本發明專利技術屬于生物技術領域，涉及一種結直腸癌輔助免疫治療靶基因NIBAN3檢測試劑盒及應用。本發明專利技術研究證實結直腸癌中NIBAN3表達顯著下降。NIBAN3表達水平與免疫微環境指標StromalScore，ImmuneScore和ESTIMATEScore均呈正相關，與多種免疫細胞浸潤正相關，且與免疫檢查基因表達正相關，并且設計了NIBAN3檢測試劑盒。試劑盒。試劑盒。
【技術實現步驟摘要】
一種結直腸癌輔助免疫治療靶基因NIBAN3檢測試劑盒及應用
[0001]本專利技術屬于生物
，具體地，涉及一種檢測NIBAN3表達水平的試劑在制備用于結直腸癌檢測和/或輔助免疫治療的制劑中的應用，以及一種結直腸癌輔助免疫治療靶基因NIBAN3檢測試劑盒及應用。
技術介紹
[0002]結直腸癌(Colorectal Carcinoma，CRC)是指發生于結腸或者是直腸的癌變，可以發生于結直腸的任何部位，但尤以直腸、乙狀結腸最為常見。結直腸癌是第三大最常見的癌癥，也是死亡率第二高的癌癥，據估計2018年全球共有180多萬例新發CRC病例和88萬例CRC相關死亡病例。在我國，CRC是最常見的消化道惡性腫瘤之一，發病率和死亡率在所有癌癥中分別位居第三位和第五位，且發病率仍在繼續增長，尤其是城區男性發病率增長速度最快。免疫治療是一種具有前景的結直腸癌治療新方式，但目前仍然存在治療響應率不高、副作用等問題，因此，開發新型輔助免疫治療新靶點對于臨床腫瘤免疫治療具有重要意義。
技術實現思路
[0003]本專利技術的目的是提供一種結直腸癌免疫治療新靶點NIBAN3，并由此提供一種檢測NIBAN3表達水平的試劑在制備用于結直腸癌檢測和/或輔助免疫治療的制劑中的應用，以及一種結直腸癌輔助免疫治療靶基因NIBAN3檢測試劑盒及應用。
[0004]本專利技術的第一方面提供一種檢測NIBAN3表達水平的試劑在制備用于結直腸癌檢測和/或輔助免疫治療的制劑中的應用。
[0005]進一步地，所述檢測NIBAN3表達水平包括檢測NIBAN3的mRNA表達水平和/或檢測NIBAN3的蛋白表達水平。
[0006]進一步地，所述檢測NIBAN3表達水平的方法包括：通過RT
?
qPCR方法檢測結直腸癌和癌旁組織中NIBAN3 mRNA的表達量；通過分子探針技術檢測結直腸癌和癌旁組織中NIBAN3 mRNA表達量；通過免疫組化或Western
?
Blot檢測結直腸癌和癌旁組織中NIBAN3蛋白表達量。
[0007]更具體地，所述檢測NIBAN3表達水平的試劑為NIBAN3基因DNA序列或mRNA序列的寡核酸探針、PCR引物，或者為靶向NIBAN3的抗體。
[0008]根據本專利技術，優選地，所述檢測NIBAN3表達水平的試劑為SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示核苷酸序列的實時熒光定量PCR特異性引物。
[0009]5’?
TGCTTGCTGCAGAGGATTGA
?3’
(SEQ ID NO：1)
[0010]5’?
GCTCAGCCTCAGTTTCCTCA
?3’
(SEQ ID NO：2)
[0011]本專利技術的第二方面提供一種結直腸癌輔助免疫治療靶基因NIBAN3檢測試劑盒，該試劑盒包括：檢測NIBAN3表達水平的試劑。
[0012]進一步地，所述檢測NIBAN3表達水平的試劑為靶向NIBAN3基因DNA序列或mRNA序列的寡核酸探針、PCR引物，或者為靶向NIBAN3的抗體。
[0013]具體地，所述檢測NIBAN3表達水平的試劑為具有SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示核苷酸序列的實時熒光定量PCR特異性引物。
[0014]根據本專利技術，所述試劑盒還可以含有其他常規的用于實時熒光定量的試劑，優選地，所述試劑盒還包括以下組分中的至少一種：Trizol、異丙醇、氯仿、無水乙醇、無RNA酶水、隨機引物、5
×
M
?
MLV緩沖液、dNTPs、RNA酶抑制劑、M
?
MLV逆轉錄酶、具有SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示核苷酸序列的ACTB實時熒光定量PCR特異性引物。
[0015]5’?
