寡核苷酸綴合物組合物和使用方法技術

本公開涉及包含至少一個GalNAc單體的GalNAc部分。本公開還涉及包含GalNAc部分和寡核苷酸例如saRNA或siRNA的GalNAc

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】寡核苷酸綴合物組合物和使用方法
[0001]相關申請的交叉引用
[0002]本申請要求2019年8月19日提交的美國臨時申請第62/888,748號和2020年8月11日提交的美國臨時申請第63/064,114號的優先權，每一個的內容均通過引用整體并入本文。
[0003]序列列表的引用
[0004]本申請書與電子格式的序列表一起提交。提交的序列表文件名為2058
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1026USPCT_SL.txt，創建于2020年8月17日，大小為44351字節。序列表的電子格式的信息的內容通過引用整體并入本文。


[0005]本公開涉及包含至少一個GalNAc單體的GalNAc部分(GalNAc moieties)。本公開還涉及包含GalNAc部分和寡核苷酸例如小激活RNA(saRNAs)或小抑制RNA(siRNAs)的GalNAc寡核苷酸綴合物。
[0006]專利技術背景
[0007]CCAAT/增強子結合蛋白α(C/EBPα、C/EBPα、C/EBPA或CEBPA)是從人類到嚙齒類動物保守的亮氨酸拉鏈蛋白。這種核轉錄因子富含于肝細胞、骨髓單核細胞、脂肪細胞以及其他類型的乳腺上皮細胞[LekstRom
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Himes等人,J.Bio.Chem,vol.273,28545
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28548(1998)]。它由N末端部分中的兩個反式激活結構域、介導與其他C/EBP家族成員的二聚化的亮氨酸拉鏈區和C末端部分中的DNA結合結構域組成。C/EBP轉錄因子家族的結合位點存在于許多基因的啟動子區域，這些基因參與維持正常肝細胞功能和對損傷的反應。C/EBPα對參與免疫和炎癥反應、發育、細胞增殖、抗細胞凋亡和幾種代謝通路的幾種肝特異性基因的轉錄具有多效性作用[DaRlington等人,CuRRent Opinion of Genetic Development,vol.5(5),565
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570(1995)]。它對于維持肝細胞的分化狀態至關重要。它激活白蛋白轉錄并協調編碼參與尿素生產的多種鳥氨酸循環酶的基因表達，因此在正常肝功能中發揮重要作用。
[0008]出于治療目的，需要用saRNA靶向調節CEBPA。
[0009]附圖簡要說明
[0010]上述和其他目的、特征和優點將從以下對附圖中所例示的本專利技術特定實施方案的描述中變得顯而易見，附圖中類似的指示字符在不同視圖中指代相同的部分。附圖不一定按比例繪制，重點在于說明本專利技術的各個實施方案的原理。
[0011]圖1顯示在500nM時原代大鼠肝細胞中被動遞送saRNA后的CEBPA mRNA水平。
[0012]圖2顯示在500nM時原代大鼠肝細胞中被動遞送saRNA后的白蛋白mRNA水平。
[0013]圖3顯示在1μM時原代大鼠肝細胞中被動遞送saRNA后的CEBPA mRNA水平。
[0014]圖4顯示在1μM時原代大鼠肝細胞中被動遞送saRNA后的白蛋白mRNA水平。
[0015]圖5顯示正常小鼠在第1天和第3天以40mg/Kg注射并在第5天處死后的CEBPAmRNA的水平。CEBPA相對于PBS歸一化，B2M作為管家基因。從冷凍肝樣本中提取RNA，用qPCR測量
mRNA水平。
[0016]圖6顯示正常小鼠在第1天和第3天以40mg/Kg注射并在第5天處死后的CEBPAmRNA的水平。CEBPA相對于PBS歸一化，B2M作為管家基因。從冷凍肝樣本中提取RNA，用qPCR測量mRNA水平。
[0017]圖7顯示正常小鼠在第1天和第3天以40mg/Kg注射并在第5天處死后的白蛋白mRNA的水平。白蛋白相對于PBS歸一化，B2M作為管家基因。從冷凍肝樣本中提取RNA，用qPCR測量mRNA水平。
[0018]圖8顯示正常小鼠在第1天和第3天皮下注射GalNAc
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saRNA綴合物30mg/kg并在第5天處死后的肝臟中的CEBPAmRNA的水平。
[0019]圖9顯示CEBPa
