具有致耐受性肽的深度乳清蛋白水解產(chǎn)物制造技術(shù)

本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)涉及用于制備包含致耐受性肽的超濾乳清蛋白水解產(chǎn)物的方法，其中在超濾之前添加乳化劑和/或離液劑。本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)還涉及通過(guò)該方法可獲得的產(chǎn)品。法可獲得的產(chǎn)品。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國(guó)外來(lái)華專(zhuān)利技術(shù)】具有致耐受性肽的深度乳清蛋白水解產(chǎn)物


[0001]本專(zhuān)利技術(shù)屬于含有水解牛奶蛋白的配方食品領(lǐng)域，適用于患有牛奶蛋白過(guò)敏或有發(fā)生牛奶蛋白過(guò)敏風(fēng)險(xiǎn)的嬰兒。

技術(shù)介紹

[0002]在胃腸道中，膳食蛋白質(zhì)暴露于免疫系統(tǒng)。作為免疫系統(tǒng)的默認(rèn)反應(yīng)，對(duì)這些無(wú)害的食物蛋白質(zhì)產(chǎn)生了口服耐受性。嬰兒中高度存在口服免疫耐受性的發(fā)展，嬰兒在生命早期通過(guò)暴露于膳食蛋白質(zhì)而暴露于許多無(wú)害的蛋白質(zhì)。這種對(duì)無(wú)害蛋白質(zhì)的自然反應(yīng)發(fā)生破壞，就會(huì)出現(xiàn)食物過(guò)敏。人們普遍認(rèn)為，近幾十年來(lái)食物過(guò)敏的患病率一直在增加，特別是在西方國(guó)家。在生命早期，牛奶過(guò)敏(CMA)是最主要的食物過(guò)敏，目前有2
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5％的嬰兒患有此病。嬰兒期CMA代表著日益增加的全球健康和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，這不僅是由于過(guò)去幾十年患病率的增加引起，而且是由于病癥的持續(xù)性、嚴(yán)重性和復(fù)雜性增加引起。除了急性臨床表現(xiàn)外，生命早期的CMA還可能具有長(zhǎng)期影響，包括生長(zhǎng)發(fā)育延遲，以及在生命后期患特應(yīng)性疾病的風(fēng)險(xiǎn)增加。因此，治療或預(yù)防CMA的策略非常重要。
[0003]嬰兒和兒童CMA的標(biāo)準(zhǔn)飲食管理是通過(guò)從飲食中消除牛奶來(lái)避免過(guò)敏原。已經(jīng)開(kāi)發(fā)了多種配方食品來(lái)消除牛奶蛋白。對(duì)于患有輕度CMA的嬰兒，建議使用深度水解配方食品(eHF)，而對(duì)于患有嚴(yán)重CMA的嬰兒以及不能耐受eHF或eHF無(wú)法解決CMA癥狀的嬰兒，建議使用基于氨基酸的配方食品(AAF)。然而，這種配方食品的缺點(diǎn)是僅僅避免了過(guò)敏反應(yīng)而沒(méi)有進(jìn)行治療。當(dāng)嬰兒或兒童接觸牛奶蛋白時(shí)，會(huì)發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)。
[0004]另一種方法是專(zhuān)注于能夠誘導(dǎo)對(duì)蛋白質(zhì)的口服免疫耐受性但不能引起過(guò)敏反應(yīng)的肽。為此，銷(xiāo)售了含有部分水解的牛奶蛋白的配方食品，所述部分水解的牛奶蛋白具有能夠誘導(dǎo)口服免疫耐受性的肽。當(dāng)將完整的牛奶蛋白引入飲食時(shí)，這些降低了過(guò)敏反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。然而，此類(lèi)配方食品通常含有過(guò)敏原殘留物，不適合已經(jīng)患有過(guò)敏的嬰兒。
