本發明專利技術涉及一種百合愈傷組織培養方法與百合試管苗和百合人工種子的培養方法以及穴盤培養基，屬于植物培養技術領域。本發明專利技術提供了一種百合愈傷組織的培養方法，包括如下步驟：(1)將百合珠芽接種于百合啟動培養基上，得到百合苗；(2)剪取步驟(1)所述的百合苗的葉片作為外植體，將所述的外植體接種于愈傷組織誘導培養基中，培養30～40d，得到百合愈傷組織。利用該愈傷組織可以制備百合試管苗以及百合人工種子，為百合快速繁育提供了可以依據。為百合快速繁育提供了可以依據。為百合快速繁育提供了可以依據。
【技術實現步驟摘要】
一種百合愈傷組織培養方法與百合試管苗和百合人工種子的培養方法以及穴盤培養基
[0001]本專利技術涉及植物培養
，尤其涉及一種百合愈傷組織培養方法與百合試管苗和百合人工種子的培養方法以及穴盤培養基。
技術介紹
[0002]百合是百合科(Liliaceae)百合屬(Lilium)多年生鱗莖草本植物。中國是百合屬植物的主要原產地之一，全世界百合屬植物大約94個原生種，主要分布于北半球溫帶和寒帶地區，其中亞洲分布的百合屬植物約58種，歐洲分布的約12種，北美洲分布的約24種。百合花型碩大、花姿優美，氣味芳香，在鮮切花、盆花和園林綠地中廣泛應用，除了具有較高的觀賞價值外，還具有重要的食用和藥用價值，其鱗莖具有消炎、止咳、鎮定的功效。百合傳統的繁殖方式主要有珠芽繁殖、小子球繁殖和鱗片繁殖3種方式，通過小鱗莖進行分株繁殖，一株百合每年只能得到1～3個小鱗莖，因而繁殖速度極慢。由于百合的常規繁殖率低，易感染病毒，所以對繁殖技術提出了更高的要求，人工繁殖技術對百合具有重要意義。開發一種不僅繁殖速度快，還能保持百合優良性狀的培養方法是目前需要解決的問題。
[0003]基于此，提出本專利技術。
技術實現思路
[0004]本專利技術的目的在于提供體系穩定、出苗率高、簡單實用的百合愈傷組織培養方法與百合試管苗和百合人工種子的培養方法以及穴盤培養基，為百合繁育提供一種新途徑。
[0005]為了實現上述專利技術目的，本專利技術提供以下技術方案：
[0006]本專利技術提供了一種百合愈傷組織的培養方法，包括如下步驟：
[0007](1)將百合珠芽接種于百合啟動培養基上，得到百合苗；
[0008](2)剪取步驟(1)所述的百合苗的葉片作為外植體，將所述的外植體接種于愈傷組織誘導培養基中，培養30～40d，得到百合愈傷組織。
[0009]作為優選，步驟(1)所述百合珠芽為經過消毒的百合珠芽；
[0010]所述消毒的試劑為酒精和/或氯化汞；
[0011]所述酒精的濃度為70～80vt％；所述酒精消毒的時間為28～32s；
[0012]所述氯化汞的濃度為0.08～0.12wt％；所述氯化汞消毒的時間為5～7min；
[0013]步驟(1)所述百合啟動培養基以MS培養基為基礎還包括如下濃度的組分：
[0014]6?
BA 1.5～2.5mg/mL、NAA 0.15～0.25mg/mL、蔗糖60～90g/L、瓊脂7.0～7.5g/L；
[0015]所述百合啟動培養基的pH為5.8～6.0。
[0016]作為優選，步驟(2)所述外植體的大小為0.4～0.6cm
×
0.4～0.6cm；
[0017]步驟(2)所述愈傷組織誘導培養基以MS培養基為基礎還包括如下濃度的組分：
[0018]NAA 0.5～2.0mg/mL、2,4
?
D 0.5～2.0mg/mL、瓊脂7.0～7.5g/L、蔗糖25～30g/L；
[0019]所述愈傷組織誘導培養基的pH為5.8～6.0。
[0020]本專利技術還提供了利用所述的培養方法培育得到的百合愈傷組織培育百合試管苗的方法，包括如下步驟：
[0021](4.1)將百合愈傷組織切成小塊，將所述的小塊接種于叢生芽誘導培養基中，培養20～30d，得到百合叢生芽；
[0022](4.2)將百合叢生芽分成單芽后，將所述的單芽接種于生根培養基中，培養25～35d，得到百合試管苗。
[0023]作為優選，步驟(4.1)所述小塊的大小為0.3～0.5cm
×
0.3～0.5cm
×
0.1～0.3cm；
[0024]步驟(4.1)所述叢生芽誘導培養基以MS培養基為基礎還包括如下濃度的組分：
[0025]6?
