)本技術(shù)實施例的應(yīng)用HRM篩查紅系轉(zhuǎn)錄因子EKLF基因突變的檢測試劑盒，至少具有如下有益效果：通過將緩沖架設(shè)置為三個高度不同的放置區(qū)域，各用于放置上下游引物對試劑管、PCR反應(yīng)預(yù)混液試劑管和陰性質(zhì)控品試劑管，從而將篩查EKLF基因突變的所有試劑整合在一個盒體內(nèi)，并且不同類別的測試液所放置的區(qū)域的高度各不相同，能夠方便醫(yī)護人員快速進行區(qū)別和拿取操作，從而快速的進行檢測，通過設(shè)置緩沖架對各個試劑管進行緩沖，方便在運輸過程中對試劑管進行保護。
[0009]根據(jù)本技術(shù)的一些實施例，所述PCR反應(yīng)預(yù)混液試劑管中的放置的PCR反應(yīng)預(yù)混液的總體積為1mL，所述PCR反應(yīng)預(yù)混液成分包括10
×
PCR緩沖液、2.5nM dNTPs、5U/μl Taq DNA聚合酶、1
×
LC Green、5M Betain、去離子水和DMSO。
[0010]根據(jù)本技術(shù)的一些實施例，包括9支所述上下游引物對試劑管，各所述上下游引物對試劑管中均裝有上下游引物對，9對所述上下游引物對覆蓋EKLF基因的啟動子區(qū)域、 EKLF基因的外顯子區(qū)域和EKLF基因的3'UTR區(qū)域。
[0011]根據(jù)本技術(shù)的一些實施例，所述上下游引物對的濃度為10μM。
[0012]根據(jù)本技術(shù)的一些實施例，所述緩沖架的中部形成安裝腔，所述安裝腔內(nèi)設(shè)有制冷物。
[0013]根據(jù)本技術(shù)的一些實施例，所述第一放置區(qū)沿所述盒體的高度方向設(shè)有第一放置孔，所述上下游引物對試劑管插入所述第一放置孔內(nèi)；所述第二放置區(qū)沿所述盒體的高度方向設(shè)有第二放置孔，所述PCR反應(yīng)預(yù)混液試劑管插入所述第二放置孔內(nèi)；所述第三放置區(qū)沿所述盒體的高度方向設(shè)有第三放置孔，所述陰性質(zhì)控品試劑管插入所述第三放置孔內(nèi)。
[0014]根據(jù)本技術(shù)的一些實施例，所述第一放置孔、所述第二放置孔以及所述第三放置孔均與所述安裝腔相連通。
[0015]根據(jù)本技術(shù)的一些實施例，所述緩沖架包括底座和固定座，所述底座設(shè)有放置槽，所述固定座設(shè)于所述底座頂部，所述固定座形成所述各所述放置區(qū)，所述固定座和所述底座圍設(shè)形成所述安裝腔。
[0016]根據(jù)本技術(shù)的一些實施例，所述底座采用泡沫制備而成，所述固定座采用海綿制備而成。
[0017]根據(jù)本技術(shù)的一些實施例，所述蓋體的內(nèi)表面邊緣設(shè)有粘合膠帶，所述蓋體上設(shè)有撕拉條。
[0018]本技術(shù)的附加方面和優(yōu)點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本技術(shù)的實踐了解到。
附圖說明
[0019]下面結(jié)合附圖和實施例對本技術(shù)做進一步的說明，其中：
[0020]圖1為本技術(shù)實施例的應(yīng)用HRM篩查紅系轉(zhuǎn)錄因子EKLF基因突變的檢測試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0021]圖2為圖1中的固定座的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0022]附圖標記：
[0023]應(yīng)用HRM篩查紅系轉(zhuǎn)錄因子EKLF基因突變的檢測試劑盒100；
130設(shè)置為三個高度不同的放置區(qū)域，各用于放置上下游引物對試劑管140、PCR反應(yīng)預(yù)混液試劑管150和陰性質(zhì)控品試劑管160，從而將篩查EKLF基因突變的所有試劑整合在一個盒體110內(nèi)，并且不同類別的測試液所放置的區(qū)域的高度各不相同，能夠方便醫(yī)護人員快速進行區(qū)別和拿取操作，從而快速的進行檢測，通過設(shè)置緩沖架130對各個試劑管進行緩沖，方便在運輸過程中對試劑管進行保護。
[0039]請參閱圖1，在本技術(shù)的一個實施例中，為了便于整個應(yīng)用HRM篩查紅系轉(zhuǎn)錄因子 EKLF基因突變的檢測試劑盒100的存儲和運輸，便于對試劑進行保存，緩沖架130的中部形成安裝腔134，安裝腔134內(nèi)設(shè)有制冷物170，通過設(shè)置制冷物170使檢測試劑保持低溫環(huán)境，無需再額外配備外部冰袋，方便應(yīng)用HRM篩查紅系轉(zhuǎn)錄因子EKLF基因突變的檢測試劑盒100的使用。
[0040]其中，本實施例中的制冷物170采用生物冰盒，從而能夠保證足夠的制冷性能。<本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
【技術(shù)特征摘要】
1.一種應(yīng)用HRM篩查紅系轉(zhuǎn)錄因子EKLF基因突變的檢測試劑盒，其特征在于，包括：盒體，所述盒體設(shè)有收容腔；蓋體，用于封蓋所述盒體，能夠相對所述盒體打開與關(guān)閉；緩沖架，收容于所述收容腔內(nèi)，且所述盒體的高度高于所述緩沖架的高度，所述緩沖架形成3個高度各不相同放置區(qū)，分別為第一放置區(qū)、第二放置區(qū)和第三放置區(qū)，所述第一放置區(qū)、所述第二放置區(qū)和所述第三放置區(qū)分別用于放置上下游引物對試劑管、PCR反應(yīng)預(yù)混液試劑管和陰性質(zhì)控品試劑管。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用HRM篩查紅系轉(zhuǎn)錄因子EKLF基因突變的檢測試劑盒，其特征在于，包括9支所述上下游引物對試劑管，各所述上下游引物對試劑管中均裝有上下游引物對。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用HRM篩查紅系轉(zhuǎn)錄因子EKLF基因突變的檢測試劑盒，其特征在于，所述上下游引物對的濃度為10μM。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用HRM篩查紅系轉(zhuǎn)錄因子EKLF基因突變的檢測試劑盒，其特征在于，所述緩沖架的中部形成安裝腔，所述安裝腔內(nèi)設(shè)有制冷物。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用HRM篩查紅系轉(zhuǎn)錄因子EKLF基因突變的檢測試劑盒，其特征在于，所述第一放置區(qū)沿...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉頓，劉風(fēng)華，張曦倩，陳創(chuàng)奇，董云巧，
申請(專利權(quán))人：廣東省婦幼保健院，
類型：新型
國別省市：
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