一種環(huán)孢素軟膠囊有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種環(huán)孢素軟膠囊有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定方法，屬于藥物分析技術(shù)領(lǐng)域。該方法采用高效液相色譜法測(cè)定環(huán)孢素軟膠囊中的有關(guān)物質(zhì)，色譜條件為：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以四氫呋喃為流動(dòng)相A，流動(dòng)相B包括四氫呋喃與磷酸氫二鈉水溶液的混合液，流動(dòng)相B的pH為1.9～2.1，進(jìn)行梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為218～222nm，柱溫為74～76℃，流動(dòng)相的流速為0.95～1.05ml/min。本發(fā)明專利技術(shù)的測(cè)定方法通過對(duì)色譜條件進(jìn)行篩選，能夠確保輔料成分被及時(shí)洗脫，避免輔料峰干擾有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)，異環(huán)孢素A與異環(huán)孢素H的出峰時(shí)間大幅提前，有效提高了檢測(cè)靈敏度和結(jié)果準(zhǔn)確性，從而保證環(huán)孢素軟膠囊的質(zhì)量可控性。囊的質(zhì)量可控性。囊的質(zhì)量可控性。

A method for determination of related substances in cyclosporine soft capsules

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種環(huán)孢素軟膠囊有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定方法


[0001]本專利技術(shù)涉及藥物分析
，具體涉及一種環(huán)孢素軟膠囊的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法。

技術(shù)介紹

[0002]環(huán)孢素A(cyclosprine,CyA)是由11個(gè)氨基酸組成的環(huán)狀多肽，是土壤中一種真菌的活性代謝物，其作為一種免疫抑制劑，可選擇性地作用于T淋巴細(xì)胞活化初期，臨床主要用于防止異體器官或骨髓移植時(shí)的排斥等不利的免疫反應(yīng)。環(huán)孢素中有6種已知雜質(zhì)，同時(shí)環(huán)孢素工藝雜質(zhì)和降解雜質(zhì)眾多且隨著劑型的不同所含雜質(zhì)也有所不同，控制這些有關(guān)物質(zhì)的含量對(duì)保證藥品質(zhì)量和用藥安全有重要意義。
[0003]現(xiàn)行各國(guó)藥典僅對(duì)環(huán)孢素原料藥的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行控制，未對(duì)環(huán)孢素制劑產(chǎn)品的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行控制。對(duì)于環(huán)孢素軟膠囊，一方面其輔料成分復(fù)雜，且有較強(qiáng)的紫外吸收，在色譜圖中有較多的輔料峰，存在輔料干擾風(fēng)險(xiǎn)；另一方面由于生產(chǎn)工藝、原輔料相互作用以及儲(chǔ)存過程穩(wěn)定性等影響會(huì)產(chǎn)生一些新的雜質(zhì)，因此，現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)無法確保制劑產(chǎn)品的安全、有效和質(zhì)量可控。對(duì)于環(huán)孢素軟膠囊中所含的雜質(zhì)，國(guó)家藥典委員會(huì)2015年公示了環(huán)孢素軟膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的有關(guān)物質(zhì)分析方法，龐文哲等發(fā)表的文獻(xiàn)《HPLC法測(cè)定環(huán)孢素膠囊及軟膠囊的含量及有關(guān)物質(zhì)》中介紹了相關(guān)分析方法。但是以上現(xiàn)有技術(shù)僅檢測(cè)控制環(huán)孢素H、環(huán)孢素A和異環(huán)孢素A三個(gè)有關(guān)物質(zhì)，未對(duì)其他未知雜質(zhì)進(jìn)行控制。同時(shí)部分輔料峰在以上方法的色譜條件下不能被及時(shí)洗脫出來，輔料峰在后續(xù)第二針、第三針洗脫出來，干擾有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)，從而導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確，同時(shí)影響影響色譜柱的使用壽命。另外，現(xiàn)有技術(shù)的分析方法中環(huán)孢素H、環(huán)孢素A和異環(huán)孢素A的色譜峰保留時(shí)間均較晚，由于色譜分離的擴(kuò)散效應(yīng)隨保留時(shí)間增加而加大，導(dǎo)致上述三種有關(guān)物質(zhì)色譜峰矮且寬，檢測(cè)靈敏度較低、準(zhǔn)確度較差。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