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saRNA
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GalNAc綴合物L80(XD
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14369K1綴合到GalNac簇G7)和L81(XD
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14369K1綴合到GalNac簇G8)的體外劑量反應。
[0020]圖10顯示轉染C5
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siRNA
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GalNAc綴合物后的C5 mRNA水平。
[0021]專利技術概述
[0022]本專利技術提供了用于設計、制備、制造、配制和/或使用短(或小)激活RNA(saRNA)(無論是否修飾)的組合物、方法和試劑盒，該saRNA調節靶基因的表達和/或功能以用于治療目的，包括診斷和預后。術語“修飾的”或(視情況而定)“修飾”是指對核苷酸的任何一個或多個組分(糖、堿基或主鏈)的結構修飾和/或化學修飾。在堿基的情況下，可以修飾任何標準核酸堿基：A、G、U或C核糖核酸堿基。本專利技術的saRNAs中的核苷酸可包含非標準核苷酸，例如非天然存在的核苷酸或化學合成的核苷酸或脫氧核苷酸。
[0023]本專利技術的一個方面提供了一種合成的分離的小激活RNA(saRNA)，其上調靶基因的表達，其中saRNA包含對包含saRNA的多核苷酸的堿基、糖或主鏈中的至少一者的至少一個修飾。
[0024]本專利技術的另一方面提供了一種N
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乙酰半乳糖胺(GalNAc)單體，其包含選自以下的結構：
[0025][0026](M1
’
)，
[0027]其中R1、R2和R3可以相同或不同，并且其中R1、R2和R3獨立地選自烷基、芳基和烯基，
[0028]其中R4為合適的保護基團或C1?6直鏈或支鏈烷基，
[0029]其中R5和R6各自獨立地為C1?6直鏈或支鏈烷基，并且
[0030]其中R7為合適的保護基團；
[0031][0032](M2
’
)，
[0033]其中R1、R2和R3可以相同或不同，并且其中R1、R2和R3獨立地選自烷基、芳基和烯基；
[0034]其中R4為保護基團或C1?6直鏈或支鏈烷基，
[0035]其中R5和R6各自獨立地為C1?6直鏈或支鏈烷基；并且
[0036]其中R7為合適的保護基團；
[0037][0038](M4
’
，其是固體支持物上的單體)，
[0039]其中R1、R2和R3可以相同或不同，并且其中R1、R2和R3獨立地選自烷基、芳基和烯基，
[0040]其中R7為合適的保護基團；并且
[0041]其中連接體1為可切割的連接體(cleavable linker)；
[0042]和
[0043][0044](M5
’
，其是固體支持物上的單體)，
[0045]其中R1、R2和R3可以相同或不同，并且其中R1、本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】1.N
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乙酰半乳糖胺(GalNAc)單體，其包含選自以下的結構：其中R1、R2和R3可以相同或不同，并且其中R1、R2和R3獨立地選自烷基、芳基和烯基，其中R4為合適的保護基團或C1?6直鏈或支鏈烷基，其中R5和R6各自獨立地為C1?6直鏈或支鏈烷基，并且其中R7為合適的保護基團；其中R1、R2和R3可以相同或不同，并且其中R1、R2和R3獨立地選自烷基、芳基和烯基；其中R4為保護基團或C1?6直鏈或支鏈烷基，其中R5和R6各自獨立地為C1?6直鏈或支鏈烷基；并且其中R7為合適的保護基團；(M4
’
，其是固體支持物上的單體)，其中R1、R2和R3可以相同或不同，并且其中R1、R2和R3獨立地選自烷基、芳基和烯基，其中R7為合適的保護基團；并且其中連接體1為可切割的連接體；和
(M5
’
，其是固體支持物上的單體)，其中R1、R2和R3可以相同或不同，并且其中R1、R2和R3獨立地選自烷基、芳基和烯基，其中R7為合適的保護基團；并且其中連接體1為可切割的連接體。2.GalNAc部分，其包含至少一個GalNAc單體，其中所述GalNAc單體選自：其中R8為
?
