一種膠原三肽及其酶法制備方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種膠原三肽及其酶法制備方法，該酶法制備方法包括：以羅非魚魚皮為原料，通過添加內(nèi)切蛋白酶控制酶解，滅酶，再添加解淀粉芽孢桿菌蛋白酶進(jìn)一步控制酶解處理，滅酶，冷凍干燥制備得到。本發(fā)明專利技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)在于：(1)采用本發(fā)明專利技術(shù)酶法制備方法制備出的羅非魚魚皮膠原三肽不具有明顯苦味；(2)本發(fā)明專利技術(shù)原料來源于動物蛋白，價格便宜；(3)本發(fā)明專利技術(shù)工藝簡單易于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，成本低。成本低。成本低。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種膠原三肽及其酶法制備方法


[0001]本專利技術(shù)屬于魚類加工副產(chǎn)物的深加工領(lǐng)域，具體涉及一種膠原三肽及其酶法制備方法。
技術(shù)背景
[0002]魚皮膠原蛋白屬于Ⅰ型膠原蛋白，Ⅰ型膠原蛋白是由一條α1鏈(G9M6I5)和2條α2鏈 (G9M6I6)三螺旋組成。膠原蛋白分子長約300nm、直徑約1.5nm，由3條肽鏈以平行、右旋的形式纏繞而成，組成膠原蛋白的a肽鏈自身為左手螺旋結(jié)構(gòu)。每條肽鏈的序列特征表現(xiàn)為每隔兩個其它氨基酸殘基即有一個甘氨酸，每條肽鏈的序列特征為Gly
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X
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Y的重復(fù)序列， X主要為脯氨酸(Pro)，Y一般為羥脯氨酸(Hyp)和丙氨酸(Ala)。
[0003]水解制備多肽是水產(chǎn)品高價值全面再利用的一個重要途徑，膠原蛋白的提取方法有酸堿提取法、酶提取法和熱水提取法，其生產(chǎn)出的多肽具有美容，止血，抑菌以及利于人體吸收等功效。酶解法制備多肽具有專一性、反應(yīng)時間短，反應(yīng)條件溫和以及操作簡單的優(yōu)點(diǎn)，適用于大規(guī)模酶解生產(chǎn)制備小分子膠原蛋白肽。
[0004]膠原蛋白通過蛋白酶水解可得到多種膠原蛋白肽。周先艷研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)堿性蛋白酶酶解鱈魚皮膠原蛋白，其酶解液透過Caco
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2細(xì)胞的寡肽的一級結(jié)構(gòu)中有7條含有GPA序列，5條含有GPS序列，5條含有GPR序列(周先艷.鱈魚皮膠原蛋白水解液體外模擬消化研究及抗氧化肽的分離純化[D].昆明理工大學(xué),2016)；同樣艾麗奇用堿性蛋白酶處理后也得到GPA肽段，并驗(yàn)證了GPA具有潛在抗光老化的活性(艾麗奇.鱈魚皮膠原蛋白肽的抗皮膚光老化功效及其作用機(jī)制研究[D].華南理工大學(xué))；Wang從豬、牛、羅非魚、母雞表皮經(jīng)木瓜蛋白酶酶解制備的膠原蛋白水解物中鑒別出了多個肽段富含Gly
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Pro
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Hyp序列，并且可減輕經(jīng)UVA誘導(dǎo)的人體真皮成纖維細(xì)胞損傷(Xiangfeng Wang,Hui Hong,Jianping Wu.Hen collagenhydrolysate alleviates UVA
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induced damage in human dermal fibroblasts[J].Journal of FunctionalFoods,63)。
[0005]近年來，膠原三肽如GPH、GHK、GHA被報道具有多種生理活性，可改善皮膚彈性、預(yù)防皮膚光老化、提高皮膚透明質(zhì)酸含量等多種活性。Kim研究發(fā)現(xiàn)70μg/mL GPH作用人體真皮成纖維細(xì)胞可以有效促進(jìn)透明質(zhì)酸，減少水分流失以及促進(jìn)I型膠原蛋白的合成(KIMA H,KIM Y S,ZHE P,et al.Cutaneous hydration effect of collagen hydrolysate containingcollagen tripeptides)；Sontakk等研究發(fā)現(xiàn)GPH能跨腸單層細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入血漿并在人體內(nèi)穩(wěn)定運(yùn)輸，有利于機(jī)體吸收(SONTAKKE S B,JUNG J H,PIAO Z,et al.Orally AvailableCollagen Tripeptide:Enzymatic Stability,Intestinal Permeability,and Absorption of Gly
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Pro
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Hypand Pro
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Hyp[J].Journal ofAgricultural&Food Chemistry)；AH Kim用含34mg/kg GPH的膠原水解物處理經(jīng)丙酮誘導(dǎo)的皮膚干燥的小鼠，發(fā)現(xiàn)GPH可以有效的維持膠原結(jié)構(gòu)形態(tài)有效預(yù)防皮膚干燥；滿帥報道200μg/mL的GPH可有效防治大鼠地塞米松性骨質(zhì)疏松；Zhao等研究發(fā)現(xiàn)200mg/kg的GPA可通過降低氧化應(yīng)激，對腸道損傷具有保護(hù)作用(滿帥.狹鱈魚皮膠原蛋白肽防治地塞米松致大
鼠骨質(zhì)疏松作用研究[D].青島大學(xué).)；艾麗奇報道GPA有潛在的抗光老化作用，100μM GPA處理光損傷成纖維細(xì)胞，細(xì)胞存活率為75.34％，此外GPA還可抑制膠原酶的產(chǎn)生、抑制Ca2+離子內(nèi)流和改善線粒體膜電位流失(艾麗奇.鱈魚皮膠原蛋白肽的抗皮膚光老化功效及其作用機(jī)制研究[D].華南理工大學(xué).)。
[0006]人體腸道存在肽轉(zhuǎn)運(yùn)體Pep T 1,能特異性轉(zhuǎn)運(yùn)二肽和三肽，膠原三肽可直接被腸道吸收或者經(jīng)不完全消化后再被人體吸收。AitoInoue的研究表明Gly
