一種雜交瘤細胞篩選芯片及其篩選收集方法技術

本發明專利技術提供一種雜交瘤細胞篩選芯片及其篩選收集方法。該芯片包括貼合在一起的玻璃基片與PDMS片，PDMS片的貼合面設有依次相連的第一篩選區、孵育區、第二篩選區、收集區；其中，第一篩選區用于將未融合單細胞與融合細胞相分離；孵育區預先鋪滿捕獲細胞，用于將瘤

【技術實現步驟摘要】
一種雜交瘤細胞篩選芯片及其篩選收集方法


[0001]本專利技術涉及微流控生物芯片
，更具體地涉及一種雜交瘤細胞篩選芯片及其篩選收集方法。

技術介紹

[0002]近年來，隨著微流控和微機械加工技術的不斷完善和發展，微全分析系統(Micro total analysis system，μ
?
TAS)在細胞水平上的生物學研究和生化檢測等領域里的優勢日趨顯著。微流控芯片因功能單元尺寸與細胞大小相當、精度高和檢測快速方便等優點，在稀有細胞分離和檢測方面表現出了明顯的優勢。將現行所有的細胞分析步驟和過程(如細胞操縱、細胞捕捉/篩選、細胞回收以及在線實時動態監測分析等)整合于一塊微芯片上，實現分析操作的一體化，可以減少分選過程中對目標細胞的損傷和污染。因此，利用微流控芯片技術進行雜交瘤細胞的特異性捕獲和回收，在免疫學檢測和分析領域具有廣闊的應用前景。
[0003]公開號為CN 112920951 A的專利技術專利申請公開了一種細胞篩選芯片及其制作與細胞篩選收集方法，該專利技術利用微流控芯片可以篩選一定特性的細胞，其適應于相對簡單的細胞群樣本。但是雜交瘤細胞的樣本相對復雜，該芯片由于結構簡單和功能單一無法實現雜交瘤細胞的篩選。
[0004]雜交瘤細胞篩選是獲取單克隆抗體最為關鍵的環節。傳統雜交瘤細胞篩選技術的整個過程基本上在常規細胞培養的384孔板上進行，由于B淋巴細胞與骨髓腫瘤細胞融合過程影響因素復雜，產生的融合細胞大部分沒有抗體制備功能或效價低，需要通過對融合后的細胞進行培養
?<br/>鑒定等多次循環往復才能得到相對性能優良的雜交瘤細胞，因此該現有傳統技術耗時長、篩選效率低。如果能將融合好的細胞進行分別單細胞水平培養和鑒定，有針對性選擇出雜交瘤細胞，將顯著提高篩選效率。因此，需要尋求一種更加簡便的方法來獲取高純度高效價的雜交瘤細胞。

