免疫原性組合物制造技術

本發明專利技術涉及用于提供針對由志賀氏菌屬（Shigella）菌株的細菌感染造成的疾病的保護的免疫原性組合物，特別是疫苗組合物。特別是疫苗組合物。

【技術實現步驟摘要】
免疫原性組合物


[0001]本專利技術涉及用于提供針對由志賀氏菌屬（Shigella）菌株的細菌感染造成的疾病的保護的免疫原性組合物，特別是疫苗組合物。
[0002]專利技術背景志賀氏菌病是一個重大的全球健康問題，引起超過700萬傷殘調整壽命年（Disability
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Adjusted Life Years）和每年100,000例死亡，特別是在發展中國家的5歲以下的兒童中[1,2,3]。志賀氏菌病由志賀氏菌屬的革蘭氏陰性細菌造成，基于脂多糖（LPS）的外多糖抗原（O抗原，OAg）的結構和組成，將所述志賀氏菌屬分成4個種并進一步分成50個血清型：宋氏志賀氏菌（S. sonnei）（1個血清型）、弗氏志賀氏菌（S. flexneri）（15個血清型）、鮑氏志賀氏菌（S. boydii）（19個血清型）和痢疾志賀氏菌（S. dysenteriae）（15個血清型）[4]。有限數目的血清型促成全球疾病負擔，并且這些在區域之間和隨時間變化[4,5,6,7]。宋氏志賀氏菌（Shigella sonnei）和弗氏志賀氏菌（Shigella flexneri）2a是世界上當前占優勢的血清型[4,6]。
[0003]臨床志賀氏菌病的標志是與發熱、惡心、厭食、脫水、粘液膿性和血性腹瀉以及里急后重有關的急性直腸結腸炎。志賀氏菌造成的痢疾是地方性流行的，且在發展中國家中造成數百萬的發病。例如，據估計每年有1.25億例志賀氏菌腹瀉，其中99%發生在發展中國家，且其中69%發生在5歲以下的兒童中。由志賀氏菌病引起的發病率和死亡率在發展中國家的兒童中是特別高的。
[0004]對志賀氏菌疫苗的現有方案(在[8]中綜述)已經基于活減毒菌株，其用于口服免疫、與O糖綴合用于注射、用于鼻內使用的蛋白體(具有連接的志賀氏菌屬LPS的腦膜炎球菌外膜囊泡)、用于鼻內使用的侵染素復合物(invaplex) (包含IpaB、IpaC和LPS的志賀氏菌屬的亞細胞提取物)和從具有脫毒LPS的ΔmsbB菌株制備的核蛋白
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核糖體復合物。盡管這些疫苗中的兩種已經在現場試驗中是有效的，但是都沒有針對多種志賀氏菌屬血清型進行保護。
[0005]最成功的最近疫苗候選物（胃腸外宋氏志賀氏菌OAg綴合物）在一次免疫接種以后在年輕成年人中表現出針對同源宋氏志賀氏菌感染的74%保護[9]，且在兩次免疫接種以后在大于3歲的兒童中表現出71%效力[10]。相反，所述疫苗在3歲以下的兒童中表現出低免疫原性和保護的缺乏[10]。保護的水平與OAg疫苗
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特異性抗體應答的水平平行，所述應答測量為對含有同源OAg的宋氏志賀氏菌LPS的抗體應答(抗
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LPS應答) [10]。
[0006]因而，本專利技術的一個目的是提供改善的免疫原性組合物，特別是可以用于針對志賀氏菌屬的多種血清型進行保護的疫苗組合物。更具體地，一個目的是提供產生對OAg的更強應答（特別是在幼兒中）的疫苗組合物。
[0007]專利技術概述在第一方面，本專利技術提供了一種免疫原性組合物，其包含從宋氏志賀氏菌和弗氏志賀氏菌純化的膜抗原的泛化模塊(GMMA)。具體地，所述GMMA包含經修飾的脂質A。具體地，所述經修飾的脂質A是脂質A的低毒或脫毒形式，作為非限制性例子，五?；闹|A、非天
然存在的六?；闹|A（其中所述酰基基團之一被取代）和/或六?；闹|A（其中月桂?；湵蛔貦坝王；溙鎿Q）。更具體地，至少75%的宋氏志賀氏菌GMMA具有在25 nm至40 nm范圍內的直徑，如通過電子顯微術確定的。宋氏志賀氏菌GMMA可以具有在32 nm至38nm范圍內的平均半徑(通過HPLC
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SEC MALLS確定)，且弗氏志賀氏菌GMMA可以具有21 nm至28 nm之間的平均半徑(HPLC
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SEC MALLS)。在一個實施方案中，從至少一種選自2a、3a和6的菌株中純化所述弗氏志賀氏菌GMMA。具體地，所述免疫原性組合物包含從菌株2a、3a和6中的每一種純化的弗氏志賀氏菌GMMA。在一個實施方案中，所述免疫原性組合物包含從以下菌株純化的GMMA：(a)宋氏志賀氏菌，(b)弗氏志賀氏菌2a，(c)弗氏志賀氏菌3a和(d)弗氏志賀氏菌6。具體地，所述GMMA以1:1:1:1的比率存在。更具體地，所述免疫原性組合物包含小于100