H或C1?6直鏈或支鏈烷基；直鏈或支鏈烷基；其中R8為
?
H或C1?6直鏈或支鏈烷基，且其中X為O或S；其中X為O或S；
以及其中所述GalNAc部分不包含多于一個M4、M5或M6單體，且其中所述GalNAc部分不是由僅一個M3單體、僅一個M6單體或一個M6單體和兩個M3單體組成的GalNAc部分。3.根據權利要求2所述的GalNAc部分，其中所述GalNAc部分包含間隔體，所述間隔體包含HEG、C12、ab、TEG或C3的結構。4.根據權利要求2所述的GalNAc部分，其中所述GalNAc部分包含兩個或三個GalNAc單體。5.根據權利要求2所述的GalNAc部分，其中所述GalNAc部分包含三個M1、M2或M3單體。6.根據權利要求5所述的GalNAc部分，其中所述GalNAc部分包含三個M1單體。7.根據權利要求2所述的GalNAc部分，其中所述GalNAc簇包含以下結構：
8.GalNAc部分，其通過包括以下步驟的方法制備：1)提供至少一個GalNAc單體，其選自權利要求1中的任一單體、
(M6
’
，其為固體支持物上的單體)；以及2)從步驟1)的GalNAc單體合成GalNAc部分；任選地添加至少一個間隔體和任選地去除所述保護基團。9.一種綴合物，其包含寡核苷酸和權利要求2
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8中任一項所述的GalNAc部分，其中所述寡核苷酸調節靶基因的表達，并且其中所述寡核苷酸和所述GalNAc部分通過鍵或可切割的連接體連接。10.根據權利要求9所述的綴合物，其中所述寡核苷酸和所述GalNAc部分通過可切割的連接體連接。11.根據權利要求10所述的綴合物，其中所述連接體為C6ssC6或dT。12.根據權利要求9所述的綴合物，其中所述寡核苷酸和所述GalNAc部分通過鍵連接，其中所述鍵為磷酸二酯鍵或硫代磷酸酯鍵。13.根據權利要求9所述的綴合物，其中所述綴合物包括CJ1、CJ2、CJ3、CJ4、CJ5、CJ6、CJ7、CJ8、CJ9、CJ10、CJ11、CJ12、CJ13、CJ14、CJ15、CJ16、CJ17、CJ18、CJ19、CJ20、CJ21、CJ22、CJ23、CJ24或CJ25的結構。14.根據權利要求9
?
13中任一項所述的綴合物，其中所述寡核苷酸為合成的分離的小激活RNA(saRNA)。15.根據權利要求14所述的綴合物，其中所述靶基因為CEBPA。16.根據權利要求14所述的綴合物，其中saRNA為雙鏈saRNA。17.根據權利要求16所述的綴合物，其中所述GalNAc簇連接至所述有義鏈的5
’
或3
’
末端。18.根據權利要求16所述的綴合物，其中所述雙鏈saRNA選自XD
?
03302、S1(XD
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06409)、S2(XD
?
06410)、S3(XD
?
06411)、S4(XD
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06412)、S5(XD

【專利技術屬性】
技術研發人員：A，
申請(專利權)人：LGC基因組學有限公司，
類型：發明
國別省市：