一種婦科熒光染色液及其制備方法和應用技術

本發明專利技術公開一種婦科熒光染色液及其制備方法和應用，該婦科熒光染色液包括吖啶橙、氯化鈉、EDTA

【技術實現步驟摘要】
一種婦科熒光染色液及其制備方法和應用


[0001]本專利技術屬于醫療化驗用品
，涉及一種婦科熒光染色液及其制備方法和應用。

技術介紹

[0002]陰道分泌物分析是婦科檢查的常規項目，對于女性生殖系統炎癥、腫瘤等疾病的診斷，具有重要臨床意義，是臨床診斷陰道疾病的重要依據。
[0003]陰道分泌物檢測主要對白細胞、上皮細胞、線索細胞、真菌、細菌、霉菌、滴蟲進行觀察，判斷屬于細菌性陰道病、念珠菌性陰道病、滴蟲性陰道病還是需氧菌性陰道病。傳統的檢測方法有濕片顯微鏡檢查和革蘭氏染色法。但是這兩種方法都具有較大的局限性，濕片顯微鏡檢測法對細菌形態較小的線索細胞常不能準確觀測細菌形態，觀測真菌芽生孢子效果不佳，滴蟲失活或死亡時形態與白細胞幾乎一致難以分辨；革蘭氏染色法的染色需要多個步驟、花費時間長，操作繁雜，結果判讀時背景干擾嚴重。
[0004]陰道分泌物熒光染色是一種新的方法，克服了傳統鹽水涂片法的諸多缺點，逐漸被實驗室廣泛使用。其優點主要體現在染色后成分清晰，不同成分呈現不同顏色易于識別區分；由婦產科醫生直接取標本涂于玻片上送檢，克服了鹽水涂片標本運輸過程中容易被打翻污染的問題，同時克服了濕片顯微鏡檢查中滴蟲在冬季溫度低時活動差不宜觀察，死亡后很難與膨大的白細胞區別的缺點，能準確區分乳酸桿菌及鏈球菌和雜菌，大大減少了漏檢率，提高了檢測結果的準確率；

