多肽EN-9在制備治療痤瘡的產品中的應用制造技術

本發明專利技術屬于小分子多肽應用技術領域，公開了多肽EN

【技術實現步驟摘要】
多肽EN
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9在制備治療痤瘡的產品中的應用


[0001]本專利技術屬于小分子多肽應用
，尤其涉及多肽EN
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9在制備治療痤瘡的產品中的應用。

技術介紹

[0002]痤瘡是毛囊皮脂腺單位的一種慢性炎癥性皮膚病，目前治療痤瘡的藥物主要有維A酸類藥物、抗菌藥物、激素類藥物。然而這些藥物都存在種種不足，例如：抗生素容易被濫用，這導致了越來越多的細菌耐藥現象的發生。同時，口服抗生素要注意藥物不良反應的發生，如胃腸道反應、藥疹、肝損害、光敏反應、色素沉著和菌群失調。而異維A酸也常常有頭痛、惡心嘔吐、甚至致畸等不良反應發生。激素類藥物容易使患者產生依賴性。因此，痤瘡患者亟需更為安全有效的相應治療藥物。
[0003]痤瘡丙酸桿菌(Cutibacterium acnes，簡稱Ca菌)通常存在于皮脂豐富的皮膚區域，它的過度增殖一直被認為是導致痤瘡的原因。當皮脂分泌旺盛導致毛囊堵塞時，缺氧的環境使痤瘡丙酸桿菌大量繁殖，對免疫系統產生強烈刺激，造成尋常痤瘡的爆發。痤瘡丙酸桿菌在痤瘡的發病機制中發揮著重要作用，痤瘡的嚴重程度和痤瘡丙酸桿菌的相對豐度密切有關。由此可見，在治療痤瘡的過程中，對痤瘡丙酸桿菌的生長進行抑制屬于關鍵的一環。此外，在抑制痤瘡丙酸桿菌生長的同時，減少痤瘡部位炎癥的發生和發展，對阻止痤瘡的進一步惡化也是至關重要的。
[0004]小分子多肽又稱寡肽或低聚肽，一般由2
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10個氨基酸組成。小分子肽擁有很多獨特的生物活性，是蛋白質結構的功能片斷，在生物體內具有重要的生理功能。許多小分子多肽可介導細胞與細胞、蛋白質與蛋白質、細胞與蛋白質及其他非肽類藥物、蛋白調控因子與基因表達之間的相互作用。此外，小分子多肽還具有分子量小、組織穿透力強、溶解性好、穩定性高、可大量制備和免疫原性較低等特點，由此常作為新型藥物的候選化合物。
[0005]基于此，本專利技術希望尋找和開發得到一種既具有抑制痤瘡丙酸桿菌生長，還具備良好抗炎功效的多肽化合物，從而更好地應用于痤瘡的治療。