[0005]EP 0 629 350公開(kāi)了使用基本上不含過(guò)敏原的乳清蛋白水解產(chǎn)物，據(jù)說(shuō)其能夠誘導(dǎo)牛奶蛋白耐受性。當(dāng)用淋巴細(xì)胞刺激測(cè)試進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，包含經(jīng)超濾的具有3.3％大于5kDa的肽的部分水解的乳清蛋白水解產(chǎn)物的配方食品能夠誘導(dǎo)對(duì)全牛奶蛋白和α乳清蛋白的免疫耐受性。未發(fā)現(xiàn)對(duì)β乳球蛋白有影響。
[0006]EP 0 827 697公開(kāi)了乳清的用途，其已被酶水解用于制備在易感哺乳動(dòng)物中誘導(dǎo)對(duì)牛奶的口服耐受性的組合物。乳清對(duì)致敏蛋白的免疫檢測(cè)水平比未水解的乳清低100倍。
[0007]WO 00/42863公開(kāi)了一種低致敏性組合物，用于在處于蛋白質(zhì)過(guò)敏風(fēng)險(xiǎn)的嬰兒中誘導(dǎo)蛋白質(zhì)耐受性，該組合物包含非致敏性深度水解的蛋白質(zhì)主要成分(basis)和/或游離氨基酸主要成分，所述組合物包含作為活性成分的至少一種致敏蛋白的致耐受性肽。實(shí)施例表明，在將它們添加到嬰兒配方食品中之前，源自β乳球蛋白的致耐受性肽已從水解產(chǎn)物中純化或化學(xué)合成。
[0008]WO 2011/151059公開(kāi)了含有部分水解的蛋白質(zhì)和非消化性寡糖的嬰兒營(yíng)養(yǎng)品，用于誘導(dǎo)對(duì)天然膳食蛋白質(zhì)的口服耐受性。特別是成熟β乳球蛋白分子的第13
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48位氨基酸區(qū)
域中的肽在誘導(dǎo)口服耐受性誘導(dǎo)方面是有效的。結(jié)果表明，深度水解的乳清蛋白不能誘導(dǎo)口服免疫耐受性。
[0009]WO 2013/083691公開(kāi)了能夠治療過(guò)敏的在成熟β乳球蛋白分子的第13
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48位氨基酸區(qū)域中的合成的肽。公開(kāi)了添加此類(lèi)肽的不含過(guò)敏原的配方食品。
[0010]JP 2010
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105915公開(kāi)了通過(guò)水解β乳球蛋白獲得并用于食品和飲料的肽。
[0011]WO 2015/090347涉及鑒定的肽，其能夠誘導(dǎo)對(duì)牛奶的耐受性，尤其是對(duì)β乳球蛋白的耐受性。
[0012]WO 2016/0148572公開(kāi)了使用合成的β乳球蛋白肽和益生菌的特定混合物的口服免疫耐受性。
[0013]Gouw等人，2018 Clin Exp Allergy；48：1345
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1353，示出部分乳清蛋白水解產(chǎn)物包含在成熟β乳球蛋白分子的第13至48位氨基酸區(qū)域中的特定的致耐受性肽。
[0014]WO 2014/14713公開(kāi)了一種過(guò)敏原制劑，其在水包油乳液中包含過(guò)敏原。
[0015]因此，需要包含乳清蛋白的深度水解產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)品，該營(yíng)養(yǎng)品不含過(guò)敏原并含有特定的牛β乳球蛋白肽，并且以簡(jiǎn)單方便的方式生產(chǎn)(無(wú)需純化或合成的肽)，增強(qiáng)患有食物過(guò)敏的受試者的口服免疫耐受性，對(duì)食物蛋白質(zhì)，特別是牛奶蛋白的口服免疫耐受性誘導(dǎo)具有改善的效果。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