技術實現思路

[0005]為了克服現有技術的不足，本專利技術的第一個目的在于提供一種婦科熒光染色液，該婦科熒光染色液可對細胞中的DNA和RNA同時染色而顯示不同顏色的熒光，能觀察到陰道分泌物中的自帶病原菌，原蟲，真菌及混合感染，提高病原菌檢出率；使得檢測不受滴蟲失活的影響，降低漏診率。
[0006]本專利技術的第二個目的是為了提供一種上述婦科熒光染色液的制備方法。
[0007]本專利技術的第三個目的是為了提供一種上述婦科熒光染色液的應用。
[0008]實現本專利技術的目的之一可以通過采取如下技術方案達到：
[0009]一種婦科熒光染色液，其特征在于，由以下組分組成：吖啶橙、氯化鈉、EDTA
?
Na、pH調節劑、水。
[0010]陰道分泌物熒光染色法是采用最經典的極靈敏的熒光染料，可對細胞中的DNA和RNA同時染色而顯示不同顏色的熒光。熒光燃料與雙鏈DNA的結合方式是嵌入雙鏈之間，而與單鏈DNA和RNA則由靜電吸引堆積在磷酸根上。在藍光激發下，細胞核發亮綠色熒光,核仁和胞質RNA發橘紅色熒光；熒光染料的陽離子也可以結合在蛋白質、多糖和膜上而發光，但細胞固定阻抑了這種結合，從而主要顯示DNA、RNA 二種核酸。
[0011]進一步的，婦科熒光染色液中吖啶橙的質量分數為0.01
?
0.2％，優選的，吖啶橙的
質量分數為0.06％。
[0012]進一步的，所述pH調節劑為磷酸氫二鈉和枸櫞酸，所述婦科熒光染色液的pH值為3
?
4.6，優選的，pH值為3.8。
[0013]進一步的，EDTA
?
Na在所述婦科熒光染色液中的濃度為 0.001mol/L，NaCl在所述婦科熒光染色液中的濃度為0.1454mol/L。
[0014]實現本專利技術的目的之二可以通過采取如下技術方案達到：
[0015]一種婦科熒光染色液，其特征在于，包括以下步驟：
[0016]步驟S1、取吖啶橙溶于水中得到吖啶橙原液；
[0017]步驟S2、將吖啶橙原液，用含有氯化鈉、EDTA
?
Na的磷酸氫二鈉
??
枸櫞酸緩沖溶液B稀釋至0.01
?
0.2％，即得到所述婦科熒光染色液。
[0018]進一步的，緩沖溶液的制備方法為：取NaCl和EDTA
?
Na溶于水中得到溶液A，將磷酸氫二鈉和枸櫞酸分別與溶液A配成磷酸氫二鈉緩沖液和枸櫞酸緩沖液，將磷酸氫二鈉緩沖液和枸櫞酸緩沖液混合，調節pH得到緩沖溶液B；
[0019]進一步的，磷酸氫二鈉緩沖液的濃度為0.2mol/L；枸櫞酸緩沖液的濃度為0.1mol/L。
[0020]進一步的，步驟S1中，吖啶橙原液的濃度為1mg/ml。
[0021]實現本專利技術的目的之三可以通過采取如下技術方案達到：
[0022]一種上述婦科熒光染色液的應用，取所述婦科熒光染色液滴加在載玻片上涂有的標本上，加蓋玻片，熒光顯微鏡下觀察；
[0023]進一步的，在染色之前需要對標本進行預處理，將所述標本涂在載玻片上，并經80
?
90℃加熱烘干1
?
3min至標本固定。
[0024]經過本專利技術婦科熒光染色液進行染色的標本，在熒光顯微鏡下觀察，上皮細胞胞漿呈綠色，胞核呈亮黃色；線索細胞為上皮細胞表面覆蓋黃色加德納菌；白細胞核呈亮綠色；細菌長桿菌呈紅色；霉菌孢子及菌絲呈紅色，滴蟲呈紅色胞核呈三點狀；真菌呈大小不等的圓或橢圓形紅色顆粒，因此可以根據形狀和發光顏色判斷區分病原菌的種類，快速，準確區分BV細菌性陰道病、TV陰道毛滴蟲、VVC，避免漏檢。
[0025]相比現有技術，本專利技術的有益效果在于：
[0026]1、本專利技術一種婦科熒光染色液，其中的成份可以和不同的細胞物質進行結合從而實現染色，從而在激發光的作用下，顯示出不同顏色的熒光，染色后成分清晰，不同成分呈現不同顏色易于識別區分。
[0027]2、本專利技術的一種婦科熒光染色液的制備方法，方法簡單，可以隨時配置使用，也可以配置后儲存使用。
[0028]3、該婦科熒光染色液的應用，對標本細胞固定阻抑了熒光燃料和蛋白質、多糖和膜上而發光，使得主要顯示DNA、RNA二種核酸。從而使得發光明顯。使用方法簡單，滴加婦科熒光染色液后即可以通過熒光顯微鏡進行觀察檢測，克服了傳統鹽水涂片法的缺點，提高了檢出率。
附圖說明
[0029]圖1為經實施例1的婦科熒光染色液染色后上皮細胞、細菌長桿菌和真菌熒光顯微
鏡圖；
[0030]圖2為經實施例1的婦科熒光染色液染色后線索細胞和白細胞熒光顯微鏡圖；
[0031]圖3為經實施例1的婦科熒光染色液染色后白細胞熒光顯微鏡圖；
[0032]圖4為經實施例1的婦科熒光染色液染色后線索細胞、白細胞、真菌熒光顯微鏡圖；
[0033]圖5為經實施例1的婦科熒光染色液染色后真菌熒光顯微鏡圖。
具體實施方式
[0034]下面，結合附圖以及具體實施方式，對本專利技術做進一步描述：
[0035]陰道分泌物熒光染色法中染色后能在熒光顯微鏡下客觀清晰觀察到不同顏色的發光，能觀察到陰道分泌物中的自帶病原菌，原蟲，真菌及混合感染，提高了病原菌，特別是加德納菌、其它雜菌及混合感染的檢出率。并可以對念珠菌進行分型，對陰道假絲酵母菌感染 (VVC)的用藥具有指導意義。操作簡單；測定快速，染色速度30秒；準確區分BV細菌性陰道病、TV陰道毛滴蟲、VVC；臨床符合率本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種婦科熒光染色液，其特征在于,包括以下成分：吖啶橙、氯化鈉、EDTA
?
Na、pH調節劑、水。2.根據權利要求1所述的一種婦科熒光染色液，其特征在于，所述婦科熒光染色液中吖啶橙的質量分數為0.01
?
0.2％。3.根據權利要求1所述的一種婦科熒光染色液，其特征在于，所述pH調節劑為磷酸氫二鈉和枸櫞酸，所述婦科熒光染色液的pH值為3
?
4.6。4.根據權利要求1所述的一種婦科熒光染色液，其特征在于，所述EDTA
?
Na在所述婦科熒光染色液中的濃度為0.001mol/L，所述NaCl在所述婦科熒光染色液中的濃度為0.1454mol/L。5.一種權利要求1
?
4任一項所述的婦科熒光染色液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：步驟S1、將吖啶橙溶于水中得到吖啶橙原液；步驟S2、將吖啶橙原液，用含有氯化鈉、EDTA
?
Na的磷酸氫二鈉
?
枸櫞酸緩沖溶液稀釋至質量分數為0.01
?
0.2％，即得到所述婦科熒光染色液。6.根據權利要求5所述的婦科熒光染色液...

【專利技術屬性】
技術研發人員：沈一珊，沈俊，劉廣華，周海，
申請(專利權)人：杭州昕龍醫療科技有限公司，
類型：發明
國別省市：