技術實現思路

[0006]本專利技術旨在至少解決上述現有技術中存在的技術問題之一。為此，本專利技術提出多肽EN
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9在制備治療痤瘡的產品中的應用。本專利技術指出，多肽EN
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9具有抑制痤瘡丙酸桿菌生長的作用，還具有良好的抗炎活性，在制備治療痤瘡的產品中體現出很好的應用前景。
[0007]本專利技術提供了多肽EN
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9在制備治療痤瘡的產品中的應用，所述多肽EN
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9的氨基酸序列為：ENDPRAVAF(SEQ ID NO：1)。
[0008]優選地，所述多肽EN
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9的制備方法，包括以下步驟：
[0009]將乳桿菌接種至液體發酵培養基中進行發酵后，得到含多肽EN
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9的溶液；所述乳桿菌包括干酪乳桿菌、植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌中的至少一種。
[0010]更優選地，所述乳桿菌為嗜酸乳桿菌。
[0011]更優選地，所述接種的量為1
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5％。
[0012]更優選地，所述液體發酵培養基為MRS培養基。
[0013]更優選地，所述發酵的時間為24
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48h。
[0014]更優選地，所述方法還包括對所述含多肽EN
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9的溶液進行分離、純化的步驟。
[0015]進一步優選地，所述分離的步驟為：采用乙酸乙酯對所述含多肽EN
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9的溶液進行萃取，再采用層析柱進行分離。
[0016]再進一步優選地，所述層析柱為葡聚糖凝膠層析柱。
[0017]進一步優選地，所述純化的步驟為：采用高效液相色譜進行純化，所述高效液相色譜所用流動相為乙腈水溶液。
[0018]再進一步優選地，所述乙腈水溶液中乙腈與水的體積比約為9：1。
[0019]本專利技術提供了一種治療痤瘡的藥物，包括多肽EN
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9和/或其在藥學上可接受的鹽，以及藥學上可接受的輔料。
[0020]相對于現有技術，本專利技術的有益效果如下：
[0021]本專利技術指出，乳桿菌的發酵產物中含有既能抑制痤瘡丙酸桿菌生長，還體現出良好抗炎活性的多肽EN
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9。此外本專利技術還提供了制備多肽EN
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9方法，并通過試驗表明多肽EN
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9具有良好的耐熱性和蛋白酶穩定性，可大量制備，在痤瘡的治療上具有較廣闊的應用前景，可用于制備治療痤瘡的產品(如藥物或化妝品)。
附圖說明
[0022]圖1為干酪乳桿菌的發酵上清對痤瘡丙酸桿菌的抑制率；
[0023]圖2為羅伊氏乳桿菌的發酵上清對痤瘡丙酸桿菌的抑制率；
[0024]圖3為植物乳桿菌的發酵上清對痤瘡丙酸桿菌的抑制率；
[0025]圖4為嗜酸乳桿菌的發酵上清對痤瘡丙酸桿菌的抑制率；
[0026]圖5為干酪乳桿菌發酵上清乙酸乙酯萃取液對痤瘡丙酸桿菌的抑制率；
[0027]圖6為植物乳桿菌發酵上清乙酸乙酯萃取液對痤瘡丙酸桿菌的抑制率；
[0028]圖7為嗜酸乳桿菌發酵上清乙酸乙酯萃取液對痤瘡丙酸桿菌的抑制率；
[0029]圖8為MRS培養基乙酸乙酯萃取液對痤瘡丙酸桿菌的抑制率；
[0030]圖9為嗜酸乳桿菌CIP 76.13的生長曲線；
[0031]圖10為嗜酸乳桿菌CIP 76.13的抑菌能力曲線；
[0032]圖11為嗜酸乳桿菌CIP 76.3以不同培養時間、不同接種量所得發酵上清液的抑菌能力；
[0033]圖12為不同溫度作用下發酵上清液抑菌能力；
[0034]圖13為不同pH作用下發酵上清液的抑菌能力；
[0035]圖14為不同蛋白酶作用下發酵上清液的抑菌能力；
[0036]圖15為實施例6中經層析分離后各管的蛋白質濃度；
[0037]圖16為實施例6中層析分離后各管的抑菌率；
[0038]圖17為實施例6中最佳餾分的高效液相色譜圖；
[0039]圖18為不同處理條件下THP
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1細胞中IL
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1β的基因相對表達量；
[0040]圖19為不同處理條件下RAW 264.7細胞中TNF
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α的基因相對表達量；
[0041]圖20為嗜酸乳桿菌抑菌抗炎多肽(多肽EN
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9)的LC
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MS/MS一級質譜圖；
[0042]圖21為嗜酸乳桿菌抑菌抗炎多肽(多肽EN
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9)的LC
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MS/MS二級質譜圖。
具體實施方式
[0043]為了讓本領域技術人員更加清楚明白本專利技術所述技術方案，現列舉以下實施例進行說明。需要指出的是，以下實施例僅為本專利技術的優選實施例，對本專利技術要求的保護范圍不構成限制作用，任何未違背本專利技術的精神實質和原理下所做出的修改、本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.多肽EN
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9在制備治療痤瘡的產品中的應用，其特征在于，所述多肽EN
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9的氨基酸序列為：ENDPRAVAF。2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述多肽EN
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9的制備方法，包括以下步驟：將乳桿菌接種至液體發酵培養基中進行發酵后，得到含多肽EN
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9的溶液；所述乳桿菌包括干酪乳桿菌、植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌中的至少一種。3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述乳桿菌為嗜酸乳桿菌。4.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述接種的量為1
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5％。5.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述液體發酵培養基為MRS培養...

【專利技術屬性】
技術研發人員：謝智勇，葉思敏，張倩，李四菊，
申請(專利權)人：中山大學，
類型：發明
國別省市：