[0016]本領(lǐng)域慣用的是對(duì)乳清蛋白水解產(chǎn)物進(jìn)行超濾步驟以減少致敏蛋白，尤其是β乳球蛋白的量。由于蛋白質(zhì)的大小大于肽的大小，因此選擇對(duì)大蛋白質(zhì)不可滲透但允許較小肽通過(guò)的孔徑，從而預(yù)期致耐受性肽能夠滲透。然而，應(yīng)用這種傳統(tǒng)技術(shù)，專(zhuān)利技術(shù)人發(fā)現(xiàn)成熟β乳球蛋白分子的第13至48位氨基酸區(qū)域中的致耐受性β乳球蛋白肽不存在于常規(guī)的超濾乳清蛋白水解產(chǎn)物中。雖然發(fā)現(xiàn)這些肽實(shí)際上是在蛋白質(zhì)被蛋白水解酶降解的第一步中產(chǎn)生的，但在膜過(guò)濾步驟之后的滲透物中不存在這些肽，而是保留在滲余物(retentate)中，如實(shí)施例1所示。這種保留不能用肽的大小來(lái)解釋?zhuān)h(yuǎn)低于超濾膜的截止值。
[0017]因此，專(zhuān)利技術(shù)人開(kāi)發(fā)了用于生產(chǎn)超濾乳清蛋白水解產(chǎn)物的改進(jìn)方法。專(zhuān)利技術(shù)人驚奇地發(fā)現(xiàn)，通過(guò)在乳清蛋白水解之前、期間或之后但在膜過(guò)濾步驟之前添加食品級(jí)乳化劑(實(shí)施例2)或離液劑(實(shí)施例3)，致耐受性β乳球蛋白肽能夠通過(guò)膜并出現(xiàn)在滲透物中。這導(dǎo)致水解乳清蛋白富含致耐受性β乳球蛋白肽，而沒(méi)有較大的致敏性肽和蛋白質(zhì)(如免疫原性β乳球蛋白)的殘留物的存在。
[0018]在第一方面，本專(zhuān)利技術(shù)涉及制備超濾乳清蛋白水解產(chǎn)物的方法，所述方法包括：
[0019]a)用一種或多種蛋白水解酶對(duì)乳清蛋白A進(jìn)行水解1，從而獲得乳清蛋白水解產(chǎn)物B，和
[0020]b)對(duì)乳清蛋白水解產(chǎn)物B進(jìn)行膜超濾2，從而獲得滲透物C1和滲余物C2，
[0021]其中：
[0022](i)在水解1之前或期間將乳化劑E添加到乳清蛋白A中，或者其中在膜超濾2之前將乳化劑和/或離液劑E添加到乳清蛋白水解產(chǎn)物B中，
[0023]其中超濾乳清蛋白水解產(chǎn)物在滲透物C1中，
[0024]和/或其中：
[0025](ii)在步驟b)之后
[0026]c)將乳化劑E和/或離液劑E加入滲余物C2中，從而獲得滲余物C3，
[0027]d)對(duì)滲余物C3進(jìn)行膜超濾3，從而獲得滲透物D1和滲余物D2，和
[0028]e)將滲透物D1的至少一部分添加到滲透物C1中，從而獲得滲透物D3，其中超濾乳清蛋白水解產(chǎn)物在滲透物D3中。
[0029]步驟a)中提供的乳清蛋白A可以源自一種或多種乳清蛋白來(lái)源。不受理論束縛，專(zhuān)利技術(shù)人相信在不存在乳化劑和/或離液劑E的情況下致耐受性片段成簇。簇的大小使得它們不會(huì)滲透超濾膜。通過(guò)添本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】