BA 1.0～3.0mg/mL、NAA 0～0.2mg/mL、IAA0～0.2mg/mL、瓊脂7.0～7.5g/L、蔗糖45～60g/L；
[0026]所述叢生芽誘導培養基的pH為5.8～6.0。
[0027]作為優選，步驟(4.2)所述生根培養基以MS培養基為基礎，還包括如下濃度的組分：
[0028]NAA 0.4～0.6mg/mL、瓊脂7.0～7.5g/L、蔗糖25～30g/L；
[0029]所述生根培養基的pH為5.8～6.0；
[0030]所述生根培養基中還包括濃度為0.8～1.2g/L的活性炭。
[0031]本專利技術還提供了利用所述的培養方法培育得到的百合愈傷組織培育百合人工種子的方法，包括如下步驟：
[0032](7.1)將百合愈傷組織接種于懸浮培養基中，搖床培養28～32d，得到預培養的百合體細胞；將所述的預培養百合體細胞轉接入固體培養基中，繼續培養14～21d，得到百合體細胞胚；
[0033](7.2)將步驟(7.1)所述的百合體細胞胚與包埋劑混合，得到繁殖體，將所述的繁殖體與凝固劑反應14～16min，得到百合人工種子。
[0034]作為優選，步驟(7.1)所述懸浮培養基以MS培養基為基礎還包括如下濃度的組分：
[0035]6?
BA 1.0～3.0mg/mL、NAA 0.1～0.3mg/mL、蔗糖25～30g/L；
[0036]所述懸浮培養基的pH為5.8～6.0；
[0037]所述搖床培養為暗培養；
[0038]所述搖床培養的溫度為23～27℃；
[0039]所述搖床培養的轉速為90～110rpm；
[0040]所述搖床培養時每14～16d更換懸浮培養基1次；
[0041]步驟(7.1)所述固體培養基以MS培養基為基礎還包括如下濃度的組分：
[0042]6?
BA 1.0～3.0mg/mL、NAA 0.1～0.3mg/mL、蔗糖25～30g/L、瓊脂7.0～7.5g/L；
[0043]所述固體培養基的pH為5.8～6.0。
[0044]作為優選，所述包埋劑以MS培養基為基礎還包括如下濃度的組分：
[0045]6?
BA 1.5～2.5mg/mL、NAA 0.15～0.25mg/mL、蔗糖25～30g/L；
[0046]所述包埋劑的pH為5.8～6.0；
[0047]所述凝固劑以水為溶劑包括如下濃度的組分：海藻酸鈉3～5wt％、氯化鈣1.5～2.5wt％。
[0048]本專利技術還提供了一種提高所述的方法得到的百合人工種子萌發率的穴盤基質，包
括如下質量比的組分：蛭石：椰糠：營養土為0.5～1.5:0～1.5:1.5～2.5。
[0049]本專利技術提供了一種百合愈傷組織培養方法與百合試管苗和百合人工種子的培養方法以及穴盤培養基，本專利技術的方法與現有技術的方法的優勢在于：
[0050]利用本專利技術的方法可以得到大量的百合愈傷組織。
[0051]利用本專利技術培育百合人工種子的方法得到的百合本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
1.一種百合愈傷組織的培養方法，其特征在于，包括如下步驟：(1)將百合珠芽接種于百合啟動培養基上，得到百合苗；(2)剪取步驟(1)所述的百合苗的葉片作為外植體，將所述的外植體接種于愈傷組織誘導培養基中，培養30～40d，得到百合愈傷組織。2.根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于，步驟(1)所述百合珠芽為經過消毒的百合珠芽；所述消毒的試劑為酒精和/或氯化汞；所述酒精的濃度為70～80vt％；所述酒精消毒的時間為28～32s；所述氯化汞的濃度為0.08～0.12wt％；所述氯化汞消毒的時間為5～7min；步驟(1)所述百合啟動培養基以MS培養基為基礎還包括如下濃度的組分：6
?
BA 1.5～2.5mg/mL、NAA 0.15～0.25mg/mL、蔗糖60～90g/L、瓊脂7.0～7.5g/L；所述百合啟動培養基的pH為5.8～6.0。3.根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于，步驟(2)所述外植體的大小為0.4～0.6cm
×
0.4～0.6cm；步驟(2)所述愈傷組織誘導培養基以MS培養基為基礎還包括如下濃度的組分：NAA 0.5～2.0mg/mL、2,4
?
D 0.5～2.0mg/mL、瓊脂7.0～7.5g/L、蔗糖25～30g/L；所述愈傷組織誘導培養基的pH為5.8～6.0。4.利用權利要求1～3任意一項所述的培養方法培育得到的百合愈傷組織培育百合試管苗的方法，其特征在于，包括如下步驟：(4.1)將百合愈傷組織切成小塊，將所述的小塊接種于叢生芽誘導培養基中，培養20～30d，得到百合叢生芽；(4.2)將百合叢生芽分成單芽后，將所述的單芽接種于生根培養基中，培養25～35d，得到百合試管苗。5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(4.1)所述小塊的大小為0.3～0.5cm
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0.3～0.5cm
×
0.1～0.3cm；步驟(4.1)所述叢生芽誘導培養基以MS培養基為基礎還包括如下濃度的組分：6
?
BA 1.0～3.0mg/mL、NAA 0～0.2mg/mL、IAA0～0.2mg/mL、瓊脂7.0～7.5g/L、蔗糖45～60g/L；所述叢生芽誘導培養...
【專利技術屬性】
技術研發人員：郭蘭萍，張成才，康傳志，王升，王紅陽，周濤，
申請(專利權)人：中國中醫科學院中藥研究所，
類型：發明
國別省市：
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