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Pro
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Hyp雖然不能完整地穿透小腸上皮細(xì)胞,但是通常被氨肽酶N水解為甘氨酸和ProHyp運(yùn)輸進(jìn)入體內(nèi)(Aito Inoue M, Lackeyram D,Fan M Z,et al.Transport of a tripeptide,Gly
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Pro
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Hyp,across the porcine intestinalbrushborder membrane brush
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border membrane.)；在大鼠離體小腸翻轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)中,膠原三肽的小腸吸收率明顯高于大分子的膠原肽和游離氨基酸(Yamamoto S,Deguchi K,Onuma M,et al. Absorption and urinary excretion ofpeptides after collagen tripeptide ingestion in humans)，這些研究都表明膠原三肽相對于大分子的膠原或膠原肽來說,吸收更容易或更快。
[0007]膠原三肽的應(yīng)用廣泛，遍布美容、關(guān)節(jié)和骨骼保健、運(yùn)動保健和外用品等多個領(lǐng)域。比如可以作為營養(yǎng)補(bǔ)充劑，其氨基酸組成與膠原基本一致，含有7種必須氨基酸和幾乎全部非必需氨基酸。根據(jù)膠原三肽對皮膚生長具有重要促進(jìn)作用的特性，可以開發(fā)成輔助具有美容功能性的食品，比如方航以膠原三肽、蘋果汁等食品原料復(fù)配制備膠原三肽美肌飲品(方航，朱學(xué)良，劉翔，等.膠原三肽美肌飲品的制備工藝研究)；在減少中年婦女的皮膚水分流失，幫助人們適應(yīng)氣候變化方面也有顯著效果(Tak Young Jin，Shin Dae Keun，etal.Effect ofCollagen Tripeptide andAdjusting for Climate Change on Skin Hydration in Middle
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Aged Women: ARandomized,Double
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Blind,Placebo
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Controlled Trial)；中國專利公開了一種含有膠原三肽的美白抗衰老護(hù)膚霜，當(dāng)膠原三肽被皮膚吸收后，填充在皮膚真皮之間，增加皮膚緊密度，產(chǎn)生皮膚張力，縮小毛孔，使皮膚緊繃而富有彈性，能更有效的將皮膚細(xì)胞撐起，結(jié)合保濕和抑制皺紋的作用，共同達(dá)到舒展粗紋，淡化細(xì)紋的功效。利用膠原三肽能夠促進(jìn)骨和軟骨生長修復(fù)、抑制動脈粥樣硬化的特性(Tomosugi Naohisa,Y本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】

【技術(shù)特征摘要】
1.一種膠原三肽的酶法制備方法，其特征在于，所述酶法制備方法是以羅非魚魚皮為原料，通過添加內(nèi)切蛋白酶來控制酶解，滅酶，再添加解淀粉芽孢桿菌蛋白酶進(jìn)一步控制酶解處理，滅酶，濃縮，冷凍干燥制備得到。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種膠原三肽的酶法制備方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)將羅非魚魚皮與水混合，升溫至100℃
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110℃保持30min
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40min，待魚皮膠原蛋白解聚后，添加內(nèi)切蛋白酶水解至水解度為7.5％
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9.5％，升溫至80
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90℃保持20
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40min滅酶，得羅非魚魚皮膠原蛋白內(nèi)切蛋白酶水解液；(2)將羅非魚魚皮膠原蛋白內(nèi)切蛋白酶水解液降溫至40
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60℃，添加羅非魚魚皮膠原蛋白內(nèi)切蛋白酶水解液質(zhì)量1％
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5％的解淀粉芽孢桿菌蛋白酶，酶解9
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15h；(3)在解淀粉芽孢桿菌蛋白酶處理后的羅非魚魚皮膠原蛋白內(nèi)切蛋白酶水解液水解至水解度達(dá)到14.21％
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18.80％后，升溫至80
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90℃，保持20
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40min滅酶；(4)離心祛除殘?jiān)瑵饪s，冷凍干燥，得羅非魚魚皮膠原三肽。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種膠原三肽的酶法制備方法，其特征在于，步驟(1)所述內(nèi)切蛋白酶為堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶中任意一種。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種膠原三肽的酶法制備方法，其特征在于，步驟(1)所述內(nèi)切蛋白酶...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：崔春，鄧秀杰，汪雪蓮，
申請(專利權(quán))人：華南理工大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：