【技術(shù)特征摘要】
【國(guó)外來(lái)華專(zhuān)利技術(shù)】1.制備超濾乳清蛋白水解產(chǎn)物的方法，所述方法包括：a)用一種或多種蛋白水解酶對(duì)乳清蛋白A進(jìn)行水解1，從而獲得乳清蛋白水解產(chǎn)物B，和b)對(duì)乳清蛋白水解產(chǎn)物B進(jìn)行膜超濾2，從而獲得滲透物C1和滲余物C2，其中(i)在水解1之前或期間將乳化劑E添加到乳清蛋白A中，或者其中在膜超濾2之前將乳化劑和/或離液劑E添加到乳清蛋白水解產(chǎn)物B中，其中超濾乳清蛋白水解產(chǎn)物在滲透物C1中，和/或其中：(ii)在步驟b)之后c)將乳化劑和/或離液劑E加入滲余物C2中，從而獲得滲余物C3，d)對(duì)滲余物C3進(jìn)行膜超濾3，從而獲得滲透物D1和滲余物D2，和e)將滲透物D1的至少一部分添加到滲透物C1中，從而獲得滲透物D3，其中超濾乳清蛋白水解產(chǎn)物在滲透物D3中。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述超濾乳清蛋白水解產(chǎn)物包含至少一種β乳球蛋白肽，所述至少一種β乳球蛋白肽包含根據(jù)SEQ ID No.2
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70中任一項(xiàng)的氨基酸序列，優(yōu)選地根據(jù)SEQ ID No.31
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70中任一項(xiàng)的氨基酸序列。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述超濾乳清蛋白水解產(chǎn)物包含每克蛋白質(zhì)小于100mg、優(yōu)選地小于50mg、更優(yōu)選地小于10mg的大小大于5kDa的肽；和/或其中所述超濾乳清蛋白水解產(chǎn)物包含每克蛋白質(zhì)小于30mg，優(yōu)選地每克蛋白質(zhì)小于10mg，最優(yōu)選地每克蛋白質(zhì)小于5mg的大小大于10kDa的肽。4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述超濾乳清蛋白水解產(chǎn)物包含每克蛋白質(zhì)至少300mg的大小為1kDa或以下的肽，甚至更優(yōu)選地每克蛋白質(zhì)至少500mg；和/或其中所述超濾乳清蛋白水解產(chǎn)物包含每克蛋白質(zhì)至少900mg大小為5kDa或以下的肽，甚至更優(yōu)選地每克蛋白質(zhì)至少950mg，最優(yōu)選地每克蛋白質(zhì)至少990mg。5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述超濾乳清蛋白水解產(chǎn)物的水解度為5
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50％，優(yōu)選地10
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30％，更優(yōu)選地15
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25％。6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述超濾乳清蛋白水解產(chǎn)物源自牛屬、野牛屬、水牛屬或山羊?qū)佟⒏鼉?yōu)選地牛屬的物種的奶，優(yōu)選地源自牛奶。7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中用于膜超濾2和/或膜超濾3的膜具有截止值在5
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1 5kDa、優(yōu)選地5
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11kDa，更優(yōu)選地9
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11kDa范圍內(nèi)的孔徑。8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中添加乳化劑E，其中所述乳化劑優(yōu)選地選自由檸檬酸單雙甘油酯(Citrem)、雙乙酰酒石酸單雙甘油酯(Datem)、單酰基甘油(MAG)、二酰基甘油(DAG)、蔗糖酯(SE，E473)和大豆卵磷脂，以及其組合組成的組，更優(yōu)選地是或包含Citrem。9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中在水解之前或期間，優(yōu)選地在水解之前，將乳化劑E添加到乳清蛋白中；并且優(yōu)選地濃度為每克其添加到的蛋白質(zhì)中至少50mg和/或濃度為至少1g/L。10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中添加離液劑，優(yōu)選地濃度為每100ml至少1克和/或每克其添加到的蛋白質(zhì)中至少25mg；并且其中所述離液劑優(yōu)選地是或包含尿
素。11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中在膜超濾之前將離液劑E添加到乳清蛋白水解產(chǎn)物B中。12.可通過(guò)根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法獲得的超濾乳清蛋白水解產(chǎn)物。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的超濾乳清蛋白水解產(chǎn)物，其包括：
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每克蛋白質(zhì)少于6微克致敏性β乳球蛋白；和/或基于總蛋白質(zhì)，小于3％，優(yōu)選地小于1％的大小為5kDa的肽，和
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至少一種β乳球蛋白肽，其包含根據(jù)SEQ ID No.2
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30中任一項(xiàng)，優(yōu)選地，根據(jù)SEQ ID No.31
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57中任一項(xiàng)，更優(yōu)選地，根據(jù)SEQ ID No.58
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70中任一項(xiàng)的氨基酸序列；和
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優(yōu)選地，每克蛋白質(zhì)至少50mg離液劑和/或每克蛋白質(zhì)至少5mg乳化劑。14.超濾乳清蛋白水解產(chǎn)物，其中所述超濾乳清蛋白水解產(chǎn)物包含具有以下大小分布的肽：基于水解產(chǎn)物的總蛋白質(zhì)，60
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90％，大小＜1kDa，10
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40％大小為1至＜5kDa的肽，0
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0.5％...

【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：塞爾吉奧，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：紐崔西亞公司，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：