一種高純度低分子量肝素的制備方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種高純度低分子量肝素的制備方法，屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，肝素用水溶解后，在酸性條件下加入亞硝酸鈉降解，再加入硼氫化鈉，使成降解液A；取降解液A適量，調(diào)節(jié)pH值大于7，然后再緩慢調(diào)節(jié)pH值小于7，或者調(diào)節(jié)pH值小于7，然后再緩慢上調(diào)至pH值大于7，以pH變化為縱坐標(biāo)，以滴加的滴定液體積為橫坐標(biāo)，做二維曲線，記錄拐點(diǎn)的pH值；把降解液A調(diào)到第一個(gè)拐點(diǎn)的pH值，過濾，然后調(diào)節(jié)pH值到第二個(gè)拐點(diǎn)，過濾，全部拐點(diǎn)調(diào)節(jié)并過濾完畢后得高質(zhì)量的降解液B；降解液B再經(jīng)過純化分級(jí)干燥即成高純度低分子量肝素。本發(fā)明專利技術(shù)極大地提高了低分子量肝素產(chǎn)品質(zhì)量，低分子量肝素產(chǎn)品無色，澄清度得到提高，無乳光，吸光度極低。吸光度極低。吸光度極低。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種高純度低分子量肝素的制備方法


[0001]本專利技術(shù)屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種純化低分子量肝素的方法。

技術(shù)介紹

[0002]低分子量肝素是由普通肝素(SH)分離得到的一些細(xì)分或裂解后產(chǎn)生的片斷，分子量低，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，是近十年發(fā)展起來的新一代肝素類抗凝藥物。低分子量肝素類產(chǎn)品因分子量較小，不易被第IV因子中和，抗凝效果和纖溶作用得以增強(qiáng)，而抗血小板、影響血小板功能、影響血液凝固性、誘發(fā)出血的作用大為減弱，加之生物利用度高達(dá)98％，量效關(guān)系明確，抗凝效果易于預(yù)測(cè)，血漿半衰期較普通肝素長(zhǎng)2～3倍，不易透過胎盤屏障，可以應(yīng)用于孕婦，給藥方便，同時(shí)具有快速和持續(xù)的抗血栓形成作用，改善血流動(dòng)力學(xué)，因而頗受臨床青睞。
[0003]低分子量肝素是由肝素經(jīng)過化學(xué)降解、生物酶降解或物理降解得到的。由于原料肝素的結(jié)構(gòu)復(fù)雜性和肝素中帶有的不確定雜質(zhì)，從而使用肝素制成的低分子量肝素的質(zhì)量存在很大差異，具體體現(xiàn)在產(chǎn)品澄清度不好，制成品有乳光，顏色發(fā)黃甚至顏色深至棕紅色，有的批次的產(chǎn)品吸光度高等等。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

