本發明專利技術涉及特異性檢測HPV6和HPV11的雙特異性檢測試劑盒。本發明專利技術通過篩選優化獲得了HPV6/11特異性的免疫抗原肽，將所述抗原肽免疫小鼠制備獲得了特異性的單克隆抗體，所述單克隆抗體能夠特異性的結合HPV6/11，并且還具有抑制HPV6/11感染正常細胞的效果，將所述單抗制備成為試劑盒可以有效的用于HPV的檢測，具有較好的應用前景。具有較好的應用前景。
【技術實現步驟摘要】
特異性檢測HPV6和HPV11的雙特異性檢測試劑盒
[0001]本專利技術涉及生物檢測領域，更具體的涉及特異性檢測HPV6和HPV11的雙特異性檢測試劑盒。
技術介紹
[0002]宮頸癌是全球范圍內女性第二大常見的惡性腫瘤。大量研究表明，人乳頭瘤病毒 (hu
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manpapillomavirus，HPV)的持續感染與宮頸癌的發生密切相關，高危型HPV感染是引起宮頸上皮內瘤變(cervicalintraepithelialneoplasia，CIN) 和子宮頸癌的主要因素。目前已發現200多種HPV基因型別，其中，約54種HPV 基因型別可感染生殖道黏膜，并且還有更多的HPV亞型正在鑒定中。新的HPV 基因型的判定標準是指該HPV基因型別在E6、E7或者L1區的核苷酸序列與其他任意已確定型別的HPV有超過10％的不同。根據其致病力及致病危險性的大小可將其分為高危型HPV和低危型HPV。高危型HPV感染可引起宮頸、陰道、肛門、陰莖和口咽部位的上皮內瘤變或癌變，其HPV型別主要包括16、18、31、33、 35、39、45、51、52、56、58、59、68、73和82。低危型HPV感染僅可引起生殖器疣等良性病變，其HPV型別主要包括6、11、40、42、43、44、54、61、70、 72和81。與高危型HPV相比，低危型HPV的E6和E7蛋白干擾P53基因和pRb 基因的作用相對較弱。
[0003]HPV檢測技術廣泛應用于宮頸癌的篩查、流行病學調查及宮頸癌疫苗有效性的評價中。目前，國內外針對HPV的檢測方法層出不窮，HPV不同檢測方法的優劣主要通過兩個方面進行評價：臨床使用價值(即臨床靈敏度)與檢測極限(即分析靈敏度)。臨床靈敏度(又稱功能靈敏度)是指在HPV檢測技術中試驗結果為陽性的患者所占的比例以及HPV對CIN2級及以上2的檢出能力；分析靈敏度(又稱檢測限量)是指可檢測的最低分析物濃度。良好的HPV檢測技術需要滿足較高的臨床靈敏度及較低的分析靈敏度。目前，全世界約完成150個不同的HPV 檢測實驗，尚有一部分仍在進行中。已采用的檢測方法主要包括DNA檢測、RNA 檢測和與HPV相關的標志物檢測以及抗原檢測。
[0004]Aptima HPV于2012年獲批，其是第一個也是唯一一個經過FDA認證的用于 HPVmRNA檢測技術。該技術基于轉錄介導的擴增 (transcription—MediatedAmplification，TMA)技術檢測HPV E6/E7mRNA：即在上游引物5
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端添加T7啟動子，在反應體系中引入RNA聚合酶，目的mRNA經過逆轉錄成cDNA后，以轉錄的方式實現目的分子擴增。該技術目的在于檢測HPV 致癌基因E6/E7的mRNA，較之于HPV—DNA檢測而言，可以有效避免HPV一過性感染對檢測結果的干擾，但AptimaHPV檢測費用也較昂貴。
[0005]HPV抗體血清學檢測在HPV疫苗學和流行病學研究中具有重要意義。目前針對HPV的快速免疫檢測試劑盒的研究還不夠多，有待于進一步的研究，特別是能同時針對多種HPV亞型的檢測試劑還不夠多。因此，開發針對HPV多亞型檢測的試劑盒變得尤為迫切。
技術實現思路
[0006]本專利技術克服現有技術的缺陷，篩選并獲得了HPV6和HPV11高免疫原性抗原肽，其序
列如SEQ ID NO：1所示。
[0007]本專利技術另外一方面，以HPV6和HPV11高免疫原性抗原肽作為免疫原制備并獲得了相應的單克隆抗體。
[0008]一方面，本專利技術提供了特異性針對HPV6/11的單克隆抗體，其特征在于其輕重鏈可變區序列分別如SEQ ID No：3和4所示。
[0009]本專利技術抗體，其片段或VH鏈條VL抗體的鏈包括具有序列同一性的那些抗體，片段或VH鏈條VL本文所述抗體的鏈。例如，本專利技術包括與本文所述例證序列 (例如，SEQ ID NO:3
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4)具有至少65％，70％，75％，80％，85％，90％，95％，96％， 97％，98％，99％，99.5％或99.8％序列同一性的序列。因此，抗體的氨基酸序列的重鏈和/或輕鏈可變區可以不同于本文提出的序列，并且仍然在本文公開的實施方案的范圍內。例如，一個或多個互補決定區(CDR)可以不同于本文所述抗體氨基酸序列的重鏈和/或輕鏈可變區。或者，一個或多個互補決定區(CDR)可以與本文所述的序列(例如，SEQ ID NOS:3
?
