溫敏細胞培養微載體及其制備方法技術

本發明專利技術公開了一種溫敏細胞培養微載體，是以改性的纖維素，即羥丙基二乙氨基乙基纖維素為材料，制備成多孔結構的微球。本發明專利技術的有益效果為在細胞培養完成后收獲過程中，降低溫度到0

【技術實現步驟摘要】
溫敏細胞培養微載體及其制備方法


[0001]本專利技術涉及細胞培養材料
，具體涉及一種溫敏細胞培養微載體及其制備方法。

技術介紹

[0002]市場上已有商品化的溫度敏感型細胞培養表面，主要通過將溫敏材料接枝到培養裝置的表面來實現。該種表面能夠在細胞培養結束后，通過改變溫度使細胞自動脫落下來，減小對細胞的損傷。
[0003]然，現有技術中的各類溫敏型細胞培養表面存在各種各樣的缺陷。例如，中國專利技術專利申請“201310250743.X溫敏微載體及其制備工藝和使用方法”提供了一種微載體，當細胞從載體表面脫離時不使用胰酶或者化學試劑解離細胞，而僅僅通過改變溫度來實現。培養溫度為37℃時，細胞結合在微載體上，降低為常溫時脫離，但是由于脫離溫度和結合溫度差異較小，操作起來難度大，細胞收獲率僅為50～70％。