[0004]為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本專利技術(shù)的目的是提供一種高純度低分子量肝素的制備方法。專利技術(shù)人做了大量的試驗(yàn)研究后，發(fā)現(xiàn)在用亞硝酸鈉降解肝素使成低分子量肝素的過程中存在一種現(xiàn)象，在特定的條件下，調(diào)節(jié)降解液pH值時(shí)出現(xiàn)非線性變化，并且曲線變化的同時(shí)出現(xiàn)一個(gè)或多個(gè)拐點(diǎn)。在此拐點(diǎn)上通過簡(jiǎn)單的過濾操作即可達(dá)到提高低分子量肝素澄清度、去除顏色和降低吸光度的目的，經(jīng)過本專利技術(shù)的高純度低分子量肝素的制備方法極大地提高了低分子量肝素產(chǎn)品質(zhì)量。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)的技術(shù)方案為：
[0006]一方面，一種高純度低分子量肝素的制備方法，包括以下步驟：
[0007](1)肝素用水溶解后，在酸性條件下加入亞硝酸鈉降解，再加入硼氫化鈉，使成降解液A；
[0008](2)取降解液A適量，調(diào)節(jié)pH值大于7，然后再緩慢調(diào)節(jié)pH值小于7，或者調(diào)節(jié)pH值小于7，然后再緩慢上調(diào)至pH值大于7，以pH變化為縱坐標(biāo)，以滴加的滴定液體積為橫坐標(biāo)，做二維曲線，記錄拐點(diǎn)的pH值；
[0009](3)把降解液A調(diào)到第一個(gè)拐點(diǎn)的pH值，過濾，然后調(diào)節(jié)pH值到第二個(gè)拐點(diǎn)，過濾，全部拐點(diǎn)調(diào)節(jié)并過濾完畢后得高質(zhì)量的降解液B；
[0010](4)降解液B再經(jīng)過純化分級(jí)干燥即成高純度低分子量肝素。
[0011]本專利技術(shù)的有益效果為：
[0012]專利技術(shù)人研究發(fā)現(xiàn)在用亞硝酸鈉降解肝素使成低分子量肝素的過程中存在一種現(xiàn)象，在特定的條件下，調(diào)節(jié)降解液pH值時(shí)出現(xiàn)非線性變化，并且曲線變化的同時(shí)出現(xiàn)一個(gè)或
多個(gè)拐點(diǎn)。在此拐點(diǎn)上通過簡(jiǎn)單的過濾操作即可達(dá)到提高低分子量肝素澄清度、去除顏色和降低吸光度的目的。
[0013]經(jīng)過本專利技術(shù)的高純度低分子量肝素鈉的制備方法極大地提高了低分子量肝素產(chǎn)品質(zhì)量，低分子量肝素產(chǎn)品無色，澄清度得到提高，無乳光，吸光度極低。
附圖說明
[0014]構(gòu)成本專利技術(shù)的一部分的說明書附圖用來提供對(duì)本專利技術(shù)的進(jìn)一步理解，本專利技術(shù)的示意性實(shí)施例及其說明用于解釋本專利技術(shù)，并不構(gòu)成對(duì)本專利技術(shù)的不當(dāng)限定。
[0015]圖1為本專利技術(shù)實(shí)施例1高純度低分子量肝素鈉的制備方法中降解液A的pH變化曲線示意圖；
[0016]圖2為本專利技術(shù)實(shí)施例4高純度低分子量肝素鈉的制備方法中降解液A的pH變化曲線示意圖。
具體實(shí)施方式
[0017]應(yīng)該指出，以下詳細(xì)說明都是示例性的，旨在對(duì)本專利技術(shù)提供進(jìn)一步的說明。除非另有指明，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本專利技術(shù)所屬
的普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。
[0018]需要注意的是，這里所使用的術(shù)語(yǔ)僅是為了描述具體實(shí)施方式，而非意圖限制根據(jù)本專利技術(shù)的示例性實(shí)施方式。如在這里所使用的，除非上下文另外明確指出，否則單數(shù)形式也意圖包括復(fù)數(shù)形式，此外，還應(yīng)當(dāng)理解的是，當(dāng)在本說明書中使用術(shù)語(yǔ)“包含”和/或“包括”時(shí)，其指明存在特征、步驟、操作、器件、組件和/或它們的組合。
[0019]鑒于現(xiàn)有低分子量肝素的制備方法無法得到無色、無乳光、吸光度低的高純度低分子量肝素，本專利技術(shù)提出了一種高純度低分子量肝素的制備方法。
[0020]本專利技術(shù)的一種典型實(shí)施方式，提供一種高純度低分子量肝素鈉的制備方法，包括以下步驟：
[0021](1)肝素用水溶解后，在酸性條件下加入亞硝酸鈉降解，再加入硼氫化鈉，使成降解液A；
[0022](2)取降解液A適量，調(diào)節(jié)pH值大于7，然后再緩慢調(diào)節(jié)pH值小于7，或者調(diào)節(jié)pH值小于7，然后再緩慢上調(diào)至pH值大于7，以pH變化為縱坐標(biāo)，以滴加的滴定液體積為橫坐標(biāo)，做二維曲線，記錄拐點(diǎn)的pH值；
[0023](3)把降解液A調(diào)到第一個(gè)拐點(diǎn)的pH值，過濾，然后調(diào)節(jié)pH值到第二個(gè)拐點(diǎn)，過濾，全部拐點(diǎn)調(diào)節(jié)并過濾完畢后得高質(zhì)量的降解液B；
[0024](4)降解液B再經(jīng)過純化分級(jí)干燥即成高純度低分子量肝素。
[0025]本專利技術(shù)的低分子量肝素限于亞硝酸鈉降解生產(chǎn)低分子量肝素的工藝，該工藝是最常見的工藝，是應(yīng)用最廣泛的工藝。
[0026]該實(shí)施方式的一些實(shí)施例中，所述低分子量肝素包括低分子量肝素鈉、低分子量肝素鈣。
[0027]該實(shí)施方式的一些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)pH值至10.0，然后再緩慢調(diào)節(jié)pH值至4.0，或，調(diào)節(jié)pH值至4.0，然后再緩慢上調(diào)pH值至10.0。
[0028]該實(shí)施方式的一些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)pH值至8.0，然后再緩慢調(diào)節(jié)pH值至5.0，或，調(diào)節(jié)pH值至5.0，然后再緩慢上調(diào)pH值至8.0。本專利技術(shù)通過測(cè)量發(fā)現(xiàn)，降解液A最敏感的pH區(qū)間范圍為5
?
8。每一批產(chǎn)品的拐點(diǎn)也不相同。
[0029]該實(shí)施方式的一些實(shí)施例中，用精密pH計(jì)測(cè)量降解液的pH值。
[0030]該實(shí)施方式的一些實(shí)施例中，所述滴定液包括酸性滴定液、堿性滴定液。本專利技術(shù)并不限定滴定液的種類，可實(shí)現(xiàn)pH的調(diào)節(jié)即可。
[0031]優(yōu)選的，所述酸性滴定液包括但不限于鹽酸滴定液、硫酸滴定液、磷酸滴定液。
[0032]優(yōu)選的，所述堿性滴定液包括但不限于氫氧化鈉滴定液、碳酸鈉滴定液,碳酸氫鈉滴定液。
[0033]該實(shí)施方式的一些實(shí)施例中，滴定液的濃度越低調(diào)節(jié)越精準(zhǔn)。
[0034]優(yōu)選的，滴定液的濃度為0.5
?
3mol/l，進(jìn)一步優(yōu)選為0.5mol/l。
[0035]該實(shí)施方式的一些實(shí)施例中，所述純化分級(jí)為醇沉分級(jí)。
[0036]該實(shí)施方式的一些實(shí)施例中，酸性條件，pH值為2.5—3；亞硝酸鈉的加入量為肝素質(zhì)量的2.0％
?
3.0％；硼氫化鈉的加入量為肝素質(zhì)量的1％—2％。
[0037]該實(shí)施方式的一些實(shí)施例中，在酸性條件下加入亞硝酸鈉降解，降解結(jié)束后調(diào)節(jié)pH值到10左右，再加入硼氫化鈉還原。
[0038]為了使得本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠更加清楚地了解本專利技術(shù)的技術(shù)方案，以下將結(jié)合具體的實(shí)施例詳細(xì)說本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】