4)相同，但是重鏈或輕鏈可變區的其它部分可以不同。本文所述的示例性序列(例如，SEQ ID NOs:3
?
4)的這種序列變化將被認為是本文所公開的本專利技術范圍內的實施方案。
[0010]本專利技術的抗體的非限制性例子包括，例如，完整的免疫球蛋白及其本領域已知的保留抗原結合親和力的變體和片段。抗體片段的例子包括但不限于Fv， Fab，Fab'，Fab'
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SH，F(ab')2；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子(例如 scFv)；和由抗體片段形成的多特異性抗體。抗體片段包括通過修飾全抗體或使用重組DNA方法重新合成的抗原結合片段。
[0011]北專利技術的抗體包括保守變體：“保守的”氨基酸取代是那些基本上不影響或降低蛋白質的功能，例如蛋白質與靶蛋白質相互作用的能力的取代。例如，與參比抗體序列相比，FTC特異性抗體包括多達1，2，3，4，5，6，7，8，9或多達10個保守取代，并保留了對FTC的特異性結合活性。術語保守變異還包括使用取代的氨基酸代替未取代的親本氨基酸。
[0012]另外，普通技術人員將認識到，單獨的取代，改變的刪除或添加，在編碼序列中添加或刪除單個氨基酸或小部分氨基酸(例如少于5％，在一些實施方案中少于1％)是保守變異，其中該變異導致氨基酸被化學上相似的氨基酸取代。
[0013]提供功能相似氨基酸的保守氨基酸取代表是本領域普通技術人員公知的。以下六個基團是被認為是彼此保守取代的氨基酸的例子：
[0014]1)丙氨酸(A)，絲氨酸(S)，蘇氨酸(T)；
[0015]2)天冬氨酸(D)，谷氨酸(E)；
[0016]3)天冬酰胺(N)，谷氨酰胺(Q)；
[0017]4)精氨酸(R)，賴氨酸(K)；
[0018]5)異亮氨酸(I)，亮氨酸(L)，蛋氨酸(M)，纈氨酸(V)；
[0019]6)苯丙氨酸(F)，酪氨酸(Y)，色氨酸(W)。
[0020]本專利技術的抗體還偶聯有可檢測標記：可檢測分子(也稱為標記)，其直接或間接綴合到抗體，以促進檢測。例如，可檢測標記能夠通過ELISA，分光光度法，流式細胞術，顯微鏡或診斷成像技術(例如CT掃描，MRI，超聲，纖維光學檢查和腹腔鏡檢查)進行檢測。可檢測標記物的具體，非限制性例子包括親和素，生物素，熒光團，化學發光劑，酶鍵，放射性同位素和重金屬或化合物(例如用于MRI檢測的超順磁性氧化鐵納米晶體)。在一個實施例中，“標記抗體”是指在抗體中摻入另一個分子。例如，標簽本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
1.HPV6和HPV11的雙特異性單克隆抗體3A2a在制備用于HPV6/11檢測的試劑盒中的用途，其中，HPV6和HPV11的雙特異性單克隆抗體輕鏈可變區序列如SEQ ID NO：3所示，HPV6和HPV11的雙特異性單克隆抗體重鏈可變區序列如SEQ ID NO：4所示。2.如權利要求1所述的用途，其特征在于所述單克隆抗體還偶聯有可檢測的標記。3.如權利要求2所述的用途，其特征在于可檢測的標記為酶。4.如權利要求3所述的用途，其特征在于酶為過氧化氫酶，葡萄糖
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磷酸脫氫酶，葡糖淀粉酶或...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張倡埼，朱高茂，
申請(專利權)人：北京熱燕生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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