GGCACCCAGCACAATGAAGA
?3’
(SEQ ID NO：3)
[0016]5’?
ACTCCTGCTTGCTGATCCAC
?3’
(SEQ ID NO：4)
[0017]本專利技術第三方面提供上述試劑盒在制備用于結直腸癌檢測和/或輔助免疫治療的制劑中的應用。
[0018]NIBAN3是一種蛋白編碼基因，本專利技術研究證實結腸癌(Colon carcinoma，COAD)與直腸癌(Rectal Carcinoma，READ)中NIBAN3表達顯著下降。NIBAN3表達水平與免疫微環境指標StromalScore，ImmuneScore和ESTIMATEScore均呈正相關，與多種免疫細胞浸潤正相關，且與免疫檢查點基因表達正相關，由此說明，NIBAN3可以作為結直腸癌免疫治療新靶點。并且基于此設計了NIBAN3檢測試劑盒。
[0019]本專利技術的其它特征和優點將在隨后具體實施方式部分予以詳細說明。
附圖說明
[0020]通過結合附圖對本專利技術示例性實施方式進行更詳細的描述，本專利技術的上述以及其它目的、特征和優勢將變得更加明顯。
[0021]圖1示出了結直腸癌中靶基因NIBAN3的表達變化。(A)結直腸癌組織中NIBAN3表達顯著下調；(B)結腸癌組織中NIBAN3表達顯著下調；(C)直腸癌組織中NIBAN3表達顯著下調。
[0022]圖2示出了結直腸癌中NIBAN3表達與免疫細胞浸潤的相關性。(A)EPIC法檢測NIBAN3表達與免疫細胞浸潤顯著正相關；(B)Timer法檢測NIBAN3表達與免疫細胞浸潤顯著正相關；(C)MCPcounter法檢測NIBAN3表達與免疫細胞浸潤顯著正相關；(D)xCELL法檢測NIBAN3表達與免疫細胞浸潤顯著正相關。
[0023]圖3示出了結直腸癌中NIBAN3表達與免疫檢查點基因的相關性。NIBAN3表達與免疫檢查點基因顯著正相關。
[0024]圖4示出了結直腸癌中NIBAN3的表達變化。
具體實施方式
[0025]下面將更詳細地描述本專利技術的優選實施方式。雖然以下描述了本專利技術的優選實施方式，然而應該理解，可以以各種形式實現本專利技術而不應被這里闡述的實施方式所限制。
[0026]實施例中未注明具體條件者，皆按照常規條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規產品。
[0027]實施例1
[0028]本實施例用于說明結直腸癌中靶基因NIBAN3的表達顯著下調。
[0029]結直腸癌中NIBAN3表達分析：
[0030]1、數據下載與整理：
[0031]利用UCSC XENA網站(https://xenabrowser.net/datapages/)下載TCGA結直腸癌表達譜數據和臨床數據資料，NIBAN3表達譜數據經log2轉化后進行組間比較。
[0032]2、結直腸癌中NIBAN3的表達差異分析
[0033]利用R軟件包分析結直腸癌組織與正常組織間N本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
1.檢測NIBAN3表達水平的試劑在制備用于結直腸癌檢測和/或輔助免疫治療的制劑中的應用。2.根據權利要求1所述的應用，其中，所述檢測NIBAN3表達水平包括檢測NIBAN3的mRNA表達水平和/或檢測NIBAN3的蛋白表達水平。3.根據權利要求1所述的應用，其中，所述檢測NIBAN3表達水平的方法包括：通過RT
?
qPCR方法檢測結直腸癌和癌旁組織中NIBAN3 mRNA的表達量；通過分子探針技術檢測結直腸癌和癌旁組織中NIBAN3 mRNA表達量；通過免疫組化或Western
?
Blot檢測結直腸癌和癌旁組織中NIBAN3蛋白表達量。4.根據權利要求1所述的應用，其中，所述檢測NIBAN3表達水平的試劑為靶向NIBAN3基因DNA序列或mRNA序列的寡核酸探針、PCR引物，或者為靶向NIBAN3的抗體。5.根據權利要求4所述的應用，其中，所述檢測NIBAN3表達水平的試劑為SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示核苷酸序列的實時熒光定量PCR特異性引物。6.一種結直腸癌輔助免疫治...
【專利技術屬性】
技術研發人員：趙小芳，李夢琳，李春明，張虎，
申請(專利權)人：江蘇醫藥職業學院，
類型：發明
國別省市：
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