【技術(shù)特征摘要】
1.一種高純度低分子量肝素鈉的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)肝素用水溶解后，在酸性條件下加入亞硝酸鈉降解，再加入硼氫化鈉，使成降解液A；(2)取降解液A適量，調(diào)節(jié)pH值大于7，然后再緩慢調(diào)節(jié)pH值小于7，或者調(diào)節(jié)pH值小于7，然后再緩慢上調(diào)至pH值大于7，以pH變化為縱坐標(biāo)，以滴加的滴定液體積為橫坐標(biāo)，做二維曲線，記錄拐點(diǎn)的pH值；(3)把降解液A調(diào)到第一個(gè)拐點(diǎn)的pH值，過濾，然后調(diào)節(jié)pH值到第二個(gè)拐點(diǎn)，過濾，全部拐點(diǎn)調(diào)節(jié)并過濾完畢后得高質(zhì)量的降解液B；(4)降解液B再經(jīng)過純化分級(jí)干燥即成高純度低分子量肝素。2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述低分子量肝素包括低分子量肝素鈉、低分子量肝素鈣。3.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，調(diào)節(jié)pH值至10.0，然后再緩慢調(diào)節(jié)pH值至4.0，或，調(diào)節(jié)pH值至4.0，然后再緩慢上調(diào)pH值至10.0。4.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，調(diào)節(jié)pH值至8.0，然后再緩慢調(diào)節(jié)pH值至5.0，或，調(diào)節(jié)pH值至5.0，然后...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：文良柱，李玲，紀(jì)紅娟，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：山東萬邦賽諾康生化制藥股份有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：