μ
g/mL的濃度的GMMA蛋白。具體地，所述免疫原性組合物包含從菌株2a、3a和6中的每一種中純化的弗氏志賀氏菌GMMA和從至少一種選自1b和2b菌株的其它弗氏志賀氏菌菌株純化的GMMA。具體地，所述免疫原性組合物包含從以下菌株純化的GMMA：(a)宋氏志賀氏菌ΔtolR，ΔhtrB，virG::nadAB，(b)弗氏志賀氏菌2aΔtolR，ΔmsbB，(c)弗氏志賀氏菌3aΔtolR，ΔmsbB和(d)弗氏志賀氏菌6ΔtolR，ΔmsbB或ΔhtrB。更具體地，所述弗氏志賀氏菌菌株是毒性質粒消除的。所述組合物還可以含有其它弗氏志賀氏菌菌株的GMMA。
[0008]具體地，所述免疫原性組合物包含佐劑。更具體地，所述佐劑是吸附劑。更具體地，所述佐劑是不會增強GMMA的免疫原性（例如，如通過抗
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LPS抗體應答測得的）的吸附劑。特定佐劑包括，例如，鋁佐劑，包括氫氧化鋁、ALHYDROGEL
?
、磷酸鋁、硫酸鋁鉀和明礬。
[0009]在第二方面，本專利技術提供了一種用于針對志賀氏菌屬感染免疫患者的方法，所述方法包括下述步驟：給所述患者施用本專利技術的第一方面的免疫原性組合物。
[0010]在第三方面，本專利技術提供了用于針對志賀氏菌屬感染免疫患者的方法中的本專利技術的第一方面的組合物。
[0011]附圖簡述圖1：肌肉內注射含有100 μg蛋白的劑量的1790GAHB (圓圈)或等體積的生理鹽水(菱形)以后在兔中的平均溫度升高(疫苗接種后的平均值
??
疫苗接種前溫度)。垂直條表明平均值標準誤差。對于1790GAHB，N= 12；且對于注射鹽水的兔，N= 6。
[0012]圖2(A)：在使用人主體的臨床試驗中免疫劑量1、2和3后產生的抗
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宋氏志賀氏菌LPS抗體水平(中位疫苗接種后水平)。
[0013]圖2(B)：在使用人主體的臨床試驗中在整個研究（包括免疫3后6個月隨訪）中的抗
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宋氏志賀氏菌LPS抗體水平(中位疫苗接種后水平)。
[0014]圖3：該框圖顯示了使用從(A)宋氏志賀氏菌、(B)弗氏志賀氏菌3a和(C)弗氏志賀氏菌2a純化的LPS作為包被抗原通過ELISA評估的用1790GAHB、弗氏志賀氏菌
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2a、弗氏志賀氏菌
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3a和4
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價組合免疫的組中的抗體分布。在(A)和(B)中，繪制了ELISA單元，在(C)中，顯示了ELISA OD。將25%至75%顯示為矩形，將最小值和最大值顯示為短線，且將中位值顯示為矩形中的水平條本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種免疫原性組合物，其包含(a)純化的宋氏志賀氏菌GMMA、(b)純化的弗氏志賀氏菌GMMA和(c)鋁佐劑，其中所述GMMA包含被修飾為低毒的脂質A，其中所述弗氏志賀氏菌GMMA從至少一種選自2a、3a和6的菌株純化，其中宋氏志賀氏菌是ΔtolR、ΔhtrB、virG::nadAB，弗氏志賀氏菌2a是ΔtolR、ΔmsbB或ΔtolR、ΔhtrB，弗氏志賀氏菌3a是ΔtolR、ΔmsbB或ΔtolR、ΔhtrB，并且弗氏志賀氏菌6是ΔtolR、ΔmsbB或ΔtolR、ΔhtrB。2.權利要求1的免疫原性組合物，其中被修飾的脂質A是五?；闹|A。3.權利要求1的免疫原性組合物，其中所述免疫原性組合物包含從菌株2a、3a和6中的每一種純化的弗氏志賀氏菌GMMA。4.前述權利要求任一項的免疫原性組合物，其中所述宋氏志賀氏菌菌株是宋氏志賀氏菌53G。5.權利要求1
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4中的任一項的免疫原性組合物，其中所述弗氏志賀氏菌菌株選自弗氏志賀氏菌2457T...

【專利技術屬性】
技術研發人員：C格克，LB馬丁，AJ索，
申請(專利權)人：葛蘭素史密絲克萊恩生物有限公司，
類型：發明
國別省市：