一種常山酮制劑的高效液相色譜檢測方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種常山酮制劑的高效液相色譜檢測方法，采用稀釋劑對常山酮制劑進行稀釋獲得待測試品；將待測試品注入色譜柱中，并采用流動相進行洗脫并檢測；所述稀釋劑為緩沖鹽

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
一種常山酮制劑的高效液相色譜檢測方法


[0001]本專利技術(shù)涉及一種常山酮制劑的高效液相色譜檢測方法，屬于常山酮制劑檢測


技術(shù)介紹

[0002]常山酮(結(jié)構(gòu)式見圖1)是從中藥常山中分離出來的一種常山堿的衍生物。是一種競爭性的脯氨酰
?
tRNA合成酶(prolyl
?
tRNA synthetase)抑制劑，K
i
為18.3nM。常山酮是I型膠原(type
?
I collagen)合成的特異性抑制劑，并通過抑制TGF
?
β活性可減輕骨關(guān)節(jié)炎。常山酮也是一種有效的肺血管擴張劑，可激活Kv通道并阻斷電壓門控、受體操作和存儲操作的Ca
2+
通道。常山酮具有抗瘧疾、抗炎、抗癌、抗纖維化作用。
[0003]常山酮順式異構(gòu)體(結(jié)構(gòu)式見圖2)、雜質(zhì)A(結(jié)構(gòu)式見圖3)和防腐劑(溶液劑需添加)等，在常山酮制劑中是必然存在的。
[0004]從目前公開的技術(shù)文獻(xiàn)來看，對常山酮的分析檢測方法主要是針對常山酮該化合物本身進行定量或定性分析。如GB29693
?
2013《動物性食品中常山酮殘留量的測定》、美國食品安全檢驗局《常山酮》中的分析方法均是測定常山酮殘留量的，針對常山酮本身的含量測定方法。但是對制備常山酮制劑過程中產(chǎn)生的其他有關(guān)結(jié)構(gòu)化合物的分離分析，如順式異構(gòu)體、雜質(zhì)A、其他有關(guān)物質(zhì)和防腐劑(苯甲酸)的分析研究報道還比較少。僅在A Scalable Total Synthesis of Halofuginone(Hua Xu；Wenhao Yin,；Haoqiang Liang；Yanbo Nan；Fayang Qiu；Yehua Jin,Org.Process Res.Dev.2019,23,990
?
997)中，報道了采用等度洗脫的方法測定順式異構(gòu)體，但并未涉及雜質(zhì)A、苯甲酸或其他雜質(zhì)。為了加強對產(chǎn)品質(zhì)量的控制，需要對常山酮制劑(常山酮乳酸鹽溶液、氫溴酸常山酮預(yù)混劑等)中有關(guān)物質(zhì)(順式異構(gòu)體、雜質(zhì)A等)及其防腐劑(苯甲酸)進行檢測。由于檢測苯甲酸一般會用pH2左右的流動相進行等度洗脫，使苯甲酸呈分子態(tài)，有更強的保留；而檢測常山酮、順式異構(gòu)體和雜質(zhì)A會使用pH5以上的流動相進行等度洗脫或梯度洗脫，使化合物呈分子態(tài)和離子態(tài)的混合物，增強堿性化合物的保留。特別是要分離順式異構(gòu)體和雜質(zhì)A這種極性相似的化合物，使用較長分離時間的低有機相等度分離是常用手段。綜上所述，由于各物質(zhì)的檢測方法的差異，也必將導(dǎo)致檢測步驟繁復(fù)，不利于工時和成本的節(jié)省。