[0004]為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本專利技術(shù)的目的在于提供一種環(huán)孢素軟膠囊的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法，該方法可確保制劑中的輔料成分被及時(shí)洗脫，有效避免了輔料峰的干擾，有效提高了檢測(cè)靈敏度和結(jié)果準(zhǔn)確性。
[0005]為解決上述問題，本專利技術(shù)所采用的技術(shù)方案如下：
[0006]一種環(huán)孢素軟膠囊的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法，其采用高效液相色譜進(jìn)行測(cè)定，色譜條件如下：
[0007]色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為色譜柱填料；
[0008]流動(dòng)相：以四氫呋喃為流動(dòng)相A，以四氫呋喃與磷酸氫二鈉的混合液為流動(dòng)相B，流動(dòng)相B的pH為1.9～2.1，進(jìn)行梯度洗脫。
[0009]優(yōu)選地，所述梯度洗脫的程序如下：在0
?
40min，流動(dòng)相B的體積百分比維持在100％；在40min
?
55min，流動(dòng)相A的體積百分比由0％變化至70～90％，流動(dòng)相B的體積百分
比由100％變化至10～30％；在56min
?
65min，流動(dòng)相A的體積百分比為0％，流動(dòng)相B的體積百分比維持在100％。
[0010]優(yōu)選地，所述梯度洗脫的程序如下：在0
?
40min，流動(dòng)相B的體積百分比維持在100％；在40min
?
55min，流動(dòng)相A的體積百分比由0％變化至75～85％，流動(dòng)相B的體積百分比由100％變化至15～25％；在56min
?
65min，流動(dòng)相A的體積百分比為0％，流動(dòng)相B的體積百分比維持在100％。
[0011]優(yōu)選地，所述梯度洗脫的程序如下：在0
?
40min，流動(dòng)相B的體積百分比維持在100％；在40min
?
55min，流動(dòng)相A的體積百分比由0％變化至78～82％，流動(dòng)相B的體積百分比由100％變化至18～22％；在56min
?
65min，流動(dòng)相A的體積百分比為0％，流動(dòng)相B的體積百分比維持在100％。
[0012]進(jìn)一步優(yōu)選地，流動(dòng)相的洗脫程序如下：
[0013]。
[0014]作為本專利技術(shù)優(yōu)選的實(shí)施方式，所述流動(dòng)相B中四氫呋喃與磷酸氫二鈉的體積比為44～46:54～56。可選地，所述磷酸氫二鈉的濃度為0.005
?
0.2mol/L，進(jìn)一步為0.005
?
0.15mol/L，進(jìn)一步為0.01mol/L。
[0015]作為本專利技術(shù)優(yōu)選的實(shí)施方式，本專利技術(shù)進(jìn)行高效液相色譜分析檢測(cè)的條件為：檢測(cè)波長(zhǎng)為218～222nm，柱溫為74～76℃，流速為0.95～1.05ml/min，進(jìn)樣量為 10μl。
[0016]可選地，所述色譜柱的型號(hào)規(guī)格為：Kromasil 100
?
5，C18，4.6mm
×
250mm， 5μm。
[0017]具體地，本專利技術(shù)所提供的環(huán)孢素軟膠囊的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法包括以下步驟：
[0018]S1、空白輔料溶液的配制：取藥液輔料和囊殼輔料適量，加入溶劑強(qiáng)力振搖使其溶解，稀釋成每1ml含藥液輔料19mg、囊殼輔料12mg的空白輔料溶液；
[0019]S2、供試品溶液的配制：取環(huán)孢素軟膠囊內(nèi)容物適量，精密稱定，加入溶劑搖勻，制成每1ml含有環(huán)孢素2mg的供試品溶液；
[0020]S3、對(duì)照溶液的配制：精密量取供試品溶液1ml，加入溶劑搖勻，制成每 1ml含有環(huán)孢素10μg的對(duì)照溶液；
[0021]S4、分離度溶液的配制：
[0022]取環(huán)孢素對(duì)照品、環(huán)孢素H對(duì)照品、異環(huán)孢素A對(duì)照品、異環(huán)孢素H對(duì)照品適量，加溶劑溶解并稀釋成每1ml含環(huán)孢素25μg、環(huán)孢素H 25μg、異環(huán)孢素A 25μg、異環(huán)孢素H 25μg的分離度溶液；
[0023]S5、檢測(cè)：分別精密量取空白輔料溶液、分離度溶液、供試品溶液和對(duì)照溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品溶液的雜質(zhì)峰和對(duì)照溶液主峰面積比較，按照加校正因子的自身對(duì)照法計(jì)算各有關(guān)物質(zhì)的含量。
[0024]可選地，所述強(qiáng)力振搖的時(shí)間為5～10min。
[0025]可選地，所述溶劑為四氫呋喃與水按4:1的體積比混合而成的混合液。
[0026]具體地，所述自身對(duì)照法的計(jì)算公式為：
[0027]有關(guān)物質(zhì)的含量＝F
×
[A
U
/(A
S
×
200)]×
100％
[0028]其中，A
U
為供試品溶液中各個(gè)雜質(zhì)的峰面積，A
S
為對(duì)照溶液中環(huán)孢素的峰面積，F(xiàn)為校正因子，所述環(huán)孢素和環(huán)孢素H的校正因子為1.0，異環(huán)孢素A的校正因子為1.2，異環(huán)孢素H的校正因子為1.4。
[0029]相比現(xiàn)有技術(shù)，上述方案的有益效果在于：
[0030]本專利技術(shù)采用高效液相色譜法對(duì)環(huán)孢素軟膠囊有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，并通過篩選優(yōu)化色譜條件，確保了環(huán)孢素軟膠囊中的輔料成分在色譜柱中被及時(shí)洗脫，避免輔料峰干擾有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)，同時(shí)也有助于延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命；本專利技術(shù)的測(cè)定方法與現(xiàn)有技術(shù)相比，異環(huán)孢素A與異環(huán)孢素H的出峰時(shí)間大幅提前，色譜峰明顯變本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】