技術實現思路

[0005]本專利技術的目的是提供一種雜交瘤細胞篩選芯片及其篩選收集方法，從而解決現有雜交瘤細胞篩選技術存在的耗時長、篩選效率低的問題，以及由于不同細胞之間的生存競爭關系還會導致高產能雜交瘤細胞被淘汰或者漏選的問題。
[0006]為了解決上述技術問題，本專利技術采用以下技術方案：
[0007]根據本專利技術的第一方面，提供一種雜交瘤細胞篩選芯片，包括貼合在一起的玻璃基片與PDMS片，所述PDMS片的貼合面設有依次相連完成雜交瘤細胞篩選的第一篩選區、孵育區、第二篩選區以及收集區；其中，所述第一篩選區包括：第一主通道，分別布置于所述第一主通道兩側的若干第一篩選柱，以及第一廢液通道，所述第一篩選區基于細胞尺寸差異將未融合的單細胞與融合后的融合細胞相分離；所述孵育區預先鋪滿捕獲載體，所述捕獲載體為捕獲細胞或磁珠，通過所述捕獲載體進一步將瘤
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瘤融合細胞從B
?
B融合細胞和雜交
瘤細胞中分離；所述第二篩選區包括：第二主通道，分別布置于所述第二主通道兩側的若干第二篩選柱，以及第二廢液通道，所述第二篩選區基于細胞尺寸差異將結合有目標細胞的捕獲載體與未結合有目標細胞的捕獲載體相分離；所述收集區用于收集雜交瘤細胞；所述雜交瘤細胞篩選芯片還包括：與所述孵育區相連的第一閥門、第二閥門、第三閥門，以及與所述收集區相連的第四閥門。
[0008]所述第一閥門用于控制來自所述第一篩選區的樣本進入所述孵育區，所述第二閥門、第三閥門用于控制捕獲載體、緩沖液以及胰蛋白酶進入所述孵育區，所述第四閥門用于控制來自所述第二篩選區的樣本進入所述收集區。
[0009]所述第一篩選區與第一進樣口相連，用于待篩選樣本的進入，所述待篩選樣本包括：雜交瘤細胞、瘤
?
瘤融合細胞、B
?
B融合細胞、瘤細胞單細胞、B細胞單細胞。
[0010]在所述第一篩選區中，任意兩個相鄰第一篩選柱之間的間距大于未融合的單細胞直徑而小于融合后的融合細胞直徑。
[0011]所述孵育區與第二進樣口相連，所述第二進樣口通過所述第二閥門控制，用于捕獲載體、PBS緩沖液或胰蛋白酶的進入。
[0012]在所述第二篩選區中，任意兩個相鄰第二篩選柱之間的間距大于未結合有目標細胞的捕獲載體直徑而小于結合有目標細胞的捕獲載體直徑。
[0013]根據本專利技術的一個優選方案，所述第一主通道的寬度為100～500微米，所述第一篩選柱的尺寸為10～50微米，所述第一篩選柱之間的間距根據未融合的單細胞的尺寸而定，通常為8
?
30微米。由于未融合的單細胞直徑較小，而融合后的細胞直徑較大，第一篩選區的篩選柱間隔一般大于未融合的單細胞直徑而小于融合后的融合細胞直徑，這樣可以保證目標細胞進入孵育區而不會通過第一篩選區的廢液通道流出。
[0014]根據本專利技術的一個優選方案，所述第二主通道的寬度為100～500微米，所述第二篩選柱的尺寸為10～50微米，所述第二篩選柱之間的間距根據未結合有目標細胞的捕獲載體的尺寸而定，通常為8
?
30微米。由于未結合有目標細胞的捕獲載體直徑和質量較小，而結合目標細胞的捕獲載體直徑和質量較大，第二篩選區的篩選柱間隔一般大于捕獲載體直徑而小于捕獲有目標細胞的捕獲載體直徑，這樣可以保證結合有目標細胞的捕獲載體進入收集區而不會通過第二篩選區的廢液通道流出。
[0015]根據本專利技術的第二方面，提供一種雜交瘤細胞的篩選收集方法，包括以下步驟：S1：提供一種如上面所述的雜交瘤細胞篩選芯片；S2：關閉第一閥門和第四閥門，打開第二閥門和第三閥門，向孵育區通入捕獲載體，所述捕獲載體為捕獲細胞或磁珠；S3：打開第一閥門，關閉第二閥門，向第一篩選區通入待篩選樣本，使未融合的單細胞與融合后的融合細胞相分離，其中，雜交瘤細胞、瘤
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瘤融合細胞、B
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B融合細胞自流道進入孵育區，瘤細胞單細胞、B細胞單細胞自第一廢液通道流出；S4：在融合細胞進入孵育區后，關閉第一閥門和第四閥門，打開第二閥門和第三閥門，雜交瘤細胞、B
?
B融合細胞與孵育區內的捕獲載體結合，瘤
?
瘤融合細胞則不與捕獲載體結合，通過第二進樣口向所述孵育區通入PBS緩沖液，可使瘤
?
瘤融合細胞流出；S5：然后通過第二進樣口向所述孵育區通入胰蛋白酶或去除磁鐵磁力，使樣本進入第二篩選區，根據結合有細胞的捕獲載體與未結合細胞的捕獲載體的尺寸不同，未結合細胞的捕獲載體自第二廢液通道流出，結合有雜交瘤細胞、B
?
B融合細胞的捕獲載體進一步進入收集區；S6：B
?
B融合細胞在收集區自然凋亡，進而實現雜交瘤細胞的收
集。
[0016]優選地，步驟S6還包括：在收集區根據需求對雜交瘤細胞進行后續處理。
[0017]正如本專利技術的
技術介紹
部分所述，現有的細胞篩選芯片無法篩選雜交瘤細胞樣品這樣包含大量相似屬性細胞的樣品，本專利技術的關鍵專利技術點即在于，利用雜交瘤細胞的樣本特性和雜交瘤細胞的生化特性，特別設計出了一種本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種雜交瘤細胞篩選芯片，包括貼合在一起的玻璃基片與PDMS片，其特征在于，所述PDMS片的貼合面設有依次相連完成雜交瘤細胞篩選的第一篩選區、孵育區、第二篩選區以及收集區；其中，所述第一篩選區包括：第一主通道，分別布置于所述第一主通道兩側的若干第一篩選柱，以及第一廢液通道，所述第一篩選區基于細胞尺寸差異將未融合的單細胞與融合后的融合細胞相分離；所述孵育區預先鋪滿捕獲載體，所述捕獲載體為捕獲細胞或磁珠，通過所述捕獲載體進一步將瘤
?
瘤融合細胞從B
?
B融合細胞和雜交瘤細胞中分離；所述第二篩選區包括：第二主通道，分別布置于所述第二主通道兩側的若干第二篩選柱，以及第二廢液通道，所述第二篩選區基于細胞尺寸差異將結合有目標細胞的捕獲載體與未結合有目標細胞的捕獲載體相分離；所述收集區用于收集雜交瘤細胞；所述雜交瘤細胞篩選芯片還包括：與所述孵育區相連的第一閥門、第二閥門、第三閥門，以及與所述收集區相連的第四閥門。2.根據權利要求1所述的雜交瘤細胞篩選芯片，其特征在于，所述第一閥門用于控制來自所述第一篩選區的樣本進入所述孵育區，所述第二閥門、第三閥門用于控制捕獲載體、緩沖液以及胰蛋白酶進入所述孵育區，所述第四閥門用于控制來自所述第二篩選區的樣本進入所述收集區。3.根據權利要求1所述的雜交瘤細胞篩選芯片，其特征在于，所述第一篩選區與第一進樣口相連，用于待篩選樣本的進入，所述待篩選樣本包括：雜交瘤細胞、瘤
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瘤融合細胞、B
?
B融合細胞、瘤細胞單細胞、B細胞單細胞。4.根據權利要求1所述的雜交瘤細胞篩選芯片，其特征在于，在所述第一篩選區中，任意兩個相鄰第一篩選柱之間的間距大于未融合的單細胞直徑而小于融合后的融合細胞直徑。5.根據權利要求1所述的雜交瘤細胞篩選芯片，其特征在于，所述孵育區與第二進樣口相連，所述第二進樣口通過所述第二閥門控制，用于捕獲載體、PBS緩沖液、胰蛋白酶的進入。6.根據權利要求1所述的雜交瘤細胞篩選芯片，其特征在于，在所述第二篩選區中，任意兩個相鄰第二篩選柱之間的間距大于未...

【專利技術屬性】
技術研發人員：金慶輝，袁浩鈞，蔣新華，
申請(專利權)人：山東風華生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：