技術(shù)實現(xiàn)思路

[0005]本專利技術(shù)是提供一種常山酮制劑的高效液相色譜檢測方法，可實現(xiàn)同時對常山酮制劑中的常山酮、順式異構(gòu)體、雜質(zhì)A和防腐劑(苯甲酸)進行高效檢測。
[0006]為達(dá)到上述目的，本專利技術(shù)所采用的技術(shù)方案是：一種常山酮制劑的高效液相色譜檢測方法，采用稀釋劑對常山酮制劑進行稀釋獲得待測試品；將待測試品注入色譜柱中，并采用流動相進行洗脫并檢測；所述稀釋劑為緩沖鹽
?
乙腈，緩沖鹽
?
乙腈比例為100：0～50：50；所述色譜柱的固定相為十八烷基硅烷鍵合硅膠或雜化顆粒；所述色譜柱溫度為25℃～45℃；所述流動相的pH值范圍4.4～4.8。
[0007]進一步地，所述常山酮制劑包括常山酮乳酸鹽溶液和氫溴酸常山酮預(yù)混劑。
[0008]進一步地，所述緩沖鹽為磷酸鹽、醋酸鹽、枸櫞酸鹽或三氟乙酸鹽。
[0009]進一步地，所述磷酸鹽包括磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、磷酸二氫銨和磷酸氫二銨；所述醋酸鹽包括醋酸鈉、醋酸鉀和醋酸銨；所述枸櫞酸鹽包括枸櫞酸鈉、枸櫞酸鉀和枸櫞酸銨。
[0010]進一步地，所述色譜柱為ZORBAX XDB
?
C18柱(4.6
×
150mm，5μm)、ZORBAX Extend
?
C18柱(4.6
×
150mm，5μm)、Inertsustain C18柱(4.6
×
150mm，5μm)和RP 18柱(4.6
×
150mm，5μm)。色譜長度和填料的性質(zhì)會影響液相色譜的結(jié)果。色譜柱越長，組分之間分辯效果越好，但色譜柱越長壓降越大，而輸入的壓力是有限的。色譜柱過長會增大進出口壓力比，相反會降低分離度，且增加分離過程時間；色譜柱填料顆粒大小也是主要因素，粒子越細(xì)，由于表面積增加，分辯效果越好，但是顆粒細(xì)會增大柱壓降，也會起反作用。因此，本專利技術(shù)對色譜柱進行了優(yōu)選。
[0011]進一步地，所述緩沖鹽
?
乙腈比例為60:40；所述色譜柱溫度為35℃；所述流動相的pH值為4.5。對于液相色譜來說，柱溫升高可加快分離過程，可適當(dāng)改善順式異構(gòu)體與雜質(zhì)A的分離度，但因樣品保留時間不穩(wěn)將增加檢測工作的麻煩，降低色譜柱壽命，分辨率也可能下降；相反，當(dāng)柱溫低時，分辨率提高，但分離過程時間會加長，因為在溫度低的情況下，流動相黏度增加會延長檢測時間。
[0012]進一步地，方法中采用的檢測波長為238nm～242nm。
[0013]進一步地，進行所述洗脫并檢測后，采用外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法或面積歸一法對常山酮、順式異構(gòu)體、苯甲酸和雜質(zhì)A進行計算。
[0014]進一步地，所述流動相由緩沖溶液流動相A和流動相B組成，所述緩沖溶液流動相A為醋酸鹽溶液，流動相B為有機溶劑乙腈。
[0015]進一步地，洗脫的方式為梯度洗脫，所述緩沖溶液流動相A的濃度為0.010mol/L～0.045mol/L；流動相流速為0.8～1.2ml/min；所述梯度洗脫程序為：
[0016][0017]本專利技術(shù)方法既可以用于常山酮制劑中的常山酮的純度和含量以及順式異構(gòu)體的含量測定，也可用于常山酮制劑中的順式異構(gòu)體、雜質(zhì)A、防腐劑(苯甲酸)和其他雜質(zhì)的分離檢測和含量測定。在整個制劑檢測過程中，直接將制劑樣品溶解稀釋并(或)過濾即可進行檢測，無需繁瑣的前處理步驟，且無需替換流動相，節(jié)省了操作工序；同時，本專利技術(shù)檢測方
法可以有效將常山酮、有關(guān)物質(zhì)(順式異構(gòu)體、雜質(zhì)A等)以及防腐劑(苯甲酸)進行分離，且各色譜峰分離度、峰形等均良好，檢測結(jié)果互不干擾。
[0018]本專利技術(shù)技術(shù)效果：
[0019]1、該方法可以分離并檢測常山酮制劑(常山酮乳酸鹽溶液、氫溴酸常山酮預(yù)混劑等)中常山酮、有關(guān)物質(zhì)(順式異構(gòu)體、雜質(zhì)A等)以及防腐劑(苯甲酸)，填補了現(xiàn)有技術(shù)中對常山酮制劑中的常山酮、有關(guān)物質(zhì)(順式異構(gòu)體、雜質(zhì)A等)以及防腐劑(苯甲酸)同時進行分離分析的技術(shù)空白；克服了酸堿性化合物同時分析的色譜保留問題；解決了順式異構(gòu)體和雜質(zhì)A難以分離的難題。
[0020]在對常山酮制劑中的常山酮、順式異構(gòu)體、雜質(zhì)A和防腐劑(苯甲酸)的分離檢測中，峰型、各峰的分離度是本專利技術(shù)所要考慮的主要問題，需要對影響峰型、各峰的分離度的各個因素進行全面整體的考慮，才可對常山酮制劑中本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】

【技術(shù)特征摘要】
1.一種常山酮制劑的高效液相色譜檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：采用稀釋劑對常山酮制劑進行稀釋獲得待測試品；將待測試品注入色譜柱中，并采用流動相進行洗脫并檢測；所述稀釋劑為緩沖鹽
?
乙腈，緩沖鹽
?
乙腈比例為100：0～50：50；所述色譜柱的固定相為十八烷基硅烷鍵合硅膠或雜化顆粒；所述流動相的pH值范圍4.4～4.8。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述常山酮制劑的高效液相色譜檢測方法，其特征在于：所述常山酮制劑包括常山酮乳酸鹽溶液和氫溴酸常山酮預(yù)混劑。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述常山酮制劑的高效液相色譜檢測方法，其特征在于：所述緩沖鹽為磷酸鹽、醋酸鹽、枸櫞酸鹽或三氟乙酸鹽中的一種。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述常山酮制劑的高效液相色譜檢測方法，其特征在于：所述磷酸鹽包括磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、磷酸二氫銨和磷酸氫二銨；所述醋酸鹽包括醋酸鈉、醋酸鉀和醋酸銨；所述枸櫞酸鹽包括枸櫞酸鈉、枸櫞酸鉀和枸櫞酸銨。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述常山酮制劑的高效液相色譜檢測方法，其特征在于：所述色譜柱為ZORBAX XDB
?
C18柱(4.6
×
150mm，5μm)、ZORBAX Extend
?

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：瞿春密，彭廷恒，顏偉偉，林松，
申請(專利權(quán))人：重慶威鵬藥業(yè)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：