技術實現思路

[0004]針對現有技術中的問題，本申請提供了一種溫敏細胞培養微載體，它具有和現有溫敏細胞培養微載體不同的溫敏溫度，能夠更好的分離細胞，且保留細胞的活性。
[0005]為了實現上述目的，本專利技術所提供的溫敏細胞培養微載體，是以改性的纖維素，即羥丙基二乙氨基乙基纖維素為材料，制備成多孔結構的微球。
[0006]本專利技術還提供了一種上述溫敏細胞培養微載體的制備方法，其步驟為：將100mL的2～4％wt濃度羥丙基二乙氨基乙基纖維素溶液，加入到300mL石蠟油中，羥丙基二乙氨基乙基纖維素溶液和石蠟油以1:3～5體積比混合，添加10～20mL乳化劑司班80，充分攪拌乳化，升溫至50℃，羥丙基二乙氨基乙基纖維素溶液固化成球，固液分離后，充分洗滌去除雜質后，加入冷凍干燥器中，在真空冷凍干燥的條件下，得多孔羥丙基二乙氨基乙基纖維素固體微球。
[0007]上述方案中，所述羥丙基二乙氨基乙基纖維素溶液的制備方法為：將2～3g纖維素粉末溶解在含氫氧化鈉和尿素的水溶液中，氫氧化鈉和尿素/水重量比例為15:85，氫氧化鈉與尿素的重量比例為2～4:1，于
?
18℃下充分攪拌溶解24小時，得到透明澄清的纖維素溶液，加入1～2g二乙氨基氯乙烷鹽酸鹽和1～2g環氧丙烷混合物，在5～25℃充分攪拌24小時，即得。
[0008]本專利技術的有益效果為：溫敏微載體的好處是，在細胞培養完成后，通過控制溫度，溫敏微載體可以在凝膠態和溶液態相互轉變，細胞培養5～37℃時，微載體溶脹后是凝膠態，在收獲過程中，降低溫度到0
?
5℃，微載體從凝膠態轉變為溶液態，致使生長于微載體內和表面的細胞自動脫落，與微載體分離。與傳統的胰蛋白酶消化細胞分離方法不同，新方法，能更好的保存細胞表面蛋白及標記，保證細胞高活力，是一種無損細胞收獲方法。且針對現有溫敏微載體的缺陷改良，其細胞收獲率大幅提升。這種新型溫敏微載體具有良好的
細胞貼附和脫附能力,將會是大規模培養貼附型細胞的良好材料。
附圖說明
[0009]圖1為用實施例1的微載體培養后收獲的細胞形態圖。
具體實施方式
[0010]下面通過具體的實施例對本專利技術做進一步的詳述，但不應理解為是對本專利技術保護范圍的限制。
[0011]實施例1
[0012]一種溫敏細胞培養微載體，具體制備過程如下：
[0013]1)將2g纖維素粉末溶解在含氫氧化鈉和尿素的水溶液中，氫氧化鈉/尿素/水重量比例為11/4/85，于
?
18℃下充分攪拌溶解24小時，得到透明澄清的纖維素溶液，加入1g二乙氨基氯乙烷鹽酸鹽和1g環氧丙烷混合物，在25℃充分攪拌24小時，得到羥丙基二乙氨基乙基纖維素溶液。
[0014]2)將上述100mL的2％wt濃度羥丙基二乙氨基乙基纖維素溶液，加入到300mL石蠟油中，羥丙基二乙氨基乙基纖維素溶液和石蠟油以1/3體積比混合，添加10mL乳化劑司班80，充分攪拌乳化，升溫至50℃，羥丙基二乙氨基乙基纖維素溶液固化成球，固液分離后，用0.1M的鹽酸和無水乙醇充分洗滌后，加入冷凍干燥器中，在真空冷凍干燥的條件下，得多孔羥丙基二乙氨基乙基纖維素固體微球。改性微球同時具有多孔結構和溫敏特性，可以用于細胞培養和無損收獲。
[0015]實施例2
[0016]1)將3g纖維素粉末溶解在100g含氫氧化鈉和尿素的水溶液中，氫氧化鈉/尿素/水重量比例為10/5/85，于
?
18℃下充分攪拌溶解24小時，得到透明澄清的纖維素溶液，加入2g二乙氨基氯乙烷鹽酸鹽和2g環氧丙烷混合物，在5℃充分攪拌24小時，得到羥丙基二乙氨基乙基纖維素溶液。
[0017]2)將上述100mL的3％wt濃度羥丙基二乙氨基乙基纖維素溶液，加入到300mL石蠟油中，羥丙基二乙氨基乙基纖維素溶液和石蠟油以1/5體積比混合，添加20mL乳化劑司班80，充分攪拌乳化，升溫至50℃，羥丙基二乙氨基乙基纖維素溶液固化成球，固液分離后，用0.1M的鹽酸和無水乙醇充分洗滌后，加入冷凍干燥器中，在真空冷凍干燥的條件下，得多孔羥丙基二乙氨基乙基纖維素固體微球。改性微球同時具有多孔結構和溫敏特性，可以用于細胞培養和無損收獲。
[0018]實施例3
[0019]一種溫敏細胞培養微載體，具體制備過程如下：
[0020]1)將2g纖維素粉末溶解在含氫氧化鈉和尿素的水溶液中，氫氧化鈉/尿素/水重量比例為12/3/85，于
?
18℃下充分攪拌溶解24小時，得到透明澄清的纖維素溶液，加入2g二乙氨基氯乙烷鹽酸鹽和2g環氧丙烷混合物，在20℃充分攪拌24小時，得到羥丙基二乙氨基乙基纖維素溶液。
[0021]2)將上述100mL的4％wt濃度羥丙基二乙氨基乙基纖維素溶液，加入到300mL石蠟油中，羥丙基二乙氨基乙基纖維素溶液和石蠟油以1/4體積比混合，添加15mL乳化劑司班
80，充分攪拌乳化，升溫至50℃，羥丙基二乙氨基乙基纖維素溶液固化成球，固液分離后，用0.1M的鹽酸和無水乙醇充分洗滌后，加入冷凍干燥器中，在真空冷凍干燥的條件下，得多孔羥丙基二乙氨基乙基纖維素固體微球。改性微球同時具有多孔結構和溫敏特性，可以用于細胞培養和無損收獲。
[0022]對比例1
[0023]現有溫敏細胞培養微載體，具體制備過程如下：
[0024]1)25mL圓底燒瓶中加入葡聚糖微球(G50)1.0g，二甲基亞砜(DMSO)10mL，加入2
?
氯丙酰氯1.0g,加入磁子攪拌1.5h，用甲醇洗3
?
5次后，得到表面含有大量氯原子的化學修飾的葡聚糖微球；
[0025]2)N
?
異丙基丙烯酰胺(NiPAAm)通過自由基ATRP聚合接枝，方法如下：表面經過氯甲基化修飾含有大量氯原子的葡聚糖微球加入含有磁子的50mL圓底燒瓶，依次加入N異丙基丙烯酰胺(NIPAAm)2.0g，氯化銅(CuCl2)0.34g，三
?
(N
’
N二甲氨基乙基胺)(Me6Tren)0.46g，25mL去離子本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種溫敏細胞培養微載體，其特征在于：是以改性的纖維素，即羥丙基二乙氨基乙基纖維素為材料，制備成多孔結構的微球。2.根據權利要求1所述溫敏細胞培養微載體，其特征在于：所述羥丙基二乙氨基乙基纖維素溶液的制備方法為：將2～3g纖維素粉末溶解在含氫氧化鈉和尿素的水溶液中，氫氧化鈉和尿素/水重量比例為15:85，氫氧化鈉與尿素的重量比例為2～4:1，于
?
18℃下充分攪拌溶解24小時，得到透明澄清的纖維素溶液，加入1～2g二乙氨基氯乙烷鹽酸鹽和1～2g環氧丙烷混合物，在5～25℃充分攪拌24小時，即得。3.一種權利要求1所述溫敏細胞培養微載體的制備方法，其特征在于：將100mL的2～4％wt濃度羥丙基二乙氨基乙基纖維素溶液，加入到300mL石蠟油中，羥丙基二乙氨基乙...

【專利技術屬性】
技術研發人員：鄭飛，
申請(專利權)人：鄭飛，
類型：發明
國別省市：