本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種心臟靶向載藥外泌體及應(yīng)用和治療心臟疾病的藥物；由用于治療心臟疾病的藥物導(dǎo)入到具有心臟組織靶向性的外泌體中獲得，具有心臟組織靶向性的外泌體來源于小腸部位的細(xì)胞；心臟疾病治療藥物包含上述心臟靶向載藥外泌體。本發(fā)明專利技術(shù)使用小腸部位的細(xì)胞分泌的外泌體不需要做任何修飾就可以在心臟富集，用小腸部位的細(xì)胞來源的外泌體，解決了外泌體產(chǎn)量的問題，具有很好的應(yīng)用前景；而且用小腸部位的細(xì)胞來源的外泌體可以裝載不同藥物或活性分子，通過靶向心臟組織給藥，提高心臟疾病的治療效果，降低藥物毒副反應(yīng)。降低藥物毒副反應(yīng)。降低藥物毒副反應(yīng)。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
一種心臟靶向載藥外泌體及應(yīng)用和治療心臟疾病的藥物
[0001]本專利技術(shù)屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，涉及一種心臟靶向載藥外泌體及應(yīng)用和治療心臟疾病的藥物。
技術(shù)介紹
[0002]對于心血管疾病，一直以藥物治療和外科手術(shù)治療為主，近年來隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，基因轉(zhuǎn)移逐漸成為心血管疾病治療的新途徑，常被用于治療重要蛋白質(zhì)的過度表達(dá)和矯正基因的缺陷。如血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)等基因轉(zhuǎn)移，可以促進(jìn)血管新生，改善缺血性心肌的供血和冠脈側(cè)枝循環(huán)形成，為經(jīng)皮冠狀動脈腔內(nèi)成形術(shù)和冠脈內(nèi)支架植入后再狹窄的防治帶來新的希望。
[0003]心臟病的基因治療目前主要集中在兩個方面，即血管新生療法和冠脈再狹窄的防治。血管新生療法又稱為“分子搭橋術(shù)”，即應(yīng)用基因治療或其他治療手段刺激心肌缺血區(qū)小血管生長和側(cè)枝循環(huán)形成，在缺血的心肌區(qū)域架起新的橋梁。如應(yīng)用血管內(nèi)皮生長因子基因治療梗塞性血管病已經(jīng)獲準(zhǔn)應(yīng)用于臨床，并展示出良好的應(yīng)用前景。但是長期大量應(yīng)用血管生長因子可能對其他組織和血管產(chǎn)生不良影響，并且血管生長因子半衰期短，不能對患者的全身進(jìn)行應(yīng)用。
[0004]目前，通過向心肌內(nèi)直接注射裸DNA或帶有編碼基因的腺病毒載體是早期基因治療心血管疾病的常用方法，使得基因能進(jìn)行一定的轉(zhuǎn)移。
[0005]然而，需要通過胸廓切開術(shù)等損傷性的方式來實現(xiàn)，術(shù)后容易引發(fā)注射部位的炎癥和纖維癥。向心包灌注重組質(zhì)粒，基因能夠獲得比直接注射更高的轉(zhuǎn)移效率，但就目前的實際情況而言，此種活體外的基因轉(zhuǎn)移只適用于移植的心臟。因此，對心臟疾病進(jìn)行治療的過程中，亟需解決在治療中不能進(jìn)行有效、安全和可控地進(jìn)行靶向給藥治療的情況。
技術(shù)實現(xiàn)思路
[0006]本專利技術(shù)的目的是要解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，提供一種心臟靶向外泌體及應(yīng)用和治療心臟疾病的藥物，通過靶向心臟組織給藥，提高心臟疾病的治療效果，降低藥物毒副反應(yīng)。
[0007]為達(dá)到上述目的，本專利技術(shù)是按照以下技術(shù)方案實施的：
[0008]本專利技術(shù)第一方面提供了一種心臟組織靶向外泌體，所述靶向外泌體來源于小腸部位的細(xì)胞。
[0009]術(shù)語“外泌體”是一種囊泡，其從細(xì)胞向細(xì)胞外分泌，或具有由存在于細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)雙分子層構(gòu)成的膜結(jié)構(gòu)。外泌體的直徑約為30
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1000nm，外泌體在多泡體與細(xì)胞膜融合時從細(xì)胞中釋放出來，或直接從細(xì)胞膜中釋放出來。已知外泌體發(fā)揮運輸細(xì)胞內(nèi)的生物分子蛋白、生物活性脂質(zhì)和RNA(miRNA)的作用，以實現(xiàn)其在介導(dǎo)凝固、細(xì)胞間通訊和細(xì)胞免疫方面的功能性作用。