【技術(shù)特征摘要】
1.一種環(huán)孢素軟膠囊的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法，其特征在于：采用高效液相色譜進(jìn)行測(cè)定，所述高效液相色譜包括如下色譜條件：色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為色譜柱填料；流動(dòng)相：以四氫呋喃為流動(dòng)相A，以包括四氫呋喃與磷酸氫二鈉水溶液的混合液為流動(dòng)相B，流動(dòng)相B的pH為1.9～2.1，進(jìn)行梯度洗脫。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)孢素軟膠囊的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法，其特征在于：所述梯度洗脫的程序如下：在0
?
40min，流動(dòng)相B的體積百分比維持在100％；在40min
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55min，流動(dòng)相A的體積百分比由0％變化至70～90％，流動(dòng)相B的體積百分比由100％變化至10～30％；在56min
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65min，流動(dòng)相A的體積百分比為0％，流動(dòng)相B的體積百分比維持在100％。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)孢素軟膠囊的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法，其特征在于：所述流動(dòng)相的洗脫程序如下：。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)孢素軟膠囊的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法，其特征在于：所述流動(dòng)相B中四氫呋喃與磷酸氫二鈉的體積比為44～46:54～56；所述磷酸氫二鈉的濃度為0.01mol/L。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)孢素軟膠囊的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法，其特征在于：進(jìn)行高效液相色譜分析檢測(cè)的條件為：檢測(cè)波長(zhǎng)為218～222nm，柱溫為74～76℃，流速為0.95～1.05ml/min，進(jìn)樣量為10μl。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)孢素軟膠囊的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法，其特征在于：包括以下步驟：S1、空白輔料溶液的配制：取藥液輔料和囊殼輔料適量，加入溶劑強(qiáng)力振搖使其溶解，稀釋得到成每1ml含藥液輔料19mg、囊殼輔料12mg的空白輔料溶液；S2、供試品溶液的配制：取環(huán)孢素軟...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：徐凱，藍(lán)美英，鐘貞，許小康，毛萬祥，李玥穎，曹珺，王亞龍，高昭儀，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：麗珠集團(tuán)麗珠制藥廠，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：