[0010]上述外泌體的概念包括微泡。已知外泌體的標(biāo)記蛋白有CD63、CD81、TSG101等，除
此之外，已知的還有細(xì)胞表面受體(如：EGFR)，信號傳導(dǎo)相關(guān)分子、細(xì)胞粘附相關(guān)蛋白、MSC相關(guān)抗原、熱休克蛋白、囊泡形成相關(guān)Alix等蛋白。
[0011]在一些實施方案中，外泌體直徑為約30到約500、直徑為約30到約300、直徑為約30到約250、直徑為約30到約220、直徑為約40到約175、約50到約150、約30到約150或約30到約120nm。
[0012]進(jìn)一步，所述細(xì)胞選自正常細(xì)胞或其衍生株、癌細(xì)胞。
[0013]進(jìn)一步，所述細(xì)胞來源于人或非人類哺乳動物。
[0014]進(jìn)一步，所述非人類哺乳動物包括非人靈長類動物、嚙齒動物、牛、豬、羊、犬、兔、貓、馬。
[0015]進(jìn)一步，所述嚙齒動物包括小鼠、大鼠、倉鼠、豚鼠。
[0016]進(jìn)一步，所述靈長類動物包括猴、猩猩、狒狒、猿。
[0017]在本專利技術(shù)中，所述小腸部位的細(xì)胞是指來源于小腸的細(xì)胞或者干細(xì)胞誘導(dǎo)分化的小腸細(xì)胞。所述干細(xì)胞包括多能干細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞。在本專利技術(shù)中，所述多能干細(xì)胞選自誘導(dǎo)多能干細(xì)胞。
[0018]誘導(dǎo)多能干細(xì)胞是通過誘導(dǎo)一種或多種干細(xì)胞特異性基因的表達(dá)而產(chǎn)生的非多能細(xì)胞(通常是成熟體細(xì)胞)的人工衍生干細(xì)胞。這樣的干細(xì)胞特異性基因包括但不限于八聚體轉(zhuǎn)錄因子家族，即Oct
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3/4；Sox基因家族，即Sox1，Sox2，Sox3，Sox15和Sox 18；Klf基因家族，即Klf1，Klf2，Klf4和Klf5；Myc基因家族，即c
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myc和L
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myc；Nanog基因家族，即OCT4，NANOG和REX1。
[0019]進(jìn)一步，所述小腸部位的細(xì)胞包括小腸細(xì)胞、小腸癌細(xì)胞、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞誘導(dǎo)的小腸細(xì)胞。
[0020]進(jìn)一步，小腸細(xì)胞包括小腸組織上皮細(xì)胞如FHs 74lnt、INT407、MODE
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K、PEC
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J2、CEIEC，小腸粘膜上皮細(xì)胞，小腸隱窩上皮細(xì)胞，小腸內(nèi)皮細(xì)胞，小腸內(nèi)分泌細(xì)胞如STC
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1，小腸平滑肌細(xì)胞，小腸成纖維細(xì)胞如RSIFC；小腸癌細(xì)胞包括HIC
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2細(xì)胞。
[0021]在本專利技術(shù)中，小腸部位的細(xì)胞也可以進(jìn)行基因修飾或改造或誘導(dǎo)以使其對心臟組織具有靶向性，包括但不限于基因改造、基因修飾、基因過表達(dá)或刪除、分子修飾等；小腸部位的細(xì)胞分泌的外泌體也可以進(jìn)行表面修飾或改造以使其對心臟組織具有靶向性，包括但不限于表面蛋白修飾、表面蛋白改造、表面小分子修飾等。
[0022]本專利技術(shù)第二方面提供了一種本專利技術(shù)第一方面所述的靶向外泌體的制備方法，包括以下步驟：
[0023]培養(yǎng)細(xì)胞，獲取細(xì)胞培養(yǎng)液；
[0024]離心，取上清液；
[0025]二次離心，取上清液；
[0026]再次離心，緩沖液重懸沉淀獲得靶向外泌體。
[0027]進(jìn)一步，步驟2)離心條件為2000g離心10min。
[0028]進(jìn)一步，步驟3)離心條件為10000g離心30min。
[0029]進(jìn)一步，步驟4)離心條件為100000g離心2h。
[0030]進(jìn)一步，步驟4)所述的緩沖液為PBS。
[0031]進(jìn)一步，所述細(xì)胞選自小腸部位的細(xì)胞。
[0032]本專利技術(shù)第三方面提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物包括本專利技術(shù)第一方面所述的靶向外泌體；和治療劑/預(yù)防劑。
[0033]進(jìn)一步，所述治療劑或預(yù)防劑包括小分子化學(xué)藥物、肽類或蛋白質(zhì)藥物、抗體、酶、細(xì)胞因子、激素、抗生素、疫苗和/或核酸類藥物。所述治療劑或預(yù)防劑可以是任何常規(guī)藥物，只要其能起到治療心臟疾病即可。
[0034]進(jìn)一步，所述核酸類藥物包括質(zhì)粒DNA、mRNA、microRNA、小干擾RNA、shRNA、有義RNA、反義寡核苷酸、適配體。
[0035]進(jìn)一步，所述肽類或蛋白質(zhì)藥物包括LDL受體。
[0036]進(jìn)一步，所述細(xì)胞因子包括TPO、EPO、tPA、MyOD、血管內(nèi)皮生長因子和堿性成纖維內(nèi)皮細(xì)胞生長因子。
[0037]進(jìn)一步，細(xì)胞因子包括血管內(nèi)皮生長因子。
[0038]進(jìn)一步，所述血管內(nèi)皮生長因子選自VEGF。
[0039本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點】
【技術(shù)特征摘要】
1.一種心臟組織靶向外泌體，其特征在于，所述靶向外泌體來源于小腸部位的細(xì)胞；優(yōu)選地，所述細(xì)胞選自正常細(xì)胞或其衍生株、癌細(xì)胞；優(yōu)選地，所述細(xì)胞來源于人或非人類哺乳動物；優(yōu)選地，所述非人類哺乳動物包括非人靈長類動物、嚙齒動物、牛、豬、羊、犬、兔、貓、馬；優(yōu)選地，所述嚙齒動物包括小鼠、大鼠、倉鼠、豚鼠。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向外泌體，其特征在于，所述小腸部位的細(xì)胞包括小腸細(xì)胞、小腸癌細(xì)胞、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞誘導(dǎo)的小腸細(xì)胞；優(yōu)選地，小腸細(xì)胞包括小腸組織上皮細(xì)胞如FHs 74lnt、INT407、MODE
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K、PEC
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J2、CEIEC，小腸粘膜上皮細(xì)胞，小腸隱窩上皮細(xì)胞，小腸內(nèi)皮細(xì)胞，小腸內(nèi)分泌細(xì)胞如STC
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1，小腸平滑肌細(xì)胞，小腸成纖維細(xì)胞如RSIFC；小腸癌細(xì)胞包括HIC
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2細(xì)胞。3.權(quán)利要求1或2所述的靶向外泌體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：1)培養(yǎng)細(xì)胞，獲取細(xì)胞培養(yǎng)液；2)離心，取上清液；3)二次離心，取上清液；4)再次離心，緩沖液重懸沉淀獲得靶向外泌體；優(yōu)選地，其特征在于，步驟2)離心條件為2000g離心10min；優(yōu)選地，步驟3)離心條件為10000g離心30min；優(yōu)選地，步驟4)離心條件為100000g離心2h；優(yōu)選地，步驟4)所述的緩沖液為PBS；優(yōu)選地，所述細(xì)胞選自小腸部位的細(xì)胞。4.一種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包括權(quán)利要求1或2所述的靶向外泌體；和治療劑/預(yù)防劑；優(yōu)選地，所述治療劑或預(yù)防劑包括小分子化學(xué)藥物、肽類或蛋白質(zhì)藥物、抗體、酶、細(xì)胞因子、激素、抗生素、疫苗和/或核酸類藥物；優(yōu)選地，所述核酸類藥物包括質(zhì)粒DNA、mRNA、microRNA、小干擾RNA、shRNA、有義RNA、反義寡核苷酸、適配體；優(yōu)選地，所...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：姜海濤，
申請(專利權(quán))人：姜海濤，
類型：發(fā